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1、目的:研究肌苷(Inosine)對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌流后神經(jīng)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞色素C(CytC)、卡配因(Calpain)基因表達(dá)的影響,從細(xì)胞凋亡基因調(diào)控角度探討Inosine的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制.方法:應(yīng)用線栓法建立SD大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)再灌流模型,腹腔注射Inosine注射液(100mg/kg),應(yīng)用原位末端標(biāo)記(TUNEL)和原位雜交技術(shù)分別觀察大鼠腦缺血90min再灌流2h、6h、12h、1d、2d、3d、7d和14d
2、等不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)細(xì)胞凋亡、CytC mRNA和Capain mRNA表達(dá)的變化.結(jié)果:(1)細(xì)胞凋亡:腦缺血再灌流后2h皮層區(qū)與紋狀體區(qū)即出現(xiàn)凋亡細(xì)胞,再灌流6h時(shí)明顯增加,皮層區(qū)1d達(dá)高峰,紋狀體區(qū)2d達(dá)高峰,之后逐漸減少,至14d接近于假手術(shù)組水平.經(jīng)Inosine治療后,皮層和紋狀體區(qū)凋亡神經(jīng)細(xì)胞減少,其中再灌流12h、1d、2d、3d、7d較對(duì)照組有顯著差異.(2)CytC:腦缺血再灌流后皮層區(qū)與紋狀體區(qū)CytC mRNA的表達(dá)
3、于2h逐漸出現(xiàn),皮層區(qū)12h達(dá)高峰,紋狀體區(qū)1d達(dá)高峰,以后逐漸下降,7d、14d明顯減少,但仍明顯高于假手術(shù)組.Inosine治療組再灌流12h及以后時(shí)間點(diǎn),CytC mRNA在皮層區(qū)和紋狀體區(qū)的表達(dá)較對(duì)照組有顯著降低.(3)Calpain:腦缺血再灌流后皮層區(qū)和紋狀體區(qū)Calpain mRNA的表達(dá)于2h逐漸出現(xiàn),6h時(shí)明顯增加,皮層區(qū)12h達(dá)高峰,以后逐漸下降;紋狀體區(qū)1d達(dá)高峰,3d后逐漸降低,7d、14d明顯減少,但仍明顯高于
4、假手術(shù)組.Inosine治療組再灌流12h及以后時(shí)間點(diǎn),Calpain mRNA在皮層區(qū)和紋狀體區(qū)的表達(dá)較對(duì)照組有顯著降低.結(jié)論:腦缺血再灌流后可誘導(dǎo)皮層區(qū)和紋狀體區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡,細(xì)胞凋亡是一個(gè)動(dòng)態(tài)的演變過程.腦缺血再灌流后CytC mRNA表達(dá)時(shí)相和高峰先于凋亡細(xì)胞出現(xiàn),提示CytC自線粒體釋放入胞漿是凋亡發(fā)生的關(guān)鍵的一步.腦缺血再灌流后Calpain mRNA表達(dá)的時(shí)序和區(qū)域與CytC一致,均早于細(xì)胞凋亡的發(fā)生,說明在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中
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