趨化因子CCL2-CCR2在人早孕期絨毛和滋養(yǎng)細胞的功能性表達.pdf

1、趨化因子是一組小分子量(8-10KD)蛋白質，由70-90個氨基酸組成，結構和功能上具有一定的相關性，均通過與細胞膜表面相應的G蛋白偶聯受體結合并發(fā)揮各種生物學作用。早孕母-胎界面含有豐富的趨化因子及其受體，存在著復雜交織的調控網絡，趨化因子及其受體構成了滋養(yǎng)細胞與蛻膜細胞的相互聯系，在母-胎免疫耐受中發(fā)揮調節(jié)作用。作為最早被鑒定的CC類趨化因子之一，CCL2和受體CCR2結合后，參與炎癥、動脈粥樣硬化、腫瘤等相關疾病的發(fā)生與發(fā)展；但關

2、于CCL2在早孕母-胎界面的表達和在母-胎免疫調節(jié)中的作用有待研究完善。我們課題組前期研究發(fā)現，人早孕蛻膜組織和蛻膜基質細胞均高水平轉錄和翻譯CCL2和CCR2；CCL2/CCR2可能參與蛻膜基質細胞與蛻膜免疫活性細胞間相互對話和交流，并維持母-胎界面Th2型免疫偏移。本課題將進一步完善前期工作，擬研究CCL2/CCR2在人早孕絨毛組織和滋養(yǎng)細胞中的表達和分泌，以解析其在母、胎界面的生物學調節(jié)作用。
　　1.趨化因子CCL2/CC

3、R2在早孕絨毛組織的表達
　　本研究首先從轉錄和翻譯水平探討趨化因子CCL2及其相應配體CCR2在人早孕絨毛組織的表達。采用半定量RT-PCR和免疫組織化學法研究正常早孕人絨毛組織趨化因子CCL2及其相應配體CCR2的表達。結果顯示：絨毛組織中等度轉錄和翻譯趨化因子CCL2及其受體CCR2。
　　2.趨化因子CCL2及其受體CCR2在早孕絨毛滋養(yǎng)細胞的功能表達
　　采用免疫細胞化學的方法分析CCL2/CCR2在早孕絨毛

4、滋養(yǎng)細胞和滋養(yǎng)細胞系Bewo細胞的定位表達。結果發(fā)現：滋養(yǎng)細胞和Bewo細胞中等度表達CCL2/CCR2。原代培養(yǎng)人滋養(yǎng)細胞48小時，收集培養(yǎng)上清檢測CCL2的分泌水平。ELISA分析發(fā)現：滋養(yǎng)細胞能持續(xù)分泌CCL2，當種植密度為1×106cells/ml時，48小時累積分泌濃度為21.42±2.09ng/ml。應用外源性CCL2、CCR2受體拮抗劑RS102895、抗CCL2單克隆抗體及ERK/MAPK抑制劑U0126單獨或共同處理滋

5、養(yǎng)細胞；然后用3H-TdR摻入法分析其對滋養(yǎng)細胞增殖能力的影響。結果發(fā)現：外源性CCL2能促進滋養(yǎng)細胞的增殖，抗CCL2單克隆抗體能拮抗內源性CCL2對人滋養(yǎng)細胞的促增殖作用。CCR2受體拮抗劑RS10289及ERK/MAPK抑制劑U0126能拮抗外源性CCL2對人滋養(yǎng)細胞的促增殖作用。
　　綜上所述，本研究分析了CCL2/CCR2在滋養(yǎng)細胞的表達；闡明了早孕滋養(yǎng)細胞通過自分泌CCL2促進自身增殖，可能有利于胎盤早期發(fā)育和結構穩(wěn)定