KAI1-CD82在人早孕期母-胎界面的表達(dá)及其對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲性的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、正常妊娠類似于成功的同種異體移植，母體對(duì)攜帶父系抗原的胚胎不僅不排斥，而且允許胎兒在子宮內(nèi)生長(zhǎng)發(fā)育直至分娩；這一過(guò)程有賴于獨(dú)特的母-胎界面免疫微環(huán)境，以及母體對(duì)胚胎抗原的免疫耐受狀態(tài)的建立和維持；同時(shí)還需要母-胎界面生物學(xué)功能的精密調(diào)控，特別是滋養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)及侵襲能力在正常早期妊娠的維持中至關(guān)重要；否則可能導(dǎo)致妊娠失敗，從而發(fā)生自然流產(chǎn)。 KAI1／CD82是多種腫瘤中普遍表達(dá)的一種轉(zhuǎn)移抑制基因，在抑制腫瘤細(xì)胞的活力、侵襲和轉(zhuǎn)移

2、中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。母-胎界面中滋養(yǎng)細(xì)胞具有侵襲母體蛻膜組織的能力，但相對(duì)于惡性腫瘤的侵襲來(lái)說(shuō)，滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲能力受到嚴(yán)格限制。本文擬研究轉(zhuǎn)移抑制基因KAI1／CD82在母-胎界面的作用機(jī)制，從而有助于胚泡植入及滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲調(diào)控的理解。 第一部分：轉(zhuǎn)移抑制基因KAI1／CD82在人早孕期母胎界面的表達(dá)。 目的：以早孕期正常妊娠為對(duì)照，探討腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KAI1／CD82在反復(fù)自然流產(chǎn)絨毛和蛻膜組織中的表達(dá)，為研究和

3、治療反復(fù)自然流產(chǎn)等妊娠疾患提供新線索。 方法：以胚胎植入與腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲相似為切入點(diǎn)，分別采用RT-PCR和Real-time PCR、免疫組化和Western-blot技術(shù)分析KAI1／CD82在人早孕期正常妊娠和反復(fù)自然流產(chǎn)的絨毛和蛻膜組織中的轉(zhuǎn)錄及翻譯水平。 結(jié)果：反復(fù)自然流產(chǎn)母-胎界面KAIl／CD82轉(zhuǎn)錄水平明顯高于正常妊娠(P<0．05)。反復(fù)自然流產(chǎn)的蛻膜組織KAI1／CD82蛋白表達(dá)明顯高于正常妊娠(P<0

4、．05)；而在絨毛組織中不表達(dá)KAI1／CD82蛋白。 結(jié)論：蛻膜組織轉(zhuǎn)移抑制基因KAI1／CD82高表達(dá)可能抑制滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲，從而導(dǎo)致自然流產(chǎn)的發(fā)生。 第二部分：人蛻膜基質(zhì)細(xì)胞通過(guò)表達(dá)KAI1/CD82降調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細(xì)胞細(xì)胞侵襲性。 目的：為了進(jìn)一步探討KAI1/CD82在母一胎界面的生物學(xué)作用，通過(guò)蛻膜基質(zhì)細(xì)胞(DSC)與滋養(yǎng)細(xì)胞(VCT)共培養(yǎng)模型探討KAI1/CD82在人母一胎界面的調(diào)節(jié)作用。 方法：

5、模擬DSC和VCT體內(nèi)接觸微環(huán)境，建立了人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞(ESC)和滋養(yǎng)細(xì)胞BEWO細(xì)胞株共培養(yǎng)體系，對(duì)ESC細(xì)胞進(jìn)行RNA干擾，探討ESC可能通過(guò)表達(dá)KAI1/CD82對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲性的調(diào)節(jié)作用。 結(jié)果：ESC與滋養(yǎng)細(xì)胞共培養(yǎng)促進(jìn)了滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲能力。采用RNA干擾技術(shù)成功地使ESC細(xì)胞KAI1/CD82基因沉默。沉默了KAI1/CD82基因的ESC細(xì)胞可導(dǎo)致BEWO細(xì)胞侵襲力進(jìn)一步增強(qiáng)。 結(jié)論：蛻膜基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的K

6、AI1/CD82可抑制滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲，KAI1/CD82在精密調(diào)控滋養(yǎng)細(xì)胞的過(guò)度侵襲中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用。 第三部分：KAI1/CD82不參與環(huán)孢素升調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲能力。 目的：擬探討KAI1/CD82是否參與環(huán)孢素(CsA)促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲能力。 方法：分離純化蛻膜基質(zhì)細(xì)胞，并采用流式細(xì)胞術(shù)和In-cell Western方法分析CsA處理后蛻膜基質(zhì)細(xì)胞CD82的表達(dá)。 結(jié)果：經(jīng)CsA不同濃度和不同