人類β—防御素—2基因轉(zhuǎn)染293細(xì)胞產(chǎn)物抗菌活性的研究.pdf

1、研究背景： 內(nèi)源性抗菌肽(endogenous peptides)是天然免疫的重要介質(zhì)，是炎癥反應(yīng)起保護(hù)作用的重要分子基礎(chǔ)，它是一種小分子陽(yáng)離子多肽類物質(zhì)，具有廣譜抗微生物活性。人類防御素根據(jù)半胱氨酸殘基位置及二硫鍵連接方式的不同，可分為α和β防御素兩類<'[5]>。人β-防御素(humanbeta-defensin，HBD)是一類由34-42個(gè)氨基酸殘基組成的陽(yáng)離子小肽，分子量較小(3.5-4.5 kDa)，分子內(nèi)含6個(gè)保守的

2、半胱氨酸殘基形成3個(gè)特征性的鏈內(nèi)二硫鍵，具有廣譜抗菌活性，是呼吸道、消化道、泌尿生殖道等粘膜防御系統(tǒng)中的重要介質(zhì)。目前已發(fā)現(xiàn)四種β-防御素，其中hBD-2是1997年在人的銀屑病損皮膚中發(fā)現(xiàn)，它由41個(gè)氨基酸組成，富含陽(yáng)離子氨基酸和半胱氨酸<'[9]>。通常情況下正常上皮細(xì)胞hBD-2不表達(dá)或者表達(dá)水平很低，但當(dāng)感染時(shí)，HBD-2的表達(dá)可以被TNF-a、IL-1β、LPS及細(xì)菌等多種原炎劑(Proinflammatory agents)

3、所誘導(dǎo)。HBD-2是呼吸道粘膜抗感染的重要分子基礎(chǔ)。肺囊性纖維性病變(Cysitc fibrosis)的病人很容易發(fā)生肺部感染，其發(fā)病機(jī)制與氣道上皮細(xì)胞離子通道調(diào)節(jié)蛋白(CFTR)基因缺陷，導(dǎo)致HBD-2的殺菌作用受到抑制有關(guān)。在后抗生素時(shí)代的今天，耐藥性微生物給人類健康帶來了新的威脅。人防御素獨(dú)特的作用機(jī)理，可能避免致病微生物對(duì)其產(chǎn)生耐藥性，因此具有良好的藥用前景。目前隨著基因工程的進(jìn)展，已有學(xué)者利用原核、真核微生物、植物、COS．7

4、細(xì)胞等研究防御素的表達(dá)。 研究目的： 本實(shí)驗(yàn)研究目的評(píng)估HBD-2基因轉(zhuǎn)染293細(xì)胞的培養(yǎng)產(chǎn)物蛋白質(zhì)的抗菌活性。為進(jìn)一步研究HBD-2基因轉(zhuǎn)染支氣管上皮細(xì)胞提供依據(jù)。 研究方法： 本實(shí)驗(yàn)利用分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建HBD-2真核表達(dá)重組質(zhì)粒pcDNA3.1-zeo-HBD-2，經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，收集培養(yǎng)上清，觀察它對(duì)多種細(xì)菌的抗菌活性。 研究結(jié)果： 本實(shí)驗(yàn)通過RT-PCR檢測(cè)到轉(zhuǎn)染細(xì)胞