萊菔硫烷改善肝細胞脂肪變及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)調(diào)控機制.pdf

1、非酒精性脂肪肝是高發(fā)且嚴重危害人類健康的飲食相關(guān)性肝損傷，從膳食角度尋找其防治因子具有重要意義。前期研究表明萊菔硫烷（SFN）可減輕酒精性肝損傷及調(diào)控脂代謝，但對非酒精性肝損傷的作用及機制尚無深入探討。本研究探討SFN預(yù)保護人肝細胞HHL-5后，能否抵抗油酸/軟脂酸對肝細胞脂代謝的病理性損傷，重點探究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激調(diào)控通路的作用，主要研究結(jié)果如下。
　　油酸/軟脂酸（1:2）作誘導(dǎo)劑，100-500μmol/L作用于HHL-5細胞，油

2、紅O染色檢測脂滴，再檢測肝細胞代謝酶和甘油三酯（TC）及膽固醇（TG），發(fā)現(xiàn)油酸/軟脂酸300μmol/L時，多數(shù)細胞內(nèi)出現(xiàn)紅色圓珠狀且非常飽滿的脂滴，誘導(dǎo)劑劑量增大，脂滴增多。油酸/軟脂酸（1:2）300μmol/L作用24h，TC和TG含量明顯升高（P<0.01），谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）與谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性顯著升高；誘導(dǎo)劑濃度大于400μmol/L，細胞死亡。因此，將油酸/軟脂酸（1:2）300μmol/L作用24h作為誘導(dǎo)肝細

3、胞HHL-5脂代謝異常的作用方式。SFN分別以時間效應(yīng)和劑量效應(yīng)方式預(yù)保護細胞，再用油酸/軟脂酸刺激24h，發(fā)現(xiàn)TG和TC含量與陽性對照組比較顯著降低（P<0.01），10μmol/L SFN對TG與TC含量降低最為明顯，抑制AST和ALT增加，抑制后水平與陰性對照組接近。
　　以內(nèi)質(zhì)網(wǎng)為切入點，透射電鏡檢測結(jié)果表明，油酸/軟脂酸作用細胞24h可引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，提示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能受損，同時影響線粒體功能，表現(xiàn)為線粒體顏色加深。S FN

4、預(yù)保護后能明顯改善內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的擴張，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)到陰性對照組水平，表現(xiàn)為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)成條索狀，并對線粒體損傷明顯改善。Real-time PCR檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)調(diào)控蛋白XBP1、GRP78轉(zhuǎn)錄水平的表達情況。發(fā)現(xiàn)油酸/軟脂酸（1:2）300μmol/L誘導(dǎo)肝細胞24h后，XBP1與GRP78mRNA表達量顯著增加。10μmol/L SFN使二者表達量比誘導(dǎo)組降低。SFN作用時間延長，XBP1與GRP78mRNA表達量減小，24h最顯著。流式細胞術(shù)