不同性質(zhì)脂肪酸對(duì)肝細(xì)胞脂代謝及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響和機(jī)制探討.pdf

1、脂肪酸水平升高在非酒精性脂肪肝的發(fā)病中具有重要作用。非脂肪組織中脂質(zhì)沉積導(dǎo)致細(xì)胞功能異常甚至細(xì)胞損傷稱(chēng)為脂毒性。有研究顯示，不同性質(zhì)的脂肪酸其脂毒性是不同的。本研究分別用不同濃度的油酸(不飽和脂肪酸)、軟脂酸(飽和脂肪酸)作用于肝細(xì)胞株L02，建立脂肪變性的肝細(xì)胞模型；探討不同性質(zhì)脂肪酸對(duì)脂肪變性肝細(xì)胞凋亡、GRP78表達(dá)的影響。 方法： 1.采用不同濃度的油酸、軟脂酸誘導(dǎo)肝細(xì)胞株L02，建立肝細(xì)胞脂肪變性的模型。

2、 2.實(shí)驗(yàn)分組：正常對(duì)照組、DMSO組、軟脂酸、油酸處理組。 3.MTI 法[1]篩選軟脂酸和油酸對(duì)L02 細(xì)胞的最佳作用濃度和作用時(shí)間。 4.油紅O染色光鏡下觀(guān)察細(xì)胞內(nèi)脂滴的變化；TG、MDA、AST、ALT試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TG含量、膜脂質(zhì)過(guò)氧化及肝細(xì)胞的損傷情況。 5.流式細(xì)胞術(shù)Annexin V-FITC/PI雙染檢測(cè)肝細(xì)胞株L02細(xì)胞凋亡率；AO/EB染色法觀(guān)察細(xì)胞凋亡形態(tài)；Western blot、R

3、T-PCR法檢測(cè)GRP78蛋白和mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1.用油酸、軟脂酸分別成功誘導(dǎo)建立L02肝細(xì)胞株脂肪變性模型。油紅O染色光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察：各時(shí)段對(duì)照組、DMSO組僅見(jiàn)少許橘紅色脂滴，軟脂酸各組的肝細(xì)胞均可見(jiàn)較多的橘紅色脂滴，油酸各組的肝細(xì)胞可見(jiàn)大量橘紅色脂滴，隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)更為顯著，同時(shí)伴有脂滴融合現(xiàn)象。 2.與對(duì)照組和DMSO組比較，軟脂酸組、油酸組培養(yǎng)上清中的TG、MDA、AST、ALT逐漸升高(P

4、＜0.05)。 3.AO/EB染色、ANNEXIN V FITC/PI雙染檢測(cè)均顯示：油酸組和軟脂酸組的細(xì)胞凋亡率隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，在48、72h時(shí)，二者與對(duì)照組和DMSO組比較，差異具有顯著性；軟脂酸組凋亡率高于油酸組，差異也具有顯著性(P＜0.05)。 4.Western-blot、RT-PCR結(jié)果均顯示：各組GRP78蛋白和mRNA均有不同程度的表達(dá)，但是，在24、48、72h時(shí)，軟脂酸組的GRP78蛋白和m

5、RNA表達(dá)均比對(duì)照組、DMSO組和油酸組明顯增加(P＜0.05)。 結(jié)論： 1.不同性質(zhì)的脂肪酸均可導(dǎo)致L02細(xì)胞發(fā)生以甘油三酯升高為特征的脂肪變性，軟脂酸比油酸更易引起脂變肝細(xì)胞的轉(zhuǎn)氨酶釋放、MDA產(chǎn)生增加以及細(xì)胞凋亡，提示飽和脂肪酸的脂毒性更強(qiáng)。 2.兩種類(lèi)型的脂肪酸均可引起不同程度的肝細(xì)胞凋亡。飽和脂肪酸可能通過(guò)上調(diào)葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78表達(dá)，啟動(dòng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激從而誘導(dǎo)脂肪變性的肝細(xì)胞凋亡，而油酸不能影響GRP78