旋毛形線蟲肌幼蟲代謝分泌抗原中血清學(xué)抗原的鑒定.pdf

1、目的:采用免疫共沉淀偶聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)分離和鑒定旋毛形線蟲肌幼蟲代謝分泌抗原，為篩選和鑒定旋毛形線蟲病的有效診斷抗原及疫苗候選分子奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:1.旋毛形線蟲感染新西蘭兔，采用硫酸銨沉淀法分離血清IgG;從感染肌肉中分離純化肌幼蟲并培養(yǎng)收集代謝分泌抗原。2.免疫共沉淀和SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離代謝分泌抗原。3.質(zhì)譜技術(shù)鑒定各蛋白質(zhì)條帶，利用肽片段質(zhì)譜圖分析鑒定血清學(xué)抗原。
　　 結(jié)果:1.間接酶聯(lián)免疫吸附試驗檢

2、測旋毛形線蟲感染新西蘭兔的血清抗體達(dá)1∶6400以上;采用硫酸銨沉淀法使兔血清IgG得到有效的分離。2.制備的代謝分泌抗原經(jīng)電泳分離鑒定在約175kDa、83kDa、60 kDa、32kDa處存在4條較清晰的蛋白質(zhì)條帶，提示旋毛形線蟲肌幼蟲培養(yǎng)24h后獲得了代謝分泌抗原。3.免疫共沉淀的旋毛形線蟲肌幼蟲代謝分泌抗原經(jīng)電泳分離獲得5條較清晰的蛋白質(zhì)條帶，免疫印跡分析發(fā)現(xiàn)在40kDa至60kDa之間存在旋毛形線蟲感染血清識別、正常兔血清不識

3、別的2條較強(qiáng)的蛋白質(zhì)條帶。4.切取約40kDa和約55kDa處的蛋白質(zhì)條帶進(jìn)行酶解和串聯(lián)質(zhì)譜分析，獲得4種蛋白質(zhì)分子，分別為絲氨酸蛋白酶、肌幼蟲特異性絲氨酸蛋白酶、43kDa分泌糖蛋白、53kDa代謝分泌抗原。
　　 結(jié)論:1.旋毛形線蟲肌幼蟲代謝分泌抗原經(jīng)分離和鑒定獲得4種蛋白質(zhì)分子，分別為絲氨酸蛋白酶、肌幼蟲特異性絲氨酸蛋白酶、43kDa分泌糖蛋白、53kDa代謝分泌抗原。2.免疫共沉淀偶聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)可有效分離和鑒定旋毛形線蟲