系統(tǒng)性紅斑狼瘡血管炎相關(guān)自身抗原的血清學(xué)篩選.pdf

1、目的：血管炎是系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)主要的發(fā)病機(jī)制之一。但目前對于與SLE血管炎相關(guān)的自身抗體尚不清楚，不能對其進(jìn)行早期診斷、及時(shí)治療和判斷預(yù)后。本研究擬利用SEREX技術(shù)篩選與SLE血管炎相關(guān)的自身抗原，進(jìn)一步證實(shí)SEREX篩選自身免疫性疾病相關(guān)自身抗原(自身抗體)的可行性；通過對篩選出自身抗原的功能分析，找出有助于SLE診斷、治療和判斷預(yù)后的自身抗體。 方法：收集四川大學(xué)華西醫(yī)院2004年10月至2005年1月SLE住

2、院病人血清作為篩選血清。病例入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合美國風(fēng)濕病學(xué)會(ACR)1982年制定的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)，且免疫學(xué)檢查ANA滴度≥1：320；(2)不伴有感染或者其它自身免疫性疾病。將8例SLE患者的混合血清作為篩選血清。利用人微血管內(nèi)皮細(xì)胞cDNA文庫(}tMVEC)，采用SEREX技術(shù)進(jìn)行血清學(xué)篩選。篩選出的陽性克隆經(jīng)內(nèi)部剪切、酶切鑒定及核苷酸序列測定，最后采用NCB工的網(wǎng)上序列分析軟件BLAST進(jìn)行生物信息學(xué)分析。有意義的陽性克隆再

3、分別利用正常人血清和單個(gè)SLE病人血清重復(fù)篩選一次，以排除假陽性克隆。 結(jié)果：1．第一輪共篩選出18個(gè)陽性反應(yīng)克隆。經(jīng)過第二輪篩選，獲得11個(gè)克隆為非自身IgG克隆。2.11個(gè)陽性克隆經(jīng)內(nèi)部剪切、酶切鑒定及核苷酸序列測定，最后通過BLAST軟件進(jìn)行生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，11個(gè)陽性克隆cDNA序列與3個(gè)已知的人類基因序列具有較高的同源性，核苷酸序列相似性分別為95％～99％。3.5個(gè)陽性克隆cDNA序列與人類基因序列SSA同源，4個(gè)

4、陽性克隆eDNA序列與人類基因序列SSB同源，2個(gè)陽性克隆cDNA序列與人類基因序列YB—l同源。其中YB—l尚未被報(bào)道過與SLE血管炎相關(guān)。該基因在SLE中的具體功能有待進(jìn)一步研究。4.利用正常人血清和單個(gè)SLE病人血清對YB-1克隆重復(fù)篩選一次，排除了YB-l為假陽性克隆的可能性。 結(jié)論：本研究進(jìn)一步證實(shí)SEREX技術(shù)在自身免疫性疾病SLE中的適用性，拓寬了SEREX技術(shù)的應(yīng)用范圍。篩選出與SLE血管炎相關(guān)的新的自身抗體YB