弓形蟲代謝分泌抗原和表面蛋白1抗原表位研究.pdf

1、弓形蟲是一種專性細胞內寄生原蟲，具有廣泛的宿主群并在世界范圍內流行，引起人獸共患寄生蟲病。在畜牧業(yè)方面，懷孕動物尤其是牛和羊會出現(xiàn)流產(chǎn)或死胎，豬會大批死亡，給畜牧業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。因此建立特異、快速、靈敏的弓形蟲病診斷方法和研制有效預防弓形蟲病的疫苗成為迫切需要解決的問題。
　　 由于弓形蟲抗原成分較復雜，實驗表明，單一抗原疫苗免疫效果或診斷試劑檢測效果均不理想，研制多表位疫苗和診斷試劑必然是一個新的發(fā)展策略。本研究在弓形蟲代

2、謝分泌抗原和多表位抗原免疫保護研究基礎之上，對主要抗原的線性B細胞表位進行了鑒定，為制備弓形蟲B細胞表位抗原奠定基礎。主要研究結果如下：
　　 1)代謝分泌抗原(ESA)較其它可溶性抗原和包囊抗原能更好的誘導細胞免疫反應，是研制抗弓形蟲疫苗的一種非常好的候選抗原。本研究評估了ESA與弗氏佐劑乳化疫苗對豬的免疫保護效果，通過對細胞免疫和體液免疫水平、血液中荷蟲量、豬臨床癥狀、病理剖解及組織變化等一些重要參數(shù)的評估，表明ESA加弗氏

3、佐劑乳化疫苗誘導豬產(chǎn)生的細胞和體液免疫反應能抵抗急性弓形蟲感染。
　　 2)本研究中，我們首次探討一個線性B細胞表位(來自表面蛋白1(SAG1)保守區(qū)域)和兩個T細胞表位(來自致密顆粒蛋白1(GRA1)和致密顆粒蛋白4(GRA4))通過GG間隔序列串聯(lián)，然后連接到賴氨酸以多表位肽(MAP)形式免疫小鼠所引發(fā)的免疫反應。結果，MAP結構+弗氏佐劑不僅誘導BALB/c和昆明小鼠產(chǎn)生高水平特異性抗體，而且還誘導小鼠發(fā)生強烈的細胞免疫反

4、應，用致死劑量的弓形蟲GJS強毒株(1×103)攻擊免疫鼠，小鼠的存活時間比對照組的明顯延長。數(shù)據(jù)證明多表位肽疫苗可作為一種弓形蟲候選疫苗值得進一步進行研究。
　　 3)本研究利用B細胞表位分析軟件預測和肽掃描技術兩種方法對弓形蟲兩個主要抗原SAG1和GRA1的優(yōu)勢線性B細胞表位進行篩選。對于SAG1鑒定到2個新的高度保守的線性B細胞抗原表位：91PTLAYSPNRQICPAGTTSSCTSKAVTLSSL120和151PVTT

5、QTFVVGCIKGDDAQSCMVTVTVQARA180；對于GILA1鑒定了3個新的高度保守的線性B細胞抗原表位：134YSEVGNVNMEEVIDTMKSMQ153、164NKGETVEEAIEDVAQAEGLN183和214LEKDKQQLKDDIGFLTGERE233)，所鑒定到的表位與弓形蟲感染豬血清反應原性良好，有研發(fā)診斷試劑和表位疫苗的價值。
　　 4)本研究以91PTLAYSPNRQICPAGTTSSCTSKA