弓形蟲P30乳酸球菌口服疫苗免疫效果研究及弓形蟲ROP2-P30基因工程復(fù)合抗原的構(gòu)建.pdf

1、該課題基于該室與復(fù)旦大學(xué)生化與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室共同研制成功弓形蟲P30乳酸球菌(Lactococcus lactis/P30)口服疫苗基礎(chǔ)上的延伸工作,在研究的第一部分對(duì)弓形蟲P30乳酸球菌口服疫苗的實(shí)際免疫效果進(jìn)行考察,第二部分利用基因工程手段構(gòu)建弓形蟲ROP2-P30復(fù)合抗原.目的:1.課題研究的第一部分觀察弓形蟲P30乳酸球菌口服疫苗(L.lactis /P30)的免疫效果.首先確定L.lactis /P30免疫小鼠產(chǎn)生免疫保護(hù)性

2、的適宜劑量,在此劑量下考查L(zhǎng).lactis /P30口服免疫在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的體液免疫反應(yīng),以及產(chǎn)生的保護(hù)性效果,進(jìn)一步伐L.lactis /P30口服免疫誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的細(xì)胞免疫效果和抗體IgG的動(dòng)態(tài)發(fā)生過程,最后觀察L.lactis /P30口服免疫鼠血清中,細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2及NO分子的變化情況.2.該研究課題的第二部分致力于弓形蟲病復(fù)合型疫苗的研制,以進(jìn)一步提高弓形蟲P30乳酸球菌口服疫苗的免疫保護(hù)性效果.從弓形蟲RH株總

3、DNA中分別克隆棒狀體蛋白R(shí)OP2和表面膜蛋白P30基因片段,聯(lián)合克隆至表達(dá)載體pET28b中,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28b-ROP2-P30,導(dǎo)入大腸桿菌中表達(dá),分析表達(dá)的重組蛋白R(shí)OP2-P30的免疫活性,為弓形蟲病復(fù)合型疫苗的研制做準(zhǔn)備.結(jié)論:1.(1)確定了3×10<'9> CFU的免疫劑量,用此劑量,小鼠的保護(hù)性效果則比其他劑量組有所提高;(2)L.lactis/ P30口服疫苗一定程度上刺激小鼠產(chǎn)生了相應(yīng)的抗體,誘導(dǎo)產(chǎn)生了偏向T

4、h1型的免疫反應(yīng),且在小鼠體內(nèi)發(fā)揮了部分保護(hù)作用;(3)L.lactis/ P30口服疫苗有效地激發(fā)了小鼠細(xì)胞免疫反應(yīng),特異性抗體IgG在免疫結(jié)束一個(gè)月后生成明顯;(4)L.lactis/ P30口服疫苗有效地刺激了小鼠細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2的產(chǎn)生,NO分子的釋放.2.(1)克隆到的弓形蟲棒狀體蛋白R(shí)OP2在大腸桿菌中得到了表達(dá),分子量為45kDa;(2)弓形蟲棒狀體蛋白R(shí)OP2和主要表面膜蛋白P30融合基因克隆成功,表達(dá)出分子量