基于泛素-弓形蟲多價(jià)抗原的重組疫苗對(duì)小鼠的免疫保護(hù)性研究.pdf

1、剛地弓形蟲是一種重要的機(jī)會(huì)致病性原蟲，呈世界性廣泛分布，可感染所有溫血哺乳動(dòng)物及鳥類。正常人感染弓形蟲通常表現(xiàn)為無癥狀的隱性感染，但孕早期婦女在感染弓形蟲后，可能會(huì)導(dǎo)致流產(chǎn)、早產(chǎn)甚至死產(chǎn)，幸存者也常遺留嚴(yán)重的新生兒神經(jīng)和視網(wǎng)膜病變。而當(dāng)人類或其他宿主免疫力降低或缺乏時(shí)，弓形蟲即可在體內(nèi)大量繁殖并引起如弓形蟲腦病之類的嚴(yán)重的臨床癥狀甚至死亡。由于現(xiàn)階段并沒有有效的藥物來治療弓形蟲病，因此對(duì)于抗弓形蟲疫苗的研究是非常有前景的。
　　目

2、前，關(guān)于抗弓形蟲疫苗目前有大量的研究，包括滅活疫苗，減毒活疫苗以及基因工程疫苗。但是，減毒活疫苗可能發(fā)生毒力返強(qiáng)，存在再感染的可能。而基于不同弓形蟲抗原的基因工程疫苗因其抗弓形蟲感染的安全有效而得到人們?cè)絹碓蕉嗟年P(guān)注。然而，許多研究顯示基于不同弓形蟲抗原的DNA疫苗雖被證實(shí)可引起保護(hù)性的Th1型免疫反應(yīng)抵抗弓形蟲感染，但由于弓形蟲有三個(gè)感染時(shí)期:速殖子，緩殖子（存在于包囊）和子孢子（存在于卵囊），從而使基于弓形蟲單一感染階段的抗原的疫苗

3、不能產(chǎn)生完整的抗弓形蟲的保護(hù)作用。因此，構(gòu)建含有弓形蟲多生活史時(shí)期抗原組成的多價(jià)疫苗是十分必要的。
　　我們從弓形蟲速殖子，緩殖子以及子孢子時(shí)期的抗原中篩選出7個(gè)富含CD8+T細(xì)胞表位的抗原蛋白片段SAG3101-144，ROP18347-396，MIC6288-347，GRA7182-224，MAG158-125，BAG1156-211和SPA142-200，及1個(gè)CD4+T細(xì)胞表位，AS15，并將它們連接起來構(gòu)建了弓形蟲多階段

4、抗原片段;并與泛素佐劑連接，構(gòu)建表達(dá)泛素-弓形蟲多階段抗原的重組DNA和腺病毒疫苗;我們將這兩種疫苗單獨(dú)和聯(lián)合免疫小鼠，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)及流式細(xì)胞術(shù)方法檢測(cè)小鼠免疫后所產(chǎn)生的體液和細(xì)胞免疫水平，并評(píng)估疫苗抗Ⅰ型和Ⅱ弓形蟲攻擊的保護(hù)性。
　　結(jié)果顯示，在誘導(dǎo)產(chǎn)生體液免疫方面具有優(yōu)勢(shì)，相比于重組腺病毒疫苗來說可以誘導(dǎo)產(chǎn)生更高水平的抗體IgG及IgG2a;而重組腺病毒疫苗則能更有效的提高細(xì)胞免疫反應(yīng)水平，誘導(dǎo)產(chǎn)生Th1型細(xì)胞因子IL

5、-2，IFN-γ，而且脾細(xì)胞增殖增殖水平有明顯提高，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞分型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出T淋巴細(xì)胞增多，且以CD8+T細(xì)胞亞群為主。在對(duì)小鼠使用不同免疫策略進(jìn)行預(yù)防接種的實(shí)驗(yàn)中，結(jié)果顯示先DNA疫苗后腺病毒疫苗免疫策略則能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生最強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫水平。而且這種免疫策略可使小鼠在Ⅰ型RH株弓形蟲速殖子感染時(shí)獲得最高的生存率(67％)，并在Ⅱ型PRU株弓形蟲包囊感染時(shí)腦內(nèi)包囊形成數(shù)目最低（296±92）。
　　綜上