弓形蟲緩殖子期特異性抗原的基因克隆、蛋白表達(dá)及重組BAG1抗原的初步應(yīng)用.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文弓形蟲緩殖子期特異性抗原的基因克隆、蛋白表達(dá)及重組BAG1抗原的初步應(yīng)用姓名：王瓊申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：陳曉光20070524中文摘要者重視，一些緩殖子及包囊特有的蛋白的基因也已被克隆、鑒定。本研究對緩殖子期特異性抗原BAGI與SAG4進(jìn)行基因克隆、蛋白表達(dá)以及對重組抗原的免疫反應(yīng)性進(jìn)行分析；進(jìn)一步優(yōu)化蛋白的表達(dá)條件，純化表達(dá)蛋白以獲得大量高純度的重組蛋白，為進(jìn)一步的研究創(chuàng)造了條件。并且探討

2、重組抗原作為新型診斷抗原的可能性；進(jìn)一步篩選、鑒定針對重組BAGI的單克隆抗體，為弓形蟲緩殖子的進(jìn)一步研究打下基礎(chǔ)。彝的：1克隆與表達(dá)弓形蟲緩殖子期特異抗原BAGI、SAG4的基因，并分析重組表達(dá)抗原的免疫反應(yīng)性；2純化表達(dá)蛋白，獲取大量高純度的重組抗原，探討重組抗原在弓形蟲病診斷上的應(yīng)用；3制備、鑒定抗重組BAGI的單克隆抗體，為弓形蟲緩殖予的進(jìn)一步研究打下基礎(chǔ)。方法：1誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的陰株弓形蟲速殖子向緩殖子轉(zhuǎn)化，采用RT—PCR從緩

3、殖子中擴(kuò)增BAGl基因片段；采用PCR從弓形蟲基因組DNA中擴(kuò)增SAG4基因片段；2利用酶切、連接反應(yīng)構(gòu)建pMD18一T—BAGl重組質(zhì)粒、pGEX4T一1一SAG4重組質(zhì)粒，并進(jìn)行測序分析；3利用限制性內(nèi)切酶雙酶切pMI)18一T—BAGl，切下BAGl基因片段插入以同樣限制性內(nèi)切酶雙酶切的質(zhì)粒pET32a()中，構(gòu)建表達(dá)重組質(zhì)粒pET32a()BAGl，并對重組質(zhì)粒進(jìn)行酶切及測序鑒定；4將重組質(zhì)粒pET32a()BAGl、pGEX4