弓形蟲LDH2基因啟動子的克隆及初步鑒定.pdf

1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文弓形蟲LDH2基因啟動子的克隆及初步鑒定姓名：張加勤申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：古欽民20081112山東大學(xué)博士學(xué)位論文鑒于緩殖子階段是弓形蟲致病的重要階段，且危害性大，而LDH是弓形蟲緩殖子能量唯一來源——糖類無氧代謝的終末催化酶，因此，LDH的種類及活性與弓形蟲緩殖子的生存和致病能力密切相關(guān)，對LDH2基因的研究顯得尤為重要。為此，本課題進行了以下幾方面的研究：第一部分弓形蟲LDH2基因5俱U翼

2、序列的克隆研究目的：獲取剛地弓形蟲LDH2基因的5’側(cè)翼序列，為研究該基因的表達調(diào)控機制奠定基礎(chǔ)。研究方法和結(jié)果：根據(jù)公用數(shù)據(jù)庫的序列信息和文獻資料設(shè)計合成引物，運用ThermalAsymmetricInterlacedPCR(TAILPCR)擴增剛地弓形蟲LDH2基因的57側(cè)翼序列，并TA克隆至lJpMDl8T載體中進行測序，得到一大小為993bp的弓形蟲LDH2基因的57側(cè)翼序列DNA片段。結(jié)論：成功克隆了剛地弓形蟲LDH2基因的5

3、’側(cè)翼序列并測序，為研究該基因的表達調(diào)控機制奠定了試驗基礎(chǔ)。第二部分弓形蟲LDH2基因S傾U翼序列生物信息學(xué)分析研究目的：對生物信息學(xué)在弓形蟲LDH2基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究中的應(yīng)用進行初步的摸索與探討。研究方法和結(jié)果：我們從多角度對LDH2基因5’側(cè)翼序列及編碼區(qū)域進行生物信息學(xué)分析，總結(jié)前人對LDH2基因已有的研究成果，預(yù)測基因轉(zhuǎn)錄起始位點以及啟動子的所在區(qū)域。在綜合分析各方面的結(jié)果后，得出相關(guān)結(jié)論，并以此為依據(jù)，指導(dǎo)后續(xù)實驗的進行。取得如

4、下結(jié)果：1MethPrimer對CpG島的預(yù)測結(jié)果并不唯一。在LDH2基因全序列中，MethPrimer搜索到11個潛在的CpG島位點，其中5個CpG島位于起始密碼子上游，表B)jLDH2基因編碼序列的確與CpG島相連。2Promoterscan預(yù)測LDH2基因的候選啟動子在輸入序列的第320bp一509bp處(LDH2基因的540bp~351bp)，其得分是5325，預(yù)設(shè)閾值為5000。3McPromoter預(yù)測在輸入序列的第lOOb