siRNA沉默NR-f2基因?qū)562-G01細胞株伊馬替尼耐藥性的影響.pdf

1、目的：
　　 研究核因子NF-E2相關(guān)因子-2(Nuclear factor erythroid2-related factor2，Nrf2)在慢性粒細胞白血病伊馬替尼耐藥細胞株(K562/G01)及敏感細胞株(K562)中的表達情況;觀察Nrf2-siRNA干擾K562/G01細胞株后Nrf2的表達及其對伊馬替尼耐藥情況的變化，以期為慢性粒細胞白血病(Chronic myelocyticleukemia，CML)的進一步治療提

2、供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1)應(yīng)用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)及Western bolt比較Nrf2在敏感細胞株K562和伊馬替尼耐藥細胞株K562/G01中mRNA及蛋白的表達水平;
　　 2)以慢病毒為載體，將Nrf2-siRNA目的基因轉(zhuǎn)染K562/G01細胞，利用激光共聚焦顯微鏡(LSCM)及流式細胞術(shù)(FCM)檢測轉(zhuǎn)染后的效率，用RT-qPCR及Western bolt檢測siRN

3、A對Nrf2表達量的抑制效率;
　　 3)采用CCK-8比色法測定Nrf2-siRNA干擾前后細胞的耐藥指數(shù);FCM測定干擾前后伊馬替尼對細胞凋亡率的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1) Nrf2在K562/G01細胞株中的表達水平顯著高于K562細胞株，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);
　　 2)轉(zhuǎn)染Nrf2-siRNA后，K562/G01細胞中Nrf2 mRNA和蛋白的表達明顯受抑，(P＜0.05);

4、Nrf2 mRNA表達水平下調(diào)（66.3±0.42）％，Nrf2蛋白表達水平下調(diào)(65.82±2.36)％;
　　 3)成功建立了穩(wěn)定低表達Nrf2的K562/G01細胞模型;
　　 4)轉(zhuǎn)染Nrf2-siRNA后，K562/G01細胞對伊馬替尼的耐藥指數(shù)明顯減小，K562/G01空白組、NC-GFP-LV對照組及Nrf2-RNAi-LV轉(zhuǎn)染組的IC50分別為22.64μmol/L、21.37μmol/L、14.64-μ