阿昔莫司對(duì)巨噬細(xì)胞ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子A1表達(dá)及其調(diào)控的影響.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)的早期特征性病理改變，是單核-巨噬細(xì)胞過(guò)度聚集脂質(zhì)而轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞，因此促使細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出即膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)(RCT)，能延緩AS的發(fā)生發(fā)展，是目前抗AS的主要機(jī)制之一。RCT是使外周細(xì)胞中多余的膽固醇從細(xì)胞內(nèi)流出，與血漿脂蛋白結(jié)合，形成HDL，轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟，通過(guò)膽汁分泌排出體外。其中ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子A1(ABCA1)是此過(guò)程中的一種重要轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，ABCA1介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出，由此啟動(dòng)

2、RCT過(guò)程。ABCA1在體內(nèi)受多種因素調(diào)控，調(diào)節(jié)因子中研究最多的是肝臟X受體(LXR)，有LXRα、LXRβ兩種亞型，LXRα發(fā)揮主要作用，能上調(diào)ABCA1的表達(dá)。
　　煙酸類藥是最早應(yīng)用于臨床的調(diào)脂藥，阿昔莫司為煙酸類衍生化合物，臨床應(yīng)用不良反應(yīng)較煙酸低。煙酸類藥具有廣泛而顯著的降脂效果，與其它調(diào)脂藥相比，煙酸上調(diào)HDL的作用最為顯著，還有大量降脂效應(yīng)外的抗AS效應(yīng)。但眾多不良反應(yīng)限制了它的應(yīng)用，隨著煙酸緩釋劑及復(fù)合制劑的問(wèn)世，

3、大大降低了煙酸類藥物的副作用，煙酸類藥的作用又被重新認(rèn)識(shí)和評(píng)價(jià)。已有研究表明煙酸能促使細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出，煙酸的這種作用可為解釋其升高HDL的機(jī)制提供方向，但煙酸類藥促使細(xì)胞內(nèi)膽固醇外流的相關(guān)機(jī)制尚不太明確。
　　[目的]：
　　本實(shí)驗(yàn)以RAW264.7巨噬細(xì)胞為研究對(duì)象，研究不同濃度阿昔莫司作用下，巨噬細(xì)胞內(nèi)ABCA1的mRNA及蛋白表達(dá)的變化，進(jìn)一步了解阿昔莫司對(duì)ABCA1上游調(diào)控因子LXRα的mRNA及蛋白表達(dá)的影響，從

4、而探討阿昔莫司促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出，抗動(dòng)脈粥樣硬化的可能機(jī)制。
　　[方法]：
　　1.體外培養(yǎng)RAW264.7巨噬細(xì)胞。
　　2.在體外，分別將不同濃度阿昔莫司與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)24h，提取各組細(xì)胞總RNA和蛋白質(zhì)。
　　3.用RT-PCR技術(shù)測(cè)定各組ABCA1、LXRαmRNA水平。
　　4.用Western-blot技術(shù)測(cè)定各組ABCA1、LXRα蛋白表達(dá)。
　　5.用閃爍計(jì)數(shù)法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)膽固醇流

5、出率。
　　6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　[結(jié)果]：
　　1.通過(guò)半定量RT-PCR檢測(cè)顯示，不同濃度阿昔莫司干預(yù)組ABCA1的mRNA水平較對(duì)照組明顯升高(P<0.05)，且此作用隨著阿昔莫司濃度的增加而逐漸增強(qiáng)(P<0.05)。
　　2.通過(guò)半定量RT-PCR檢測(cè)顯示，不同濃度阿昔莫司干預(yù)組LXRα的mRNA水平較對(duì)照組明顯升高(P<0.05)，且此作用隨著阿昔莫司濃度的增加而逐漸增強(qiáng)(P<0.05)。
　　3

6、.通過(guò)Western-blot檢測(cè)顯示，不同濃度阿昔莫司干預(yù)組ABCA1蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯升高(P<0.05)，且此作用隨著阿昔莫司濃度的增加而逐漸增強(qiáng)(P<0.05)。
　　4.通過(guò)Western-blot檢測(cè)顯示，不同濃度阿昔莫司干預(yù)組LXRα蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯升高(P<0.05)，且此作用隨著阿昔莫司濃度的增加而逐漸增強(qiáng)(P<0.05)。
　　5.閃爍計(jì)數(shù)法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出率，結(jié)果顯示，不同濃度阿昔莫司干預(yù)組細(xì)

7、胞內(nèi)膽固醇流出率較對(duì)照組均明顯增高，且此作用隨著阿昔莫司濃度的增加而逐漸增強(qiáng)(P<0.05)。
　　[結(jié)論]：
　　實(shí)驗(yàn)證實(shí)，阿昔莫司能濃度依賴性地上調(diào)RAW264.7巨噬細(xì)胞ABCA1的mRNA及蛋白表達(dá)，同時(shí)阿昔莫司還能濃度依賴性地上調(diào)ABCA1的上游調(diào)控因子LXRα的mRNA及蛋白表達(dá)，阿昔莫司能通過(guò)LXRα通路上調(diào)ABCA1的表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)膽固醇外流，抑制泡沫細(xì)胞的形成，阿昔莫司的這種有益效應(yīng)可為延緩AS提供實(shí)