匹多莫德對(duì)巨噬細(xì)胞極化及其功能的影響.pdf

1、匹多莫德(pidotimod，Pido)是一種化學(xué)合成的，具有口服活性的免疫調(diào)節(jié)肽。研究表明，匹多莫德既能促進(jìn)機(jī)體的非特異性免疫反應(yīng)，也能促進(jìn)特異性免疫反應(yīng)，可廣泛地應(yīng)用于臨床研究。巨噬細(xì)胞是一類重要的免疫效應(yīng)細(xì)胞，近年來研究發(fā)現(xiàn)，機(jī)體微環(huán)境的改變會(huì)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞不同類型的極化。那么匹多莫德是否能夠通過介導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化，從而參與調(diào)節(jié)機(jī)體的相應(yīng)免疫功能？因此，本研究首先以小鼠的原代骨髓巨噬細(xì)胞為研究對(duì)象，探討匹多莫德對(duì)巨噬細(xì)胞極化及其功能的

2、影響;在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步利用OVA致敏激發(fā)誘導(dǎo)的小鼠哮喘模型，研究了匹多莫德介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞極化對(duì)小鼠哮喘疾病過程的影響;同時(shí)，以DSS誘導(dǎo)炎癥性結(jié)腸炎小鼠為模型，探討了匹多莫德對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響及其對(duì)DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎疾病的緩解作用，旨在進(jìn)一步闡明匹多莫德對(duì)巨噬細(xì)胞極化及其功能的影響。主要研究結(jié)果如下:
　　實(shí)驗(yàn)一:匹多莫德對(duì)小鼠原代骨髓巨噬細(xì)胞極化及功能的影響
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:(1)1～200μg/ml濃度Pido與原代

3、巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)，對(duì)巨噬細(xì)胞無毒性作用，并且不影響LPS/IFN-γ誘導(dǎo)的M1型巨噬細(xì)胞極化;與IL-4誘導(dǎo)的M2型巨噬細(xì)胞相比，不同濃度Pido與IL-4共同誘導(dǎo)處理巨噬細(xì)胞后，顯著提高了M2型特征基因Arg1、Fizz1、Ym1和MR的表達(dá)量（p＜0.05），說明Pido能夠促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞極化，其中1μg/ml的濃度促進(jìn)效果最為顯著。(2)與M2型巨噬細(xì)胞相比，1μg/ml Pido與IL-4共處理巨噬細(xì)胞12 h和24 h后，A

4、rg1基因的表達(dá)分別提高2.23倍(p＜0.01)和2.21倍（p＜0.01）;處理6h后，F(xiàn)izz1基因的表達(dá)量顯著提高(p＜0.01)，Ym1基因在處理24 h后表達(dá)量顯著提高(p＜0.001)，12h后MR基因表達(dá)開始顯著提高(p＜0.001);處理24 h后，1000000個(gè)細(xì)胞中表達(dá)MR蛋白的細(xì)胞數(shù)量由0.433％提高到1.80％，證明匹多莫德能夠顯著促進(jìn)IL-4誘導(dǎo)的M2型巨噬細(xì)胞極化。(3)與M2型巨噬細(xì)胞上清處理組相比，

5、Pido處理的M2型巨噬細(xì)胞上清與MLE-12共培養(yǎng)后，細(xì)胞遷移率提高1.47倍（p＜0.05）;Pido與IL-4共處理巨噬細(xì)胞后，MLE-12體外劃痕愈合速率快于M2型巨噬細(xì)胞（p＜0.05），提示匹多莫德能夠促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞的修復(fù)功能。
　　實(shí)驗(yàn)二:匹多莫德對(duì)小鼠支氣管哮喘的影響
　　本實(shí)驗(yàn)以C57BL/6小鼠為研究對(duì)象，建立了卵白蛋白(OVA)致敏激發(fā)的小鼠哮喘模型，比較了匹多莫德對(duì)哮喘小鼠呼吸道炎性細(xì)胞含量、血清

6、抗體和細(xì)胞因子表達(dá)、肺組織炎癥評(píng)分和氣道黏液分泌、以及M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物免疫組化的影響，進(jìn)一步探討了匹多莫德對(duì)M2型巨噬細(xì)胞極化的促進(jìn)作用與哮喘疾病之間的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:(1)灌胃Pido后，BALF中總炎性細(xì)胞數(shù)量呈上升趨勢，嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量顯著提高（p＜0.05），且這二項(xiàng)指標(biāo)分別顯著高于Dex治療組(p＜0.05，p＜0.01);(2)哮喘建模同時(shí)灌胃Pido組，小鼠血清中IgE抗體水平顯著高于Control組(p＜0.00

7、1)、OVA組(p＜0.001)和Dex組(p＜0.001);小鼠BALF中IL-4水平與Control組相比無差異（p＞0.05），顯著低于OVA組(p＜0.01);與Control組，OVA組和Dex組相比，IL-5水平均顯著提高(p＜0.001);IL-13水平顯著高于Control組(p＜0.01)和Dex組（p＜0.05），與OVA組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05);(3)單獨(dú)灌胃Pido的哮喘模型小鼠，肺組織氣道上皮不完整，

8、上皮細(xì)胞明顯增生肥大，氣道周圍可見炎癥細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤，炎癥評(píng)分略高于與OVA組小鼠（p＞0.05），但顯著高于Dex組(p＜0.001);模型小鼠灌胃Pido后，小鼠氣道黏膜上皮可見大量杯狀細(xì)胞，評(píng)分略高于與OVA組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05);(4) Pido組小鼠氣道黏膜上皮Fizz1和Arg1陽染顆粒多于Dex組(p＜0.01，p＞0.05);與OVA組相比，在除氣道黏膜上皮的部分外，肺部其他組織中也有Fizz1陽性著

9、色顆粒（p＜0.05）。Pido組小鼠氣道黏膜上皮存在Arg1陽染顆粒，并且在肺部其他組織中能觀察到Arg1陽性著色顆粒，其著色面積與OVA組類似。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果揭示，匹多莫德能夠促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞極化，進(jìn)而可加重OVA誘導(dǎo)的哮喘小鼠疾病癥狀。
　　實(shí)驗(yàn)三:匹多莫德對(duì)小鼠炎癥性結(jié)腸炎的影響
　　研究表明，M2型巨噬細(xì)胞能夠調(diào)節(jié)機(jī)體Th1/Th2的平衡，從而對(duì)小鼠炎癥性結(jié)腸炎具有保護(hù)作用。因此，本實(shí)驗(yàn)以C57BL/6小鼠為研究對(duì)

10、象，建立了葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)的小鼠炎癥性結(jié)腸炎模型，比較過繼回輸M2型巨噬細(xì)胞和匹多莫德處理的M2型巨噬細(xì)胞后，對(duì)炎癥性結(jié)腸炎疾病嚴(yán)重程度、血清細(xì)胞因子分泌和結(jié)腸組織病理的影響，進(jìn)一步探討了匹多莫德協(xié)同誘導(dǎo)M2型巨噬細(xì)胞極化與DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:(1)與DSS建模組相比，尾靜脈注射M2型巨噬細(xì)胞組和Pido處理的M2型巨噬細(xì)胞組，飲用2％ DSS溶液后，小鼠體重降低幅度顯著減小，體重減輕顯著緩于M2型巨噬細(xì)胞組

11、（p＜0.05），M2組和Pido處理M2組小鼠模型的疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)均顯著低于DSS模型組(p＜0.001)。(2)過繼回輸M2型巨噬細(xì)胞和Pido處理的M2型巨噬細(xì)胞后，能夠顯著抑制DSS誘導(dǎo)血清炎癥因子IFN-γ水平(p＜0.01，p＜0.01)，提高抑炎因子TGF-β1水平(p＜0.001，p＜0.001)。(3) Pido處理M2型巨噬細(xì)胞的過繼回輸后，腸絨毛結(jié)構(gòu)完整，排列整齊，腸黏膜腺體結(jié)構(gòu)完整，粘膜層和粘膜下層少見炎