間充質干細胞對巨噬細胞活化及其功能影響的實驗研究.pdf

1、目的：探討在體外條件下骨髓間充質干細胞(MSCs)對脂多糖(LPS)刺激后小鼠腹腔巨噬細胞活化及其功能的影響。 方法：采用貼壁篩選法分離、純化BALB/c小鼠骨髓MSCs，用經(jīng)過高壓滅菌的4％巰基乙酸鈉溶液腹腔注射刺激，4天后收集小鼠腹腔巨噬細胞，依材料和方法所述分組，建立MSCs與巨噬細胞共培養(yǎng)體系。用LPS(終濃度1ug/ml)刺激巨噬細胞18小時后收集細胞培養(yǎng)上清，檢測培養(yǎng)體系中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，轉化生長因子

2、-β(TGF-β)和一氧化氮(NO)等炎癥性細胞因子分泌量的變化，同時在培養(yǎng)體系中加入大腸桿菌標準菌株(ATCC25922)，共孵育24小時后用緩沖液洗滌，盡量除去未被吞噬的細菌后固定，采用瑞氏染色檢查巨噬細胞吞噬功能的變化。 結果:用巰基乙酸鈉溶液腹腔注射刺激方法收集的小鼠腹腔巨噬細胞為炎癥性巨噬細胞，其培養(yǎng)上清中可檢測到少量細胞因子，經(jīng)LPS進一步刺激活化后培養(yǎng)上清中TNF-α和NO的含量明顯上升，分別為(147.41±37

3、.13)pg/ml，(59.93±8.74)uM；而與MSCs共培養(yǎng)時，TNF-α顯著減少[(97.58±30.26)pg/ml，P=0.032]，NO降到(50.90±29.48)uM，P>0.05；當培養(yǎng)體系中存在MSCs上清時，即MPMs+LPS+MSC上清組中，TNF-α和NO進一步減少為(58.28±3 1.54)pg/ml，(-3.36±2.31)uM，P<0.0005；然而，各組中TGF-β含量的差異無統(tǒng)計學意義，P>0.