SDF-1-CXCR4-ERK信號通路對離體培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元GABA分泌的影響.pdf

1、基質(zhì)細胞衍生因子-1(stromal cell derived factor,SDF-1)是骨髓基質(zhì)細胞產(chǎn)生的CXC類趨化蛋白,通過作用于其特異性受體CXCR4在調(diào)節(jié)細胞遷移、信息傳遞、創(chuàng)傷修復等生理與病理過程中發(fā)揮重要作用。已有研究證實,SDF-1及其受體CXCR4在海馬組織中廣泛表達,可以促進海馬神經(jīng)元的遷移和突起延伸,提示SDF-1可能作為神經(jīng)調(diào)質(zhì)發(fā)揮作用。海馬作為學習記憶的中心,其功能與神經(jīng)遞質(zhì)的分泌有密切關(guān)系,因此本實驗選用海

2、馬神經(jīng)元作為研究對象,神經(jīng)遞質(zhì)分泌作為觀察對象。有研究發(fā)現(xiàn)γ氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)是參與海馬學習記憶過程的重要抑制性神經(jīng)遞質(zhì),在視網(wǎng)膜、小腦和脊髓以及大腦海馬區(qū)等部位均有GABA能通路的存在。本實驗室最近的研究發(fā)現(xiàn)SDF-1可通過作用于CXCR4抑制離體培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元GABA的分泌。有報道在大鼠體內(nèi)SDF-1作用于CXCR4可引起細胞外調(diào)節(jié)激酶(extracellilar-signal-reg

3、ulated kinases1/2,ERK1/20信號通路激活,進而調(diào)節(jié)骨髓間充質(zhì)干細胞的遷移。但是SDF-1作用于大鼠海馬神經(jīng)元CXCR4是否也通過激活ERK1/2信號通路而引起GABA分泌的改變,目前尚未見報道。
　　 目的:
　　 觀察ERK1/2信號通路激活對SDF-1引起的離體培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元GABA分泌的影響。
　　 方法:
　　 原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元并鑒定;采用ELISA方法檢測受體C

4、XCR4特異性阻斷劑AMD3100和ERK1/2特異性阻斷劑PD98059分別作用于離體培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元后觀察GABA分泌的改變;通過Western blot方法觀察ERK1/2信號通路的磷酸化水平;PD98059阻斷ERK1/2信號通路后谷氨酸脫羧酶(GAD65/67)和γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)運體(GAT)的蛋白表達量:RT-PCR檢測PD98059阻斷ERK1/2信號通路后GAD65和GAT-1mRNA表達水平。
　　 結(jié)果:

5、>　　 (1)SDF-1可引起海馬神經(jīng)元ERK1/2信號通路磷酸化水平明顯升高,AMD3100可抑制SDF-1引起的ERK1/2信號通路激活。
　　 (2)SDF-1抑制離體培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元GABA的分泌,PD98059可部分逆轉(zhuǎn)SDF-1對GABA分泌的抑制作用。
　　 (3)SDF-1可抑制離體培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元谷氨酸脫羧酶GAD65和GAT-1mRNA的表達水平。PD98059可部分逆轉(zhuǎn)SDF-1的抑制作用。