小潮氣量聯(lián)合呼吸末正壓通氣對呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎發(fā)生、發(fā)展的影響.pdf

1、第一部分小潮氣量聯(lián)合呼氣末正壓通氣對健康大鼠肺和全身炎癥反應(yīng)的影響
　　 目的：探討小潮氣量聯(lián)合呼氣末正壓（PEEP）通氣對健康大鼠肺和全身炎癥反應(yīng)的影響及其臨床意義。
　　 方法：清潔級雄性SD大鼠56只，體重242～286g，隨機(jī)分為7組（n=8）：對照組（C組），小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣60min組（P60組），小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣120min組（P120組），小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣240min組（P240組

2、），大潮氣量通氣240min組（H240組），小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣240min后恢復(fù)2d組（R組）和小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣血?dú)夥治鼋M。小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣參數(shù)設(shè)置如下：潮氣量（VT）6ml/kg，呼吸頻率（RR）88次/min，呼氣末正壓(PEEP)5 cmH2O，吸入氧濃度(FIO2)21％。大潮氣量通氣參數(shù)設(shè)置如下：VT 40ml/kg，RR 88次/min，PEEP 5 cmH2O，F(xiàn)IO221％。觀察肺組織病理學(xué)改變，

3、測定肺濕干重比（W/D）、髓過氧化物酶（MPO）活性，脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記（TUNEL）檢測肺細(xì)胞凋亡，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測肺組織白介素-1β（IL-1β）Mrna，腫瘤壞死因子-α（TNF-α）Mrna和巨噬細(xì)胞炎性蛋白-2（MIP-2）Mrna的表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測血漿中IL-1β，TNF-α和MIP-2濃度。
　　 結(jié)論：小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣能引起肺部和全

4、身短暫性炎癥反應(yīng)。在這種短暫性炎癥反應(yīng)情況下，機(jī)體抗御外來損傷性打擊或抗感染能力下降，機(jī)體更易遭受 “二次打擊”。
　　 第二部分小潮氣量聯(lián)合呼氣末正壓通氣建立耐甲氧西林金黃色葡萄球菌呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎大鼠模型
　　 目的：建立耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎（VAP）大鼠模型并評估小潮氣量聯(lián)合呼吸末正壓（PEEP）通氣對肺炎發(fā)生、發(fā)展的影響。
　　 方法：清潔級雄性SD大鼠100只，體重242

5、～286 g，隨機(jī)分為4組：非通氣肺炎組（N組，n=44），呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎組（V組，n=44），小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣組（P組，n=6）和對照組（C組，n=6）。N組大鼠直接經(jīng)氣管導(dǎo)管注入0.2 ml 1010cfu/ml MRSA，V組大鼠4 h小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣后經(jīng)氣管導(dǎo)管注入0.2 ml 1010cfu/ml MRSA，P組大鼠4 h小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣后經(jīng)氣管導(dǎo)管注入0.2 ml生理鹽水，C組大鼠直接經(jīng)氣管導(dǎo)管注入

6、0.2 ml生理鹽水。小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣參數(shù)設(shè)置如下：潮氣量（VT）6ml/kg，呼吸頻率（RR）88次/min，PEEP 5 cmH2O，吸入氧濃度(FIO2)21％。P組和C組大鼠于滴注生理鹽水48 h后放血處死。N組和V組于細(xì)菌接種后3 h，6 h，12 h，24 h各處死6只大鼠，接種后48 h處死10只大鼠。N組和V組余下的10只大鼠用于觀察5 d生存率。觀察肺改變，記錄肉眼和病理學(xué)評分，N組和V組接種細(xì)菌48 h后菌血

7、癥發(fā)生率和5 d生存率，測定肺濕重與體重比（WW/BW）和肺細(xì)菌濃度。
　　 結(jié)論：4 h的小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣后經(jīng)口接種2×109 cfu MRSA可建立大鼠MRSA VAP模型。MRSA VAP無論是在組織病理學(xué)改變方面還是細(xì)菌學(xué)方面均重于未通氣MRSA肺炎。小潮氣量加PEEP通氣降低肺清除細(xì)菌的能力，促進(jìn)感染在肺內(nèi)和全身的蔓延。
　　 第三部分小潮氣量聯(lián)合呼氣末正壓通氣對耐甲氧西林金黃色葡糖球菌呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎

8、大鼠肺組織β－防御素-3表達(dá)的影響
　　 目的：建立耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎（VAP）大鼠模型并評估小潮氣量聯(lián)合呼吸末正壓（PEEP）通氣對大鼠肺組織β－防御素-3（BD-3）表達(dá)的影響。
　　 方法：清潔級雄性SD大鼠100只，體重242～286 g，隨機(jī)分為4組：非通氣肺炎組（N組，n=44），呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎組（V組，n=44），小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣組（P組，n=6）和對照組（C組，

9、n=6）。N組大鼠直接經(jīng)氣管導(dǎo)管注入0.2 ml 1010cfu/ml MRSA，V組大鼠4 h小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣后經(jīng)氣管導(dǎo)管注入0.2 ml 1010cfu/ml MRSA，P組大鼠4 h小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣后經(jīng)氣管導(dǎo)管注入0.2 ml生理鹽水，C組大鼠直接經(jīng)氣管導(dǎo)管注入0.2 ml生理鹽水。小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣參數(shù)設(shè)置如下：潮氣量（VT）6ml/kg，呼吸頻率（RR）88次/min，PEEP 5 cmH2O，吸入氧濃度

10、(FIO2)21％。P組和C組大鼠于滴注生理鹽水48 h后放血處死。N組和V組于細(xì)菌接種后3 h，6 h, 12 h，24 h各處死6只大鼠，接種后48 h處死10只大鼠。N組和V組余下的10只大鼠用于觀察5 d生存率。免疫組織化學(xué)和蛋白印跡檢測肺組織BD-3的表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測肺組織中干擾素-γ（IFN-γ）濃度。
　　 結(jié)論：MRSA VAP時肺組織BD-3表達(dá)要顯著低于未通氣MRSA肺炎，防御素表達(dá)的

11、減少可能是小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣降低肺清除細(xì)菌的能力，促進(jìn)感染在肺內(nèi)和全身的蔓延的原因之一。
　　 第四部分 機(jī)械拉伸對干擾素-γ誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞人β－防御素－3表達(dá)的影響
　　 目的：研究機(jī)械拉伸對干擾素-γ（IFN-γ）誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞（A549細(xì)胞）人β－防御素－3（HBD-3）表達(dá)的影響并從細(xì)胞層面進(jìn)一步探討HBD-3在呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎（VAP）發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 方法：體外培養(yǎng)A549細(xì)胞，分別

12、給予機(jī)械拉伸（S組），10ng/ml IFN-γ（I組）和10ng/ml IFN-γ＋機(jī)械拉伸（IS組）3種處理，未處理的細(xì)胞為對照組（C組），處理的時間為2 h，4 h和6 h。拉伸由細(xì)胞Flexercell-4000TTM拉伸系統(tǒng)提供，拉伸的幅度為20﹪，速率為30次/分。處理后實(shí)時定量逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測HBD-3 Mrna的表達(dá)；處理6 h的細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)至24 h，激光掃描共聚焦顯微鏡檢測HBD-3的表達(dá)。流