姜黃素類似物J7對2型糖尿病大鼠肝臟的保護作用.pdf

1、目的：
　　探討新型姜黃素類似物J7對2型糖尿病大鼠肝臟的保護作用及可能機制。
　　方法：
　　雄性Sprague Dawley（SD）大鼠60只， SPF級，體重180g-220g，由溫州醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。經(jīng)過常規(guī)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機分為兩組：正常對照組10只（Normal Control，NC組，n=10），實驗組50只（Experiment Group， EG組，n=50）。NC組繼續(xù)用普通飼料喂養(yǎng)

2、，EG組大鼠給以高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周后，以便于胰島素抵抗（Insulin Resistance，IR）的誘發(fā)。對實驗組大鼠一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ），劑量為30mg/kg，STZ腹腔注射72小時后尾靜脈采血測空腹血糖(血糖濃度大于16.7mmol/L時造模成功)，其中，50只實驗組大鼠中有8只大鼠注射STZ后FBG值未達(dá)到16.7mmol/L，故未納入本試驗，共有42只大鼠造模成功并分成4組：糖尿病

3、組（DM組）12只，糖尿病姜黃素治療組（CUR組）10只，姜黃素類似物低劑量J7治療組（J7L）10只，姜黃素類似物高劑量J7治療組（J7H）10只。該4組繼續(xù)以高糖高脂飼料喂養(yǎng), CUR組用姜黃素灌胃8周，劑量為20 mg· kg-1·d-1，J7L組用姜黃素類似物J7，劑量為10mg· kg-1·d-1, J7H組用姜黃素類似物J7，劑量為20mg· kg-1·d-1，其余組給以等容積的1％羧甲基纖維素鈉灌胃。喂養(yǎng)過程中，NC組、D

4、M組、CUR組、J7H組分別有1只、2只、3只、2只意外死亡，均剔除本實驗。在實驗過程中，這些大鼠自由活動，飲食飲水，每周稱重一次。于飼養(yǎng)結(jié)束的前1天禁食12小時后，用10%水合氯醛按0.3ml/100g劑量進(jìn)行腹腔注射麻醉大鼠，并記錄大鼠體重（Body weight, BW），股動脈放血法處死大鼠后收集血清，實驗結(jié)束后檢測以下指標(biāo)：各組體重變化；生化指標(biāo)檢測：空腹血糖（FPG）,血脂TC、TG、LDL；血清肝功能指標(biāo)檢測：血ALT、A

5、ST；肝臟形態(tài)學(xué)觀察：采用HE染色和Masson膠原染色法并在光鏡下觀察肝臟形態(tài)學(xué)改變，透射電鏡下觀察其超微結(jié)構(gòu)的改變；免疫組化法檢測：大鼠肝臟BAX、TGF-β1、NF-κB p65；用Western blot方法檢測肝臟TGF-β1、Smad7、α-SMA蛋白的表達(dá)水平；用ELISA法檢測肝臟NF-κB p65、 BAX、BCL-2、IL-1β、TGF-β1蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　?、排cNC組相比，DM組大鼠體重

6、明顯減輕（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義；經(jīng)姜黃素與 J7低劑量與高劑量干預(yù)治療后，CUR組、J7L、J7H組體重有所升高。⑵各組血糖比較：與NC組相比，DM組大鼠血糖明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），經(jīng)姜黃素與J7治療，血糖有所下降，其中J7L組與J7H組下降幅度明顯，與DM組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。⑶與NC組比較，DM組血漿TG、TC、LDL水平顯著升高(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；經(jīng)J7干預(yù)后，J7

7、L、J7H組大鼠TG、TC、LDL水平顯著降低(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。⑷與NC組對照， DM組大鼠血清ALT、AST明顯升高(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；經(jīng)姜黃素與J7干預(yù)后，J7L、J7H組大鼠ALT、AST水平明顯降低(P＜0.05)。⑸HE染色:正常組肝臟組織結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞排列成肝板呈放射狀分布，肝細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，大小如常，無明顯的脂肪變性和炎癥。與NC組相比，DM組肝細(xì)胞出現(xiàn)水樣變性甚至氣球樣變，伴部分組織脂肪

8、變性炎性細(xì)胞浸潤，部分區(qū)域膠原纖維間隔增厚，匯管區(qū)膠原纖維增生；CUR組干預(yù)后，炎癥病變有所減輕，纖維化部分緩解，J7干預(yù)后，相應(yīng)治療組肝臟組織病變有所減輕。⑹Masson染色：與NC組相比，DM組肝小葉結(jié)構(gòu)被破壞，細(xì)胞索排列紊亂，肝細(xì)胞脂肪變性，肝臟纖維組織增生明顯，匯管區(qū)可見粗大的膠原纖維，小葉間靜脈，肝血竇可見少量亮綠色纖維，實質(zhì)細(xì)胞間也可見亮綠色纖維條索。在姜黃素與J7干預(yù)后，相應(yīng)治療組亮綠色陽性基質(zhì)有所減少。⑺正常組大鼠肝細(xì)胞

9、核卵圓形，細(xì)胞漿內(nèi)可見豐富的線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，未見明顯的脂滴浸潤。與NC組相比， DM組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)脂質(zhì)顆粒，大小不一，部分相互融合成巨大脂滴，密度升高，核固縮，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增多，線粒體腫脹，數(shù)量減低。姜黃素與J7干預(yù)后，相應(yīng)治療組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)量減少，核固縮減輕，線粒體增多，腫脹明顯減輕，板狀嵴清晰。⑻與NC組相比，DM組大鼠可見肝組織內(nèi)TGFβ1、NF-κB p65、BAX表達(dá)明顯增加；姜黃素與J7干預(yù)后，CUR、J7L、J

10、7H組大鼠TGFβ1、NF-κB p65、BAX表達(dá)量明顯減少。⑼與NC組相比，DM組大鼠TGF-β1、NF-κB p65、BCL-2、BAX、IL-1β蛋白表達(dá)有所升高（P＜0.05），差異存在統(tǒng)計學(xué)意義，經(jīng)姜黃素與J7治療后，其TGF-β1、NF-κB p65、BAX、IL-1β蛋白表達(dá)下降，與DM組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。⑽Western Blot結(jié)果表明DM組大鼠α-SMA、TGF-β1含量升高，Smad7含量