姜黃素類似物L(fēng)6H3對(duì)帕金森病的神經(jīng)保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：帕金森病是第二大神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，由中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的變性和損失引起，這種神經(jīng)元的損失通常伴隨著神經(jīng)遞質(zhì)的減少，路易小體的發(fā)生，星型膠質(zhì)和神經(jīng)膠質(zhì)的增生，臨床上主要表現(xiàn)為靜止性震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩、肌肉強(qiáng)直和姿勢(shì)步態(tài)障礙等。姜黃素是從姜科、天南星科中一些植物的根莖中提取的天然有效成分，具有降血脂、抗腫瘤、抗炎、抗病原微生物、抗氧化等藥理作用，但是姜黃素在體內(nèi)代謝快、吸收少，生物利用度非常低，因此結(jié)構(gòu)改造后去除姜黃素結(jié)構(gòu)中不穩(wěn)定的

2、β-二酮基團(tuán)，得到穩(wěn)定性相對(duì)較好的姜黃素類似物L(fēng)6H3，這可能為治療帕金森病提供一個(gè)新選擇。本文旨在探討姜黃素類似物L(fēng)6H3是否能對(duì)帕金森病具有神經(jīng)保護(hù)作用，并進(jìn)一步確定其作用機(jī)制。
　　方法：⑴大鼠帕金森模型的建立：本實(shí)驗(yàn)采用腦部紋狀體立體定位注射6-羥基多巴胺（6-OHDA）來(lái)構(gòu)建帕金森大鼠模型。用阿撲嗎啡誘發(fā)大鼠旋轉(zhuǎn)行為來(lái)檢測(cè)模型建立成功與否，剔除失敗的模型動(dòng)物。模型成功的大鼠隨機(jī)分為四組：SHAM組，PD模型組、L6H3給

3、藥組、陽(yáng)性對(duì)照藥美多芭組。SHAM組只暴露大鼠顱骨不定位注射6-OHDA，PD模型組不給予藥物治療，只給予相同體積的生理鹽水，L6H3給藥組腹腔注射L6H3(50 mg/kg),陽(yáng)性對(duì)照組給予藥物美多芭。各組在造模成功后第1-4周和給藥后第1，2周以及停藥后第1周對(duì)大鼠進(jìn)行了旋轉(zhuǎn)行為的檢測(cè)。收集組織樣本用于石蠟切片染色、神經(jīng)遞質(zhì)檢測(cè)、氧化損傷檢測(cè)、western blot蛋白表達(dá)檢測(cè)以及其他。⑵細(xì)胞帕金森模型的建立：選用SH-SY5Y細(xì)

4、胞，待細(xì)胞貼壁后，隨機(jī)分成Control組、6-OHDA組、6-OHDA+L6H3組、L6H3組。Control組即為正常對(duì)照組，不加處理；6-OHDA組用100μM6-OHDA處理細(xì)胞24 h建立PD細(xì)胞模型組；6-OHDA+L6H3組在加入6-OHDA的同時(shí)還加入10μM L6H3；L6H3組則只加入10μM L6H3。收集各組樣本檢測(cè)細(xì)胞凋亡或收集蛋白檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。
　　結(jié)果：①通過(guò)腹腔注射阿撲嗎啡誘導(dǎo)的動(dòng)物旋轉(zhuǎn)行為來(lái)驗(yàn)證模

5、型的成功與否，造模成功率約60％。從動(dòng)物旋轉(zhuǎn)行為學(xué)上分析發(fā)現(xiàn)L6H3可以有效改善模型大鼠的帕金森病癥。高效液相法檢測(cè)紋狀體中相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)與代謝產(chǎn)物的含量，發(fā)現(xiàn)L6H3可以增加6-OHDA導(dǎo)致的帕金森病模型大鼠紋狀體中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)與其代謝產(chǎn)物的含量，同時(shí)免疫組織化學(xué)染色和western blot結(jié)果表明L6H3還能提高紋狀體中酪氨酸羥化酶的表達(dá)，并減輕多巴胺能神經(jīng)元的損傷。通過(guò)檢測(cè)我們還發(fā)現(xiàn)， L6H3能減弱6-OHDA誘導(dǎo)的氧化損傷，

6、提高PD模型大鼠SOD與GSH-Px的活性，降低MDA的含量并使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的表達(dá)受到抑制。②在體外實(shí)驗(yàn)中，我們進(jìn)行了細(xì)胞凋亡檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)L6H3能有效減少SH-SY5Y帕金森模型細(xì)胞的凋亡,促進(jìn)細(xì)胞存活。L6H3也能增加TH蛋白的表達(dá)和抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白CHOP、GRP78和CASPASE12的表達(dá)，提示著L6H3的保護(hù)作用可能涉及到這些相關(guān)的信號(hào)通路。
　　結(jié)論：L6H3能改善帕金森大鼠癥狀，提高帕金森大鼠腦中相關(guān)神經(jīng)