姜黃素類似物L(fēng)6H4對2型糖尿病大鼠腦組織抗氧化及抗凋亡的作用.pdf

1、【實驗?zāi)康摹?br>　　觀察姜黃素類似物L(fēng)6H4對2型糖尿病及高脂的大鼠腦組織氧化應(yīng)激指標(biāo)、神經(jīng)細(xì)胞Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)的影響。探討姜黃素類似物L(fēng)6H4對2型糖尿病及高脂的大鼠腦組織抗氧化和抗凋亡作用的機(jī)制。
　　【實驗方法】
　　雄性 SD大鼠（SpragueDawley）60只，體重（180-220g），隨機(jī)分為正常組（normal control group，NC，n=8），用普通飼料喂養(yǎng)；實驗組（n=52），用

2、高脂高糖飼料喂養(yǎng)。大鼠喂養(yǎng)4周后，實驗組再分為高脂實驗組（n=20）和糖尿病實驗組（n=32），其中糖尿病實驗組大鼠予禁食12小時，然后腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)30mg/Kg，復(fù)制2型糖尿病的模型。造模成功的標(biāo)準(zhǔn)：72小時后抽尾靜脈空腹血糖(fasting blood-glucose，F(xiàn)BG)FBG≥16.7mmol/L，一周后復(fù)測FBG≥16.7mmol/L。實驗組中24只大鼠達(dá)標(biāo)，再隨機(jī)分為糖尿病組

3、（diabeticmellitus group，DM，n=10）和糖尿病治療組（diabetic treatment group，DT，n=14）。高脂實驗組則隨機(jī)分為高脂組（high fat group，HF，n=8）和高脂治療組（high fat treatment group，F(xiàn)T，n=12）。FT組和DT組均用姜黃素類似物L(fēng)6H4（L6H4溶于1％羧甲基纖維素鈉中）進(jìn)行灌胃，每天一次，劑量為0.2mg/Kg；NC組、HF組和DM

4、組則使用同等容積的羧甲基纖維素鈉（CMCNa）進(jìn)行灌胃，作為對照，每天一次。各組大鼠均喂養(yǎng)8周后，予禁食12小時，再腹腔注射10%水合氯醛（0.3ml/100g）麻醉，然后處死大鼠。收集血清及腦組織標(biāo)本，記錄各組大鼠的體重及腦重量；檢測空腹血糖、胰島素水平，計算胰島抵抗指數(shù)（HOMA-IR）；光學(xué)顯微鏡下觀察腦神經(jīng)元細(xì)胞的形態(tài)變化；使用TUNEL試劑盒檢測各組大鼠腦神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡變化；檢測各組大鼠腦組織氧化應(yīng)激指標(biāo)SOD、MDA的變化

5、；Western Blot法檢測各組大鼠腦Bax、Bcl-2表達(dá)的水平及Bax/Bcl-2比值的變化。
　　【實驗結(jié)果】
　?。?）體重與血生化指標(biāo)改變：HF組與NC組相比大鼠體重明顯上升（P＜0.05），DM組大鼠體重明顯下降（P＜0.05），經(jīng)姜黃素類似物L(fēng)6H4治療后，F(xiàn)T組體重明顯下降（P＜0.05），DT組體重明顯增加（P＜0.05）。HF組及DM組的血糖、血脂、血胰島素及HOMA-IR水平均明顯升高，經(jīng)L6H4治

6、療后，F(xiàn)T組和DT組均明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　?。?）組織學(xué)改變：DM組大鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞核固縮、深染，顆粒層細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞變細(xì)、變長，髓鞘染色下可見部分區(qū)髓鞘丟失，排列紊亂。大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞凋亡數(shù)目增多，可見嗜神經(jīng)現(xiàn)象，病變以海馬齒狀回及CA4區(qū)最為明顯。經(jīng) L6H4治療后，DT組上述改變均明顯減輕，HF組和FT組相對于NC組未發(fā)現(xiàn)明顯差異。電鏡下DM組同樣可以發(fā)現(xiàn)明顯的神經(jīng)元細(xì)胞凋亡，核固縮等變化

7、。
　　（3）利用 TUNEL凋亡試劑盒檢測各組大鼠的腦組織神經(jīng)細(xì)胞。凋亡指數(shù)量化分析示：與NC組相比，DM組大腦神經(jīng)元細(xì)胞凋亡指數(shù)升高（P＜0.05）；經(jīng)姜黃素類似物L(fēng)6H4治療后，DT組大腦神經(jīng)元細(xì)胞凋亡指數(shù)較DM組顯著降低（P＜0.01），而FT組與HF組大腦神經(jīng)元細(xì)胞凋亡指數(shù)與NC組相比，均無顯著差異（P＞0.05）。
　　（4）姜黃素類似物 L6H4對糖尿病大鼠及高脂組大鼠腦組織氧化應(yīng)激指標(biāo)MDA、SOD的影響：與

8、NC組大鼠相比，DM組大鼠MDA水平明顯增高(P＜0.05)、SOD水平顯著降低(P＜0.01)；與 DM組大鼠相比，經(jīng)過L6H4治療后的DT組MDA水平明顯下降(P＜0.05)、SOD活性明顯增高(P＜0.05)。與 NC組大鼠相比，HF組大鼠MDA水平明顯增高(P＜0.05)，經(jīng)治療后MDA水平明顯下降（P＜0.05），而SOD活性無明顯差異。
　?。?）姜黃素類似物L(fēng)6H4對糖尿病大鼠及高脂組大鼠腦Bax、Bcl-2、Bax

9、/Bcl-2的影響：Western blot方法檢測腦組織中Bax和Bcl-2的蛋白表達(dá)情況，結(jié)果顯示DM組與HF組Bax顯著增加(P＜0.01)、Bcl-2明顯減少(HF組P＜0.05、DM組P＜0.01)；Bax/Bcl-2明顯升高(P＜0.05)。姜黃素類似物L(fēng)6H4治療后,DT組Bax較DM組明顯減少(P＜0.05)、Bax/Bcl-2較DM組明顯下降(P＜0.05)、Bcl-2較DM組顯著增加(P＜0.01)；而FT組Bax較