靶向流感M2質(zhì)子通道藥物篩選方法的研究.pdf

1、目的：A型流感病毒是一類具有高度傳染性的病毒，其可引起季節(jié)性流感和大流行性流感并伴有較高的發(fā)病率和致死率。近年來世界各地屢次發(fā)生流感病毒的重組和跨種族感染，例如2005年H5N1(禽流感)和2013年H7N9(禽流感)。相對于季節(jié)性人流感病毒，這些新型流感病毒的致死率極高（H5N1約60％）。然而由于人為的藥物濫用，M2質(zhì)子通道抑制劑金剛烷胺類藥物已經(jīng)對禽流感完全無效了；上海也已經(jīng)有臨床報(bào)道發(fā)現(xiàn)對達(dá)菲和扎那米韋都有耐藥性的H7N9病毒。

2、面對如此困境，我們應(yīng)該加快針對耐藥性流感病毒的新藥研發(fā)。本課題中，我們選取A型流感病毒M2質(zhì)子通道作為研究方向，構(gòu)建體外M2質(zhì)子通道靶點(diǎn)模型。同時(shí)采用以熒光偏振（FP）變化為指針的熒光篩選方法測定化合物是否與質(zhì)子通道結(jié)合，從而進(jìn)行先導(dǎo)化合物的篩選。最終希望將該方法優(yōu)化后建設(shè)成一個(gè)高通量藥物篩選平臺(tái)。
　　方法：靶向流感M2質(zhì)子通道藥物篩選方法。本課題中，使用多肽固相合成法合成M2蛋白的跨膜部分（M2TM）并在M2TM的N-端標(biāo)記一

3、個(gè)NBD熒光基團(tuán)（NBD-M2TM）。首先，通過超高速離心分析（AUC）證明NBD熒光基團(tuán)是否影響M2TM四聚體的形成和M2TM在表面活性劑中單體-四聚體平衡。然后，使用熒光篩選方法測定NBD-M2TM在7種表面活性劑中的單體-四聚體平衡并選出Kd值最佳的表面活性劑。最后，在Kd最佳的表面活性劑中做NBD-M2TM加入金剛烷胺(amt)的滴定曲線，測定amt是否可以改變NBD-M2TM的聚集狀態(tài)并結(jié)合NBD-2TM四聚體。
　　結(jié)