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1、我國(guó)是棉花種植大國(guó),但干旱缺水等環(huán)境因素越來(lái)越威脅著棉花的生長(zhǎng)發(fā)育。由于棉花耐旱性狀的復(fù)雜性和缺乏有效的選擇手段,常規(guī)育種對(duì)棉花耐旱性的改良進(jìn)展較慢。本研究是國(guó)內(nèi)外首次利用抑制消減雜交技術(shù)構(gòu)建棉花耐旱相關(guān)基因文庫(kù),從分子水平上進(jìn)行了棉花耐旱EST的篩選,為分離、克隆、轉(zhuǎn)化棉花耐旱基因奠定了基礎(chǔ)。 本研究通過(guò)抑制消減雜交技術(shù)成功的構(gòu)建了高質(zhì)量的亞洲棉石系亞1耐旱相關(guān)cDNA文庫(kù)。經(jīng)過(guò)藍(lán)白斑篩選、菌落PCR、反向Northern、
2、生物信息學(xué)、RT-PCR等分子生物手段分析和檢驗(yàn)庫(kù)了的質(zhì)量。通過(guò)對(duì)隨機(jī)挑選的、經(jīng)過(guò)菌落PCR初步驗(yàn)證的960個(gè)有效克隆做反向Northern,最終篩選出陽(yáng)性克隆392個(gè)。通過(guò)EST測(cè)序得到265個(gè)單一序列(unigene),其中41個(gè)為重疊群(contigs),224個(gè)為單拷貝(singlets)。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明:該抑制差減cDNA文庫(kù)中含有大量與耐旱相關(guān)的基因,且獲得的耐旱相關(guān)基因可以分為兩大類:一是功能蛋白類,如光合作用相關(guān)
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