石系亞1號(hào)gossypiumarboreuml.全生育期均一化全長(zhǎng)cdna文庫的構(gòu)建

1、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文石系亞1號(hào)（Gossypium arboreum L.）全生育期均一化全長(zhǎng)cDNA文庫的構(gòu)建姓名：王玉榮申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：李付廣20060601A b s t r a c tA s a nA s i 砒i cA _ g e n o n 圯d i p l o i d s p e c i e s ，S h i x i y aI ( 2 n = 2 6 ) h a s g o o

2、d g e D 甜cs t a b i l i t y ’r e s i s t a n c et ow i l t ，b a “℃n n e s st o l e r a n c e ，d r o u g h t 陀s i s t 蛐c e ．T h e b o l l so fS h i ) 【i ”I a r en o t e a s yt os h e d a n dp 甜s h ．I t i sc o n s i d e r

3、c d A s i a t i cc o t t o ng e n e 吐cs t a l l d a r dl i n e ．1 1 1o r d e r t o a c c e l e r a t em e d e v e l o p r n e n to f c o 仕o nf u n c t i o n a lg e n o 嘶c s a Ⅱdc l o n en e w g e n e s o f S h i x i ”Lan

4、 o 咖a l i z e df u l l - l e n g mc D N A 1 i b r a 】可o fS h i x i y aI i nt h ew h o l e n f ec y c l eh a sb e e nc o n g 仉l c t e d ．1 1 1 e 枷t e r i a l s u s e df o r l i b r a r y i I l c l u d e d 血e i n d i v i “

5、a l p l a n t o f m es h i x i y a I i n t l l e s t a g e o fc o t y l e d o na n ds e 酣1 i n 舀l e a v e si n t l l e s t a g eo fs e e d l i n ga n db u da I l d b 0 1 l ，n o w e r s ，b u d sa n db 0 1 1 si nd i 脆r e n

6、 ts t a g e s ．T b t a lR N A w a s e x 乜a c t e df r o m m o s e m a t e f i a l s w i t l l am O d i f i e dC T A B f 眥t h o d ．m R N Aw a s p u r i f i c df r o m t o t a lR N A w i t l lm e0 1 i g o t e xm 啉A M i n i

7、 尉t ．皿e n m R N A w a s r e v e r 跎仃a n s c r i p t c dt od o u b l cs 呦d s f u l ll e n g t l lc D N A w i t hm e s M A R T t e c h n i q u e ．c D N A n D m d i 廿℃r e n t t i s s u e sw a sn o r m a l i z e dw 訛廿l eD S

8、Nm e 血o d ．t h e nn l e n o r n l a l i z e dc D N Aw a sl i g a t e d w i t h ^ Z A P Ⅱv c c t o r1 1 l e n 0 衄l i z e d 舢1 e n g t hc D N A l i b 翔] r y w a sc o n s t m c t c da 腦p a c “n g t l l e l i g a t i O nw i

9、t l lG i g 印a c k ⅢX L p a c k a g i n g e x Ⅱa c t ．T h et i t e r 0 fp r i m a r yn b m r y w a s2 ×l O op f u ，m l ；t t l er e c o m b i n a d o nr a 廿ow a s 9 ( ) ％．T h ea v 即a g ei n s e n i o ns i z ew a sa b

10、o v e1 k b ．R e s u n si n d i c a t e d吐l a t t l l e n u m b e r o fc l o n e s a n d r e c o Ⅱl b i n a d o n r a t c so f 血e s e l i b r a r i e s a nm e t s t a n d a r d s o f Ⅱb r a r vc o n s t n l c Ⅱo n ．1 1 1

11、en t e ro ft h ea m p l i f i e dl i b r a r yi s 5 x l ∥p m 枷．A f t e r n o r I n a l i z i n g ，a b u n d a n tc l a s s e so fd i f f e r e n t g e n e st e n d e d t o e q u a Ⅱz e 。w h i c hc a I l i n c r e a s e t

12、 h ec h a l l c et od i s c o v e r n e w g e n e s ．1 1 1 o r d e rt oc l o n em e d i s e a s er e s i s t a n c cg e n e ，s l xp a i r sO fd e g e n 即a t ep r i n k r sw e r ed e s i g n e df m mc o n s e r v e d m o

13、t i f s o f p l a n t 坨s i s t a Ⅱt g e n e p r o d u c t s k n o w n l y ．S i x R G A sw e r e 0 b t a i m 蚵f | 0 m t h en 咖a l i z c d f u l l1 e n g E l lc D N A 1 i b r a r yw i m t l l eP C R m e 山0 d ．o n eR G A w

14、a s s e q u 即c e d ，s c q u e n c ea n a l y s i sf e v e a l e d “h a d8 2 ％s i f n i l 撕t yc o 哪d 協(xié)p r a 把i n c a m e TA T 3 G 2 2 8 4 5 刪王N A o f A r 曲i d D p 0 缸l 婦婦M ．T h e s e q u e n c e d a t aw a s 蚰b m i n e d

15、t 0G e I l B a I l k ，t h e G e n B a n k a c c e s s i o nn u I 曲e rw a s D Q 6 6 8 3 6 8 ．C o n s 廿u c n o n O f t h e n o m l a l i z e d f u U 1 e n g t l l c D N A1 i b r a r y w a si m p 0 柵tf o r t h e f u n c Ⅱ叫a

16、 lg e n o r r I i c so fS h i x i y a 【．T h eH b r a r yw a ss u i t a b l ef o rd o n i n g t l l e g e n e s a s s o c i a t e dw i 血t l l ed e v e l o p Ⅱ蛤mo fS h i x i y aI ．T h ec h a t l c et od i s c o v e rn e w

17、g e n e sw a s i n c r e a s e d 舭rt 1 1 e n o r n l a l i z 撕o n ．T h e l i b 刪了啪sa l s os u i t 曲l ef o r E s T p r o j e c t ．K e y w D r d ：W h o l e Ⅱf e c y c l e ，N o n n a I i z e df l l U l e n g mc D N A Ⅱb r a