2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁
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文檔簡介

1、本文通過TrizolReagent分離了強優(yōu)勢玉米雜交種豫玉22關(guān)鍵發(fā)育時期—雌穗分化時期—的總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，構(gòu)建了均一化cDNA文庫，為進一步研究和分離與雜種優(yōu)勢相關(guān)的基因構(gòu)建了技術(shù)平臺。在雌穗分化期中分別構(gòu)建四個獨立cDNA文庫，所提取總RNA紫外分光光度計測得OD260/OD280的比值為1.87、1.86、1.85和1.99，電泳檢測顯示18S、28SrRNA條帶清晰，且28S亮度明顯大于18S。分別以Not1pr

2、imer-adapter為引物合成cDNA第一條鏈，隨后以鏈置換法合成cDNA雙鏈。經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳檢測：兩條鏈最長可達5kb。在雙鏈cDNA兩段加接頭，經(jīng)過NotⅠ酶切，cDNA的分級分離，與載體NotⅠ-SalⅠ-Cutvector連接，轉(zhuǎn)化生成四個獨立cDNA文庫，重組率分別為：90％、87％、85％和93％，克隆數(shù)目分別為：2.7×105、6.4×104、3.1×105和2.1×104，每個獨立庫隨機挑取200個克隆，PCR

3、檢測插入片斷長度平均為1.2kb、1.3kb、1.4kb和1.3kb?！　≡ビ?2基因組DNA分別用EcoRⅠ、BamHⅠ先后酶切，單酶切后用KlenowFragment和C-21-biotin-dUTP補平末端，固定在鏈霉親和素磁珠上，構(gòu)建成基因組DNA親和雜交體系，而后取兩份均勻混合的體系先預(yù)雜交，接著四個獨立cDNA文庫各取10ug加入進行雜交。結(jié)束后，洗脫下雜交上的部分，復(fù)性轉(zhuǎn)化生成3×104個克隆的均一化cDNA文庫。挑取其

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