扶芳藤和大葉黃楊再生體系的建立及農(nóng)桿菌介導(dǎo)P5CS轉(zhuǎn)化扶芳藤的研究.pdf

1、試驗以扶芳藤和大葉黃楊為試材，以無芽莖段和下胚軸為外植體，以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，研究其植株再生的條件，主要就影響不定芽再生的生長調(diào)節(jié)劑組合與濃度、培養(yǎng)基組成以及外植體預(yù)培養(yǎng)時間等外部因素進行了探索，應(yīng)用石蠟切片技術(shù)對不定芽的起源進行了觀察，并進行了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的p5cs轉(zhuǎn)化扶芳藤的研究。主要試驗結(jié)果如下： 以扶芳藤的無芽莖段和下胚軸為外植體，建立了穩(wěn)定高效的不定芽再生體系。MS+6-BA(1.5 mg·L<'-1>)+lBA(

2、0.1 mg·L<'-1>)和MS+6-BA(1.3 mg·L<'-1>)+NAA(0.1 mg·L<'-1>)對誘導(dǎo)扶芳藤無芽莖段產(chǎn)生不定芽最為有利，再生率為82.6％和78.6％；不定芽主要發(fā)生在外植體的中部和鄰近切口的膨大處。以下胚軸為外植體時，將外植體預(yù)培養(yǎng)50d更有利于不定芽的誘導(dǎo)，中濃度的6-BA(1.3 mg·L<'-1>和1.5 mg·L<'-1>)對下胚軸直接分化產(chǎn)生不定芽有利，NAA(0.1 mg·L<'-1>)比相

3、同濃度的IBA更有利于不定芽的誘導(dǎo)。培養(yǎng)基MS+6-BA(1.5 mg·L<'-1>)+NAA(0.1 mg·L<'-1>)和MS+6-BA(1.3 mg·L<'-1>)+NAA(0.1 mg·L<'-1>)上不定芽再生率最高，分別達到95.7％和89.1％，外植體上平均產(chǎn)生不定芽的數(shù)量達3.69個和4.78個。以綿白糖和蔗糖為碳源均能達到較好的再生效果(80％以上)，以葡萄糖為碳源時再生率雖然高達100％，但玻璃化嚴(yán)重。生根培養(yǎng)基以1

4、/2MS+IAA(0.7 mg·L<'-1>)最好，生根率高達92.9％，經(jīng)馴化后移栽成活率在90％以上。 以大葉黃楊無芽莖段和下胚軸為外植體，建立了不定芽再生體系。以MS+6-BA1.7mg mg·L<'-1>+lBA0.005 mg·L<'-1>和MS+6-BA1.7 mg·L<'-1>+IAA0.005 mg·L<'-1>為誘導(dǎo)培養(yǎng)基有利于大葉黃楊無芽莖段的分化，多數(shù)不定芽產(chǎn)生于外植體的近切口處，再生率分別達到52.4％和

5、40.0％；20g·L<'-1>的白糖，30g·L<'-1>的蔗糖和葡萄糖為碳源對誘導(dǎo)大葉黃楊無芽莖段產(chǎn)生不定芽有利。以1/2MS+6-BA1.7mg·L<'-1>附加0.01mg·L<'-1>或0.005mg·L<'-1>IBA為誘導(dǎo)培養(yǎng)基時，下胚軸分化產(chǎn)生不定芽效果最好，分化率達40.0％；以1/2MS+IAA0.5mg·L<'-1>可有效地誘導(dǎo)不定根。 以扶芳藤和大葉黃楊的下胚軸和無芽莖段為外植體進行離體培養(yǎng)時，不定芽起源