桃果實(shí)幾個(gè)乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因的克隆及其表達(dá).pdf

1、乙烯是調(diào)控植物生長發(fā)育重要的氣態(tài)植物激素，其生理作用最終是通過其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑實(shí)現(xiàn)的。肥城桃(Prunus persica‘Feicheng’)為一地方特色名產(chǎn)，是典型的呼吸躍變型果實(shí)，對乙烯作用極為敏感。本實(shí)驗(yàn)從肥城桃果實(shí)中成功克隆了與乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)的4個(gè)全長基因，并在轉(zhuǎn)錄水平上研究了PpEILs和PpEBF1的表達(dá)特性，主要結(jié)果如下： 1.根據(jù)植物乙烯轉(zhuǎn)錄因子EIL(EIN3-like)家族的氨基酸和核苷酸保守區(qū)序列，設(shè)計(jì)簡

2、并引物，采用RT-PCR從成熟桃果實(shí)中分離了兩個(gè)571bp的EIL同源基因片段。隨后運(yùn)用RACE技術(shù)，分別擴(kuò)增得到了兩個(gè)包含完整開放閱讀框(ORF)及非編碼區(qū)序列(UTR)的乙烯轉(zhuǎn)錄因子的cDNA，即PpEIL1和PpEIL2。它們分別為2086 bp和2557 bp，編碼蛋白大小均為601個(gè)氨基酸。雖然PpEIL1和PpEIL2在氨基酸水平上的同源性僅為42％，但在N末端DNA結(jié)合功能域可高達(dá)86％。聚類分析結(jié)果表明，兩者分別屬于EI

3、N3/EIL家族兩類不同乙烯轉(zhuǎn)錄因子成員。 2.在GenBank中獲得的EST序列基礎(chǔ)上，分別通過5'RACE和3'RACE技術(shù)結(jié)合得到全長為3057 bp的PpEBF1，包含1941 bp的ORF、248 bp的5'UTR和868 bp的3'UTR，編碼蛋白的分子量為68.96 kD，推測等電點(diǎn)為7.41。根據(jù)EST庫中的核苷酸序列，設(shè)計(jì)特異引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果得到了1263 bp的PpERF1全長基因，包含一個(gè)708 b

4、p的ORF。序列分析表明，PpERF1與番茄、擬南芥、蘋果和葡萄等在DNA結(jié)合功能域的約58個(gè)氨基酸中，同源性可達(dá)68.4％-100％，且在該區(qū)域中存在1個(gè)-α螺旋和3個(gè)反平行鏈構(gòu)成的β-折疊結(jié)構(gòu)。該序列與擬南芥、葡萄、豌豆等植物的氨基酸同源性為58.8％-67.5％，屬于同一類ERF家族成員。 3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR表明，在花器官及花后40天的幼果中，PpEILs和PpEBF1表達(dá)量較高，隨著果實(shí)的成熟，表達(dá)量有增高的趨勢；2