含小分子激酶抑制劑的抗腫瘤鉑(Ⅳ)前藥研究.pdf

1、本文將順鉑與CK2的小分子ATP競(jìng)爭(zhēng)性激酶抑制劑CX-4945(Silmitasertib)相結(jié)合設(shè)計(jì)合成了一類(lèi)新型鉑(IV)前藥，相關(guān)化合物通過(guò)核磁氫譜、碳譜和高分辨質(zhì)譜進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征。
　　以代表性化合物Cx-platin為對(duì)象開(kāi)展了深入的化學(xué)與生物實(shí)驗(yàn)，研究了其抗腫瘤性質(zhì)，并探討了相關(guān)作用機(jī)制，主要內(nèi)容有:
　　高效液相色譜分析說(shuō)明Cx-platin在抗壞血酸還原下，軸向基團(tuán)脫落形成順鉑和CX-4945。穩(wěn)定性研究表明

2、正常條件下Cx-platin在24 h內(nèi)沒(méi)有發(fā)生變化，具有較好的穩(wěn)定性。
　　體外抗腫瘤活性研究表明Cx-platin對(duì)CK2過(guò)表達(dá)癌細(xì)胞具有高效的抑制活性，相同濃度條件下抑制率是順鉑的2-3倍，且對(duì)順鉑耐藥細(xì)胞敏感。人胃癌細(xì)胞(SGC-7901)和人胃癌順鉑耐藥細(xì)胞(SGC-7901/cDDP)對(duì)化合物的攝取量是順鉑的3-4倍?；诟咚降你K攝取量，Cx-platin表現(xiàn)出比順鉑更優(yōu)的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力。
　　CK2酶抑制

3、活性檢測(cè)結(jié)果表明，Cx-platin和CK2強(qiáng)效抑制劑CX-4945具有同等水平的抑制活性。單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Cx-platin能夠引起癌細(xì)胞DNA鏈解旋并且出現(xiàn)斷鏈損傷。Western Blot分析說(shuō)明用Cx-platin處理SGC-7901細(xì)胞和SGC-7901/cDDP耐藥細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)P-CHK1(S345)和P-CHK2(T68)的表達(dá)被激活，同時(shí)Cx-platin下調(diào)了CHK1和CHK2的表達(dá)水平，特別是在SGC-7

4、901/cDDP細(xì)胞內(nèi)。由此可以得出，細(xì)胞DNA損傷修復(fù)得到抑制，并且Cx-platin能夠引起細(xì)胞DNA的雙鏈斷裂。
　　熒光共聚焦顯微鏡圖顯示經(jīng)過(guò)Cx-platin處理過(guò)后的癌細(xì)胞內(nèi)，γH2AX的綠色熒光焦點(diǎn)密集分布。同時(shí)p-XRCC1以及MDC1的熒光強(qiáng)度相較于對(duì)照組有明顯的減弱。而順鉑只能稍微引起γH2AX的熒光焦點(diǎn)，且p-XRCC1的熒光強(qiáng)度相較于對(duì)照組有大幅度增加。這說(shuō)明經(jīng)過(guò)Cx-platin處理過(guò)后的癌細(xì)胞DNA發(fā)生

5、單鏈斷裂和雙鏈斷裂，且Cx-platin能夠抑制DNA斷鏈修復(fù)。而順鉑主要引起癌細(xì)胞DNA發(fā)生單鏈斷裂，并且不具備抑制作用。
　　體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在給藥次數(shù)最少的情況下（3次），Cx-platin能夠有效抑制腫瘤生長(zhǎng)，與順鉑、CX-4945及其兩者等摩爾混合物相比具有最優(yōu)的抗腫瘤活性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前后體重顯示給藥前后小鼠體重相對(duì)初始體重略有增加，組織學(xué)分析表明Cx-platin沒(méi)有引起正常細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，說(shuō)明Cx-platin對(duì)正常