GRHL1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、第一部分GRHL1、GRHL2在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系
　　目的：
　　研究GRHL1、GRHL2在NSCLC組織中的表達(dá)水平及其與臨床病理特征的關(guān)系。
　　方法：
　　通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)GRHL1、GRHL2在37例肺鱗癌、48例肺腺癌組織以及所對(duì)應(yīng)癌旁肺組織中的表達(dá)情況,并收集臨床病理資料,分析GRHL1、GRHL2的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟

2、件進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：
　　1、肺癌組織中GRHL1的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于癌旁肺組織,GRHL1在肺鱗癌組織與癌旁肺組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為32.43％（12/37）、81.08%（30/37）,GRHL1在肺腺癌組織與癌旁肺組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為31.25%（15/48）、83.33%（40/48）。肺癌組織中GRHL2的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁肺組織，GRHL2在肺鱗癌組織與癌旁肺組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為81.08%（3

3、0/37）、10.81%（4/37）,GRHL2在肺腺癌組織與癌旁肺組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為75.00%（36/48）、12.50%（6/48）。
　　2、GRHL1、GRHL2在肺癌中的表達(dá)程度與腫瘤的組織分化程度、臨床TNM分期以及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，而與患者年齡、性別、腫瘤病理類(lèi)型無(wú)關(guān)。
　　結(jié)論：
　　GRHL1在NSCLC組織中低表達(dá)，GRHL2在NSCLC組織中高表達(dá)。GRHL1、GRHL2在肺癌中的表達(dá)程

4、度與肺癌的組織分化程度、臨床TNM分期和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。
　　第二部分GRHL1對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
　　目的：
　　探討GRHL1過(guò)表達(dá)后對(duì)A549細(xì)胞增殖、周期、遷移、克隆能力的影響。
　　方法：
　　體外構(gòu)建GRHL1基因表達(dá)質(zhì)粒pENTER-Flag-GRHL1，采用脂質(zhì)體法將重組真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至低表達(dá)GRHL1的A549細(xì)胞系，構(gòu)建過(guò)表達(dá)GRHL1的A549細(xì)胞系，通過(guò)qPC

5、R、Westernblot鑒定表達(dá)產(chǎn)物。采用結(jié)晶紫細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)，觀察過(guò)表達(dá)GRHL1后對(duì)A549細(xì)胞增殖、周期、遷移、克隆能力的影響。
　　結(jié)果：
　　1、將成功構(gòu)建的pENTER-Flag-GRHL1表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，經(jīng)qPCR、Westernblot鑒定顯示GRHL1過(guò)表達(dá)效果明顯,由此可見(jiàn)構(gòu)建的GRHL1過(guò)表達(dá)A549細(xì)胞系A(chǔ)549-GRHL1(+)達(dá)到實(shí)驗(yàn)預(yù)期目標(biāo),可作

6、為本實(shí)驗(yàn)理想的細(xì)胞系。
　　2、結(jié)晶紫細(xì)胞染色結(jié)果顯示與空載質(zhì)粒VECTOR組相比，過(guò)表達(dá)GRHL1對(duì)A549細(xì)胞的增殖起到抑制作用；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)A549-GRHL1(+)組細(xì)胞周期被阻滯在G0/G1期；劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與空載質(zhì)粒VECTOR組相比，過(guò)表達(dá)GRHL1極大地抑制了A549細(xì)胞的遷移能力；細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)顯示與空載質(zhì)粒VECTOR組相比，過(guò)表達(dá)GRHL1能明顯抑制A549細(xì)胞的克隆能力。
　　結(jié)論：