協(xié)同刺激分子B7-H1和B7-H3在食管癌中表達(dá)的臨床意義及作用研究.pdf

1、近年來，對(duì)腫瘤微環(huán)境和腫瘤免疫逃逸機(jī)制的深入研究發(fā)現(xiàn)，一組介導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)的重要分子—免疫卡控點(diǎn)(Immune checkpoints)，如B7家族負(fù)性協(xié)同刺激分子：B7-H1、B7-H3、B7-H4、CTLA-4和Tim-3等，可異常表達(dá)于諸多人類腫瘤組織及腫瘤浸潤的免疫細(xì)胞，參與腫瘤免疫逃逸并與患者的臨床病理參數(shù)及預(yù)后密切相關(guān)，是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分。它們一方面通過負(fù)性調(diào)控T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤應(yīng)答，另一方面通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞自身的生物學(xué)

2、行為，共同參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。截至目前，協(xié)同刺激分子B7-H1、B7-H3分子在食管癌中的異常表達(dá)的臨床意義及生物學(xué)作用尚待深入研究。本課題一方面通過收集臨床樣本進(jìn)行回顧性研究，采用免疫組織化學(xué)及流式細(xì)胞術(shù)分別檢測協(xié)同刺激分子B7-H1和B7-H3在人食管癌細(xì)胞系及食管癌組織中的的表達(dá)水平，同時(shí)分析它們與患者的臨床參數(shù)、預(yù)后、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)及T淋巴細(xì)胞浸

3、潤程度等的相關(guān)性；另一方面在細(xì)胞及分子生物學(xué)水平，進(jìn)一步研究食管癌細(xì)胞株中異常表達(dá)B7-H3分子對(duì)其自身細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　本研究結(jié)果顯示：
　　(1)協(xié)同刺激分子 B7-H1在食管癌細(xì)胞株及食管癌組織中呈高表達(dá)，而在癌旁正常組織中呈低表達(dá)；食管癌組織中協(xié)同刺激分子B7-H1主要表達(dá)在食管癌細(xì)胞的胞漿及胞膜。
　　(2)協(xié)同刺激分子B7-H1在食管癌組織中的表達(dá)水平與腫瘤浸潤深度成顯著正相關(guān)(P=0.0261)

4、；食管癌組織中B7-H1高表達(dá)的患者，其預(yù)后顯著差于B7-H1低表達(dá)的患者(HR=2.157,95％ CI:1.017-4.577, P=0.0452)。(3)協(xié)同刺激分子 B7-H1亦可部分表達(dá)于食管癌細(xì)胞的細(xì)胞核，其在食管癌細(xì)胞核內(nèi)的表達(dá)水平與腫瘤浸潤深度成顯著正相關(guān)(P=0.0331)，B7-H1在食管癌細(xì)胞核內(nèi)的表達(dá)水平與患者預(yù)后無顯著相關(guān)性(P=0.6755)。(4)我們通過E-cadherin及Vimentin表達(dá)水平的組合

5、，來鑒定食管癌組織中 EMT的發(fā)生情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，食管癌組織中存在EMT的現(xiàn)象，并且T(3+4)組的患者，其EMT發(fā)生的比率顯著高于T(1+2)組的患者(P=0.0097)；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組(M1)組的患者，其 EMT發(fā)生的比率顯著高于未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組(M0)的患者(P=0.0253)；生存分析結(jié)果顯示，EMT組患者的預(yù)后顯著差于未發(fā)生EMT組的患者(HR=2.470,95%CI:1.971-2.970, P=0.0278)；我們將性別、年齡

6、、腫瘤大小、TNM分期、EMT狀態(tài)納入COX模型進(jìn)行多因素分析，結(jié)果顯示EMT狀態(tài)可以作為獨(dú)立的預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)因素(HR=2.306,95% CI:1.103-4.824, P=0.026)。(5)我們發(fā)現(xiàn)EMT組中B7-H1高表達(dá)的比率顯著高于未發(fā)生EMT組患者(P=0.0314)，B7-H1高表達(dá)及EMT組的患者，其預(yù)后顯著差于B7-H1低表達(dá)及未發(fā)生EMT的患者(HR=2.876,95% CI:1.182-6.997, P=0.0199

7、)。(6)協(xié)同刺激分子B7-H3在食管癌細(xì)胞株及食管癌組織中呈高表達(dá)，而在癌旁正常組織中呈低表達(dá)，B7-H3在食管癌細(xì)胞中的表達(dá)主要定位于胞漿胞膜。(7)食管癌組織中B7-H3的表達(dá)水平與腫瘤浸潤深度呈顯著正相關(guān)(P=0.0200)，與 CD3+T淋巴細(xì)胞浸潤程度呈顯著負(fù)相關(guān)(P=0.0250)，食管癌組織中 B7-H3高表達(dá)的患者，其預(yù)后顯著差于低表達(dá)的患者(HR=1.564,95%CI:1.040-2.351, P=0.0318)；

8、(8)我們采用慢病毒轉(zhuǎn)染及RNAi技術(shù)，構(gòu)建了食管癌細(xì)胞株Eca-109中B7-H3下調(diào)表達(dá)的模型，并分別在mRNA及蛋白水平進(jìn)行驗(yàn)證；(9)我們進(jìn)一步通過克隆形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞增殖檢測、劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)，證實(shí)B7-H3在食管癌細(xì)胞系Eca-109中的下調(diào)表達(dá)，顯著抑制細(xì)胞克隆形成能力、細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力。
　　綜上所述，我們首次報(bào)導(dǎo)了負(fù)性協(xié)同刺激分子B7-H1、B7-H3在食管癌中表達(dá)的臨床意義及其生物學(xué)作