芒果苷改善高果糖所致大鼠腎間質(zhì)纖維沉積和胰島素抵抗的作用與機(jī)制研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)一:芒果苷改善高果糖所致自發(fā)性高血壓大鼠腎間質(zhì)纖維沉積的可能機(jī)制
　　目的:探討芒果苷（mangiferin，MA）對(duì)高果糖飲食引起的自發(fā)性高血壓大鼠（spontaneously hypertensive rats，SHRs）腎間質(zhì)纖維沉積的影響以及其可能的機(jī)制。
　　方法:24只SHRs按隨機(jī)單位組設(shè)計(jì)分組法隨機(jī)分為對(duì)照組、果糖組、果糖＋低劑量MA（5mg/kg）組和果糖＋高劑量MA（15mg/kg）組。實(shí)驗(yàn)周期為7W

2、，7W末處死大鼠，取血漿、腎臟組織。檢測血漿葡萄糖（glucose，Glu）、甘油三酯（triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、游離脂肪酸（non-esterified fatty acid，NEFA）和腎組織甘油三酯含量，Masson染色后半定量評(píng)估腎間質(zhì)纖維沉積的程度， Real time PCR檢測腎組織單核細(xì)胞趨化蛋白-1（monocyte chemoattractant prot

3、ein-1，MCP-1）、CD68、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、Ⅳ型膠原蛋白α-Ⅳ鏈[collagen alpha-4（Ⅳ）chain，col4a4]、轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-beta，TGF-β）、纖溶酶原激活物抑制劑-1（plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1）、尿激酶纖溶酶原激活物（urokin

4、ase plasminogen activator，uPA）mRNA的表達(dá)，免疫組織化學(xué)顯示腎臟uPA、PAI-1蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:與對(duì)照組比較，果糖組SHRs腎間質(zhì)膠原纖維沉積率顯著增加（P<0.01），而MA（15mg/kg）明顯減輕果糖引起的SHRs腎間質(zhì)膠原纖維沉積（P<0.05）。各組腎臟甘油三酯含量沒有變化，腎組織MCP-1、CD68、α-SMA、col4a4、TGF-β mRNA也沒有明顯變化，但MA（15m

5、g/kg）明顯逆轉(zhuǎn)了果糖引起的uPA/PAI-1 mRNA比值的降低（P<0.05），同時(shí)明顯降低高果糖引起的PAI-1蛋白表達(dá)水平的升高。
　　結(jié)論: MA（15mg/kg）能顯著改善高果糖飲食所致SHRs腎間質(zhì)纖維沉積，其機(jī)制可能與調(diào)控腎組織PAI-1、uPA有關(guān)。
　　實(shí)驗(yàn)二:芒果苷改善高果糖所致大鼠胰島素抵抗的作用機(jī)制初探
　　目的：初步探究芒果苷對(duì)高果糖所致大鼠胰島素抵抗的改善作用以及其可能的機(jī)制。
　

6、　方法：18只WKY（Wistar-Kyoto）大鼠和18只SHRs隨機(jī)分為6組：（1）WKY對(duì)照組，自由飲用清水；（2）WKY果糖組，自由飲用10％果糖水；（3）WKY用藥組，自由飲用10%果糖水+芒果苷（15mg/kg體重）；（4）SHR對(duì)照組，自由飲用清水；（5）SHR果糖組，自由飲用10%果糖水；（6）SHR用藥組，自由飲用10%果糖水+芒果苷（15mg/kg體重）。于實(shí)驗(yàn)第6周末，隔夜禁食，取血（作為OGTT的0min），隨之

7、行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT），檢測各時(shí)間點(diǎn)血漿胰島素、葡萄糖（Glu）、游離脂肪酸（NEFA）、甘油三酯（TG）水平。計(jì)算脂肪組織胰島素抵抗評(píng)價(jià)指標(biāo) Adipo-IR[空腹胰島素水平（mmol/L）×空腹游離脂肪酸水平（pmol/L）]以及肝臟胰島素抵抗評(píng)價(jià)指標(biāo)HOMA-IR{[空腹胰島素水平（μIU/ml）×空腹葡萄糖水平（mM）]/22.5}，統(tǒng)計(jì)并分析OGTT血漿NEFA的清除率。于實(shí)驗(yàn)第7周末隔夜禁食后處死動(dòng)物并取材。Rea

8、l time PCR、Western blot分別檢測WKY大鼠骨骼肌CD36基因與蛋白表達(dá)，免疫熒光觀察CD36在骨骼肌細(xì)胞中的分布變化。
　　結(jié)果:高果糖引起WKY大鼠OGTT各時(shí)間點(diǎn)血漿胰島素水平上升，同時(shí)上調(diào)了HOMA-IR和Adipo-IR。OGTT結(jié)果還顯示高果糖飲食加速了WKY大鼠NEFA的清除速率。然而對(duì)SHR，高果糖誘導(dǎo)的這些不良反應(yīng)都呈減弱趨勢。采用芒果苷干預(yù)治療后，對(duì)WKY大鼠，高果糖所致高胰島素血癥/胰島素

9、抵抗明顯減弱，HOMA-IR和Adipo-IR也明顯下降，OGTT結(jié)果顯示NEFA的清除速率下降。而對(duì)SHR，芒果苷的作用不明顯。Real time PCR和Western blot結(jié)果顯示W(wǎng)KY大鼠骨骼肌CD36 mRNA和骨骼肌總蛋白提取物中CD36蛋白的表達(dá)在各組之間并無差異，而免疫熒光染色激光共聚焦顯微鏡觀察顯示，芒果苷抑制了高果糖所致WKY大鼠CD36在骨骼肌細(xì)胞膜的過表達(dá)。
　　結(jié)論：芒果苷可能通過調(diào)控CD36相關(guān)通路