簡(jiǎn)介：學(xué)校名稱華中農(nóng)業(yè)大學(xué)分類號(hào)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文單位代碼10504密級(jí)基于生境分析的遠(yuǎn)安縣生物植物多樣性保護(hù)規(guī)劃研究PLANTBIODIVERSITYCONSERVATIONPLANNINGOFYUANANCOUNTYBASEDONTHEHABITATANALYSIS研究生學(xué)號(hào)指導(dǎo)教師學(xué)位類型領(lǐng)域李曉瑋2011305120027姚崇懷副教授風(fēng)景園林碩士風(fēng)景園林華中農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝林學(xué)學(xué)院園藝植物生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中國(guó)武漢COLLEGEOFHORTICULTRUEANDFORESTRYSCIENCESHUAZHONGAGRICULTURALUNIVERSITYWUHAN，CHINA基于生境分析的遠(yuǎn)安縣生物植物多樣性保護(hù)規(guī)劃研究目錄摘要IABSTRACTII1前言1L刖舌L11研究背景112國(guó)內(nèi)外研究概況2121國(guó)外研究概況2122國(guó)內(nèi)研究概況313研究目的與意義42研究?jī)?nèi)容與方法521研究?jī)?nèi)容5211遠(yuǎn)安縣生態(tài)環(huán)境調(diào)查分析52。12生物植物多樣性資源調(diào)查5213生境規(guī)劃5214遠(yuǎn)安縣生物植物多樣性保護(hù)規(guī)劃522研究對(duì)象6221研究范圍6222研究區(qū)域概況623研究方法8231資料收集8232植物多樣性調(diào)查及研究方法8233調(diào)查資料整理及現(xiàn)狀分析9234生境適宜性分析方法924技術(shù)路線133結(jié)果與分析1431生境分析14311縣域生境分析。14312縣城生境分析18

簡(jiǎn)介：NORTHWEST婦NNANBYTIANXIANGYUADISSERTATIONSUBMITTEDTOUNIVERSITYOFCHINESEACADEMYOFSCIENCESINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTFORTHEDEGREEOFMASTEROFSCIENCEKUNMINGINSTITUTEOFBOTANYCHINESEACADEMYOFSCIENCESJUNE，2014A一研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)聲明本人完全了解并同意遵守中科院昆明植物研究所有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即研究所有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和電子文件，并提供論文的目錄檢索及借閱、查閱；研究所可以公布論文的全部或部分內(nèi)容，可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密的論文在解密后遵守此規(guī)定。作者簽名＼移孕釓乎導(dǎo)師簽名物乙時(shí)間二M沙土，2炙?！危琘’【7J／√

簡(jiǎn)介：分類號(hào)工匕避2UDC專業(yè)學(xué)位碩士學(xué)位論文基于植物多樣性保護(hù)的梧州市城市綠地系統(tǒng)規(guī)劃研究吳訪專業(yè)學(xué)位名稱王猩亟建筮皇丕王猩塑邀2指導(dǎo)教師逝堡數(shù)拯墓渲塾握級(jí)直級(jí)工猩巫論文答辯日期2Q至生旦2墨目學(xué)位授予日期2Q生12旦三Q旦答辯委員會(huì)主席董險(xiǎn)蝰熬援基于植物多樣性保護(hù)的梧州市城市綠地系統(tǒng)規(guī)劃研究摘要邁進(jìn)2L世紀(jì)之后，我國(guó)的現(xiàn)代化和城鎮(zhèn)化程度進(jìn)一步加快，在經(jīng)濟(jì)GDP不斷增長(zhǎng)的同時(shí)，城市的發(fā)展也出現(xiàn)了各種問題。由于城市人口高密度聚集，管理無序和各類配套設(shè)施明顯滯后，導(dǎo)致城市的土地資源、水資源等越來越緊缺，而隨之而來的廢氣增多、垃圾填滿池不足、工業(yè)廢水和生活污水隨意排放以及溫室效應(yīng)等城市病現(xiàn)象在全國(guó)蔓延開來，這對(duì)各城市的建設(shè)發(fā)展起到了嚴(yán)重的制約。因此迫切需要調(diào)整城市戰(zhàn)略布局，通過調(diào)整城市綠地系統(tǒng)布局結(jié)構(gòu)模式來緩和城市病現(xiàn)象，使得城市重新煥發(fā)大自然的生態(tài)之貌。廣西壯族自治區(qū)梧州市地處南疆，自身依山傍水，生態(tài)環(huán)境優(yōu)美。其當(dāng)前也處于城市大開發(fā)、大建設(shè)的時(shí)期，因此通過研究當(dāng)?shù)刂参锒鄻有员Ｗo(hù)并依托其構(gòu)建完善的城市綠地系統(tǒng)布局對(duì)梧州市未來的城市發(fā)展意義十分重大。論文采用了文獻(xiàn)資料研究法、實(shí)地調(diào)研和典型樣地調(diào)查方法、定量和定性以及采用由寬到窄，由淺入深分層逐類分析等研究方法，以梧州市植物多樣性和城市現(xiàn)狀綠地布局為研究對(duì)象，按照國(guó)家城市綠地分類標(biāo)準(zhǔn)對(duì)梧州市現(xiàn)狀綠地情況進(jìn)行資料收集和現(xiàn)場(chǎng)實(shí)地典型樣方抽樣調(diào)查的工作。同時(shí)對(duì)調(diào)研數(shù)據(jù)借助FRAGSTATS軟件和人工整理分析，充分研究梧州市城區(qū)植物多樣性現(xiàn)狀特征和綠地現(xiàn)有景觀格局特征，指出其存在的問題，探討建立植物生態(tài)廊道的城市綠地系統(tǒng)規(guī)劃的理論與方法，恢復(fù)綠地景觀之間被人類活動(dòng)中止或破壞的相互聯(lián)系，將城市綠地系統(tǒng)的重新布局和整合，重新恢復(fù)和打造新的綠色生態(tài)廊道系。立足區(qū)域整體視野，結(jié)合梧州市本地的情況和特色，具體問題具體分析，力爭(zhēng)找到最適合實(shí)現(xiàn)梧州市生態(tài)效益、社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益三者合一的城市綠地系統(tǒng)規(guī)劃布局結(jié)構(gòu)模式。關(guān)鍵詞植物多樣性梧州市城市綠地系統(tǒng)；生態(tài)廊道；綠地分類；布局結(jié)構(gòu)

簡(jiǎn)介：分類號(hào)TU986密級(jí)公開UDC635全日制碩士學(xué)位論文全日制碩士學(xué)位論文世界遺產(chǎn)世界遺產(chǎn)視野下視野下植物景觀植物景觀的保護(hù)管理的保護(hù)管理研究研究以杭州西湖文化景觀為例以杭州西湖文化景觀為例作者姓名名殷曉彤殷曉彤指導(dǎo)教師包志毅包志毅教授教授專業(yè)學(xué)位名稱專業(yè)學(xué)位名稱園林植物與觀賞園藝園林植物與觀賞園藝研究方向向園林植物應(yīng)用與效益園林植物應(yīng)用與效益評(píng)估評(píng)估所在學(xué)院院風(fēng)景園林與建筑學(xué)院風(fēng)景園林與建筑學(xué)院論文提交日期論文提交日期2014年6月浙江農(nóng)林大學(xué)2014年6月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文，在指導(dǎo)教師指導(dǎo)下，通過我的努力取得的成果，并且是自己撰寫的。盡我所知，除了文中作了標(biāo)注和致謝中已經(jīng)作了答謝的地方外，論文中不包含其他人發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含在浙江農(nóng)林大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)獲得學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同對(duì)本研究做出貢獻(xiàn)的同志，都在論文中作了明確的說明并表示了謝意。如被查有嚴(yán)重侵犯他人知識(shí)產(chǎn)權(quán)的行為，由本人承擔(dān)應(yīng)有的責(zé)任。學(xué)位論文作者親筆簽名日期論文使用授權(quán)的說明論文使用授權(quán)的說明本人完全了解浙江農(nóng)林大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)送交論文的復(fù)印件，允許論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。保密，在年后解密可適用本授權(quán)書?！醪槐Ｃ鼙緦W(xué)位論文屬于不保密?！酰ㄕ?qǐng)?jiān)诜娇騼?nèi)打“√”）學(xué)位論文作者親筆簽名日期指導(dǎo)教師親筆簽名日期

簡(jiǎn)介：LLLFLJLL／LLLLFFLJII／LLRLLLJIII／LLLLLLLLIJJIL／LL件黌號(hào)U蚪8I苗緶壘五西北農(nóng)林講杖大學(xué)屆攻讀碩士學(xué)位研究生學(xué)位畢業(yè)論文陜西米倉(cāng)山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)種子植物資源研究學(xué)科專業(yè)研究方向研究生指導(dǎo)教師完成時(shí)間焦塑堂生塑墨搓絲堡豎皇堡遁型旦刻麴壓鯊亙』塾堡至5旦研究生學(xué)位畢業(yè)論文的獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的碩士學(xué)位畢業(yè)論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行的研究工作及取得的研究結(jié)果；論文中的研究數(shù)據(jù)及結(jié)果的獲得完全符合學(xué)校關(guān)于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學(xué)研究生學(xué)術(shù)道德的暫行規(guī)定，如果違反此規(guī)定，一切后果與法律責(zé)任均由本人承擔(dān)。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究結(jié)果，也不包含其他人和自己本人已獲得西北農(nóng)林科技大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同事對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文的致謝中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名主0哏I帆≯77年／月Z日導(dǎo)師指導(dǎo)研究生學(xué)位畢業(yè)論文的承諾、本人承諾我的碩士研究生童IIL≯K所呈交的碩士學(xué)位畢業(yè)論文是在我指導(dǎo)下獨(dú)立開展研究工作及取得的研究結(jié)果，屬于我現(xiàn)崗職務(wù)工作的結(jié)果，并嚴(yán)格按照學(xué)校關(guān)于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學(xué)研究生學(xué)術(shù)道德的暫行規(guī)定而獲得的研究結(jié)果。如果違反學(xué)校關(guān)于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學(xué)研究生學(xué)術(shù)道德的暫行規(guī)定，我愿接受按學(xué)校有關(guān)規(guī)定的處罰處理并承擔(dān)相應(yīng)導(dǎo)師連帶責(zé)任。導(dǎo)師簽名刁事、艫帆矽『7年鄉(xiāng)月≥日

簡(jiǎn)介：以植物乳桿菌299為研究菌株，為了提高植物乳桿菌299的最終活菌數(shù)，為其將來的商業(yè)化生產(chǎn)提供參考，分別對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基、高密度發(fā)酵工藝、真空冷凍干燥的凍干工藝和保護(hù)劑濃度以及菌粉包裝及儲(chǔ)藏期進(jìn)行了研究，并得到了以下結(jié)論1通過單因素、PB和響應(yīng)面試驗(yàn)分析，以MRS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，優(yōu)化得到植物乳桿菌299的最佳培養(yǎng)基為蛋白胨233％，酵母膏141％，葡萄糖252％，檸檬酸氫二胺040％，乙酸鈉030％，磷酸氫二鉀080％，TWEEN80030％，硫酸錳00025％。培養(yǎng)得到的菌體OD600可達(dá)到12687，比相同條件下在MRS培養(yǎng)基中菌體OD600提高了289％，同時(shí)，優(yōu)化后的培養(yǎng)基去掉了牛肉膏和硫酸鎂兩種成分，簡(jiǎn)化了培養(yǎng)基配方。2在確定最適培養(yǎng)基以及前期實(shí)驗(yàn)室工作的基礎(chǔ)上，在30L半自動(dòng)發(fā)酵罐上對(duì)影響高密度發(fā)酵工藝的因素進(jìn)行優(yōu)化，得到最佳高密度發(fā)酵工藝為發(fā)酵恒定PH值為55，中和劑為25％的氨水，攪拌轉(zhuǎn)速為100RMIN，菌體生長(zhǎng)限制性底物為碳源和氮源，補(bǔ)料液碳源和氮源最佳比例為3∶2，同時(shí)在對(duì)數(shù)期末期對(duì)發(fā)酵體系進(jìn)行相隔4H的兩次補(bǔ)料。在此條件下，植物乳桿菌299經(jīng)過高密度發(fā)酵培養(yǎng)24H后，發(fā)酵液的菌體OD600可達(dá)到13422，較普通發(fā)酵培養(yǎng)提高約44％。3對(duì)影響真空冷凍干燥的條件及保護(hù)劑配方進(jìn)行優(yōu)化。得到該菌株的最佳凍干工藝為預(yù)凍溫度為80℃，預(yù)凍時(shí)間為2H，菌泥與保護(hù)劑的最佳比例為2∶5，最佳凍干厚度為12CM，脫脂乳濃度為16％，凍干時(shí)間為20H。經(jīng)過優(yōu)化后，最終獲得的菌粉中植物乳桿菌299的活菌數(shù)達(dá)到2111011CFUG，凍干存活率為898％。4對(duì)植物乳桿菌299的菌粉包裝及儲(chǔ)藏條件進(jìn)行了研究。發(fā)現(xiàn)在20℃保藏1年時(shí)間內(nèi)，用鋁箔袋和PETPE袋（普通真空包裝袋）進(jìn)行包裝時(shí)，兩者無顯著性差異，菌活仍可維持在1011CFUG在4℃及25℃下保藏時(shí)，鋁箔袋對(duì)菌體的保護(hù)效果較PETPE袋效果好，并且溫度越高，差異性越大用鋁箔袋進(jìn)行充氣包裝時(shí)，發(fā)現(xiàn)混合氣體為95％N25％CO2時(shí)菌體存活率最高。

簡(jiǎn)介：中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所博士學(xué)位論文瀕危藥用植物云南黃連的保護(hù)生物學(xué)研究姓名黃驥申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)植物學(xué)指導(dǎo)教師裴盛基20040927瀕危藥用植物云南黃連的保護(hù)生物學(xué)研究瀕危藥用植物云南黃連的保護(hù)生物學(xué)研究II3民族植物學(xué)研究民族植物學(xué)研究運(yùn)用民族植物學(xué)原理，采用野外面上調(diào)查、定點(diǎn)社區(qū)調(diào)查和文獻(xiàn)研究相結(jié)合的辦法，深入調(diào)查高黎貢山地區(qū)傈僳族和勒墨人對(duì)云南黃連的各種傳統(tǒng)利用方式及歷史，總結(jié)他們管理、保護(hù)和開發(fā)這一名貴藥用植物的傳統(tǒng)知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)，進(jìn)而研究云南黃連產(chǎn)區(qū)的民族民間傳統(tǒng)知識(shí)與利用、保護(hù)、栽培黃連的互動(dòng)關(guān)系，通過民族植物學(xué)定點(diǎn)研究，確定人類活動(dòng)對(duì)云南黃連種群、群落和生態(tài)系統(tǒng)的影響程度，結(jié)果表明1）130年前，由于云南黃連的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，過度的采挖使其野生種群幾近枯竭，為了維持這一寶貴的經(jīng)濟(jì)來源，傈僳族發(fā)展了一套行之有效、并且具有深刻科學(xué)意義的種植、撫育和采收的資源可持續(xù)利用管理方法，不僅持續(xù)有效地利用了這一資源，并且也保護(hù)了其賴以生存的森林生境；2）傈僳族對(duì)云南黃連的引種栽培盡管更多是出于經(jīng)濟(jì)目的，但有效地保護(hù)了這一瀕于滅絕的藥用植物，他們建立和發(fā)展起來的種植、管理模式可以看作是我們現(xiàn)代保護(hù)學(xué)者所推崇的就地保護(hù)，它不僅是傳統(tǒng)文化與植物資源直接相互作用的一個(gè)范例，也是當(dāng)?shù)厝藢?duì)生物多樣性資源進(jìn)行管理的一種方式，對(duì)野生種群很少的藥用植物進(jìn)行栽培和管理，對(duì)于當(dāng)?shù)厣锒鄻有缘谋Ｗo(hù)和經(jīng)濟(jì)植物的可持續(xù)利用，無疑起到了積極的推動(dòng)作用；3）在傳統(tǒng)信仰文化的背景下，以經(jīng)濟(jì)利益為強(qiáng)大動(dòng)力的對(duì)某一物種的利用，客觀上起到了在多個(gè)層次上對(duì)生物多樣性發(fā)生影響的作用，體現(xiàn)了各少數(shù)民族和植物之間的互動(dòng)關(guān)系。傳統(tǒng)文化通過對(duì)云南黃連的利用及引種栽培，在物種水平上發(fā)揮作用；通過對(duì)云南黃連適生生境的特定植物群落類型的利用和維護(hù)，使系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和組成發(fā)生改變，從而在系統(tǒng)水平上發(fā)揮作用；通過對(duì)自然景觀的塑造和文化－自然景觀的建立而在景觀水平上發(fā)揮作用；4）云南黃連混農(nóng)林生態(tài)系統(tǒng)并不是孤立存在的，它是傳統(tǒng)生產(chǎn)和保護(hù)系統(tǒng)的有機(jī)組成部分。通過鄉(xiāng)土自然保護(hù)體系而發(fā)揮著綜合的作用，并與現(xiàn)代的自然保護(hù)區(qū)存在著密切的聯(lián)系，是以現(xiàn)代科學(xué)為基礎(chǔ)的正式保護(hù)體系十分必要和積極的補(bǔ)充。它是傳統(tǒng)文化與特定自然環(huán)境相互作用、相互統(tǒng)一和協(xié)同進(jìn)化的結(jié)果。作為一種迄今仍然發(fā)揮著重要作用，并對(duì)群眾日常生產(chǎn)和生活產(chǎn)生持續(xù)影響的自然保護(hù)體系，鄉(xiāng)土自然保護(hù)體系體現(xiàn)了傳統(tǒng)信仰文化對(duì)自然保護(hù)的積極貢獻(xiàn)，是山地民族文化的一個(gè)組成部分，也是他們的祖先留給我們的寶貴遺產(chǎn)。4解剖生態(tài)學(xué)研究解剖生態(tài)學(xué)研究黃連屬植物的葉片由表皮、葉肉和葉脈構(gòu)成，上下表皮細(xì)胞從縱切面上看，排列整齊，呈近長(zhǎng)方形扁平狀，具角質(zhì)層；上下表皮內(nèi)的葉肉薄壁細(xì)胞排列較整齊，類圓形，沒有明顯分化為柵欄組織和海綿組織；葉脈為大型的薄壁細(xì)胞包圍著一個(gè)維管束而成。這些特征都說明了黃連屬植物不耐干旱的生物學(xué)特性和對(duì)溫涼、濕潤(rùn)生境的生態(tài)學(xué)要求。從解剖特征來看，黃連屬植物，特別是云南黃連在根、葉各器官的結(jié)構(gòu)、功能上存在著明顯的抗旱和其它抗逆性弱點(diǎn)，致使種群適應(yīng)力、擴(kuò)展力較弱，從而可

簡(jiǎn)介：密級(jí)論文編號(hào)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文植物精油植物精油對(duì)LPS誘導(dǎo)誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞奶牛乳腺上皮細(xì)胞損傷損傷的保護(hù)作用保護(hù)作用研究研究STUDYOFPLANTDERIVEDESSENTIALOILPROTECTIONINJURYOFBOVINEMAMMARYEPITHELIALCELLSINDUCEDBYLIPOPOLYSACIDE碩士研究生生林杰指導(dǎo)教師師楊志強(qiáng)楊志強(qiáng)申請(qǐng)學(xué)位類別申請(qǐng)學(xué)位類別農(nóng)學(xué)農(nóng)學(xué)碩士碩士專業(yè)業(yè)基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)研究方向向獸醫(yī)藥理與毒理學(xué)獸醫(yī)藥理與毒理學(xué)培養(yǎng)單位位中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所蘭州畜牧與獸藥研究所2016年6月I獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名時(shí)間年月日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。研究生簽名時(shí)間年月日導(dǎo)師簽名時(shí)間年月日

簡(jiǎn)介：目的近年來，研究者應(yīng)用組織工程學(xué)原理和方法，對(duì)周圍神經(jīng)進(jìn)行脫細(xì)胞處理，制備了神經(jīng)細(xì)胞外基質(zhì)移植物；并用此種移植物修復(fù)周圍神經(jīng)缺損，獲得了促進(jìn)受損神經(jīng)纖維再生及其功能恢復(fù)良好的效果。然而該種移植物對(duì)發(fā)出相關(guān)神經(jīng)纖維的神經(jīng)母細(xì)胞如脊神經(jīng)的脊髓前角細(xì)胞和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞有何作用，尚未見有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。該研究對(duì)此問題進(jìn)行了探討。方法用WISTAR大鼠30只，10只用化學(xué)提取法制備坐骨神經(jīng)脫細(xì)胞基質(zhì)移植物；另20只分為實(shí)驗(yàn)組坐骨神經(jīng)缺損脫細(xì)胞基質(zhì)移植物橋接組和對(duì)照組坐骨神經(jīng)缺損組，每組10只。動(dòng)物飼養(yǎng)3到4個(gè)月后取移植物，脊髓腰7骶2節(jié)段和同節(jié)段脊神經(jīng)節(jié)，做HE，尼氏染色標(biāo)本以及電鏡標(biāo)本，進(jìn)行組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)觀察，并對(duì)脊髓前角和脊神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果用化學(xué)提取法制備脫細(xì)胞周圍神經(jīng)基質(zhì)移植物的各步驟如果改在室溫下進(jìn)行，可縮短制備時(shí)間710天。實(shí)驗(yàn)組脫細(xì)胞移植物橋接神經(jīng)缺損術(shù)后跟蹤觀察大鼠的自然狀態(tài)可見，術(shù)后3或4個(gè)月時(shí)，移植術(shù)側(cè)下肢行走時(shí)后蹬動(dòng)作有力，足趾能分開，步態(tài)趨于正常；針刺足底有逃避動(dòng)作。對(duì)照組神經(jīng)缺損動(dòng)物術(shù)側(cè)下肢的運(yùn)動(dòng)和感覺功能未見恢復(fù)。術(shù)后3或4個(gè)月實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物移植物的HE染色橫切片和縱切片標(biāo)本上，見有大量的再生1神經(jīng)纖維；在電鏡標(biāo)本上，再生軸突，髓鞘及施萬細(xì)胞也清晰可見。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組正常側(cè)的脊髓L7S2節(jié)段前角細(xì)胞的HE和尼氏染色標(biāo)本可見，細(xì)胞形體較大，分為內(nèi)側(cè)群和外側(cè)群，胞質(zhì)內(nèi)有較豐富的呈斑塊狀的尼氏體。實(shí)驗(yàn)組移植物和對(duì)照組缺損側(cè)脊髓L7S2節(jié)段前角細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)基本正常，但是分群已不明顯，并有膠質(zhì)細(xì)胞增生。特別是支配四肢肌的前角細(xì)胞的數(shù)量減少，尤以對(duì)照組為甚。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，脊髓前角細(xì)胞數(shù)實(shí)驗(yàn)組移植側(cè)1037±145與正常側(cè)1440±181以及移植側(cè)與對(duì)照組缺損側(cè)597±169比較，差異均顯著P＜001。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組正常側(cè)L7S2脊神經(jīng)節(jié)HE和尼氏染色標(biāo)本可見，細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，胞質(zhì)內(nèi)充滿細(xì)砂粒狀尼氏體，由大、中、小細(xì)胞組成。實(shí)驗(yàn)組移植側(cè)和對(duì)照組缺損側(cè)的L7S2脊神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)基本正常。但是其數(shù)量較正常側(cè)減少，并以對(duì)照組缺損側(cè)最為明顯。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，脊神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)實(shí)驗(yàn)組移植側(cè)4557±588與正常側(cè)5357±657以及移植側(cè)與對(duì)照組缺損側(cè)3690±515比較，差異均有顯著性意義P＜001。結(jié)論該實(shí)驗(yàn)在無菌，室溫條件下制備周圍神經(jīng)細(xì)胞外基質(zhì)移植物能夠縮短時(shí)間，可供急用。該實(shí)驗(yàn)表明，此移植物免疫原性基本消失，具有良好的組織相容性，能有效的引導(dǎo)和促進(jìn)受損神經(jīng)再生。該實(shí)驗(yàn)首次證明，此移植物對(duì)發(fā)出脊神經(jīng)的脊髓前角細(xì)胞和脊神經(jīng)節(jié)細(xì)胞具有較強(qiáng)的保護(hù)作用。

簡(jiǎn)介：第一部分改良三袖套法建立大鼠左肺原位移植動(dòng)物模型目的采用改良袖套法技術(shù)建立大鼠同種異體左肺移植模型。方法對(duì)供肺獲取、套管制作、自體肺切除、血管和氣管袖套套接技術(shù)進(jìn)行改進(jìn)。30例清潔級(jí)SD大鼠左供肺獲取后置于4℃的LPDG液保存3小時(shí)，隨后行肉眼直視下同種異體左肺移植術(shù)，再灌注4H后阻斷右肺門，分別測(cè)定阻斷前后氣道壓力、動(dòng)脈血?dú)庾兓⒎蜽D比率及光鏡下肺組織結(jié)構(gòu)變化。評(píng)價(jià)該模型復(fù)制移植物IRI的能力。結(jié)果周種異體左肺移植模型在肉眼直視下單人完成，供受體動(dòng)靜脈和支氣管套管吻合時(shí)間分別為肺動(dòng)脈4±1MIN、肺靜脈8±3MIN、支氣管2±05MIN?？偸中g(shù)時(shí)間55±10MIN。手術(shù)成功率90％2730，術(shù)后生存率100％。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示該模型成功復(fù)制出同種異體肺移植IRI的變化。結(jié)論本模型符合大鼠肺移植模型建立的優(yōu)點(diǎn)，全部操作在肉眼直視下單人完成；供肺的獲取較為快速，使用的套管更簡(jiǎn)單，套管技術(shù)趨于簡(jiǎn)化，肺移植時(shí)血管套接技術(shù)成功率高，整體手術(shù)時(shí)間操作縮短。該模型復(fù)制出移植肺IRI的變化，是適合肺移植IRI研究的理想模型。第二部分內(nèi)源性HO1高表達(dá)對(duì)大鼠同種異體肺移植物缺血再灌注損傷的作用研究目的觀察COPP誘導(dǎo)內(nèi)源性HO1高表達(dá)對(duì)大鼠同種異體左肺移植物IRI的影響并探討其作用機(jī)制。方法以SD大鼠為供受體，采用改良袖套法技術(shù)建立同種異體左肺移植模型。設(shè)立空白對(duì)照組A組、COPPZNPP組B組和COPP組C組，離體供肺靜脈40C的LPDG液逆行灌注，灌注后供肺保存3H后行左肺原位移植，移植肺再灌注4H后，阻斷右肺門，測(cè)量氣道壓力，動(dòng)脈血PAO2、PACO2。隨后處死大鼠，分別測(cè)定肺WD比率、肺組織中SOD活性、MDA含量、MPO活性；光鏡觀察移植物病理組織學(xué)變化；PCR和免疫組化了解HO1表達(dá)ELISA檢測(cè)移植肺TNFΑ量的變化；免疫組化檢測(cè)TNFΑ、IL10、BCL2表達(dá)情況；TUNEL法檢測(cè)移植肺細(xì)胞凋亡水平。結(jié)果基因和蛋白水平檢測(cè)顯示C組肺組織HO1較A組、B組明顯升高P001，表明C組供肺成功高表達(dá)HO1。與A、B組相比，C組氣道壓力降低、PAO2上升、肺WD比率下降，SOD活性增高，MDA含量和MPO活性下降P001；病理檢查C組肺泡間質(zhì)水腫明顯減輕，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，肺泡腔內(nèi)水腫液和紅細(xì)胞少見；免疫組化TNFΑ表達(dá)減弱、IL10表達(dá)增強(qiáng)，BC12表達(dá)增強(qiáng)P001TUNEL法檢測(cè)移植肺細(xì)胞凋亡減少P001。結(jié)論COPP有效誘導(dǎo)移植肺高表達(dá)內(nèi)源性HO1。HO1通過其抗氧化、抗炎和抗凋亡等多種途徑明顯減輕供肺IRI，提高肺移植術(shù)后早期肺功能。因此應(yīng)用COPP誘導(dǎo)移植肺局部高表達(dá)內(nèi)源性HO1可成為預(yù)防和減輕同種異體肺移植IRI的一種策略。第三部分腺病毒介導(dǎo)HO1離體轉(zhuǎn)基因?qū)Υ笫笸N異體肺移植物缺血再灌注損傷的影響目的觀察腺病毒介導(dǎo)HO1轉(zhuǎn)基因?qū)Υ笫笸N異體左肺移植物IRI的影響并探討其作用機(jī)制。方法以SD大鼠為供受體，采用改良袖套法技術(shù)建立同種異體左肺移植模型。設(shè)立空白對(duì)照組I組行離體供肺靜脈4℃LPDG液逆行灌注，空載體對(duì)照組Ⅱ組和基因轉(zhuǎn)染組Ⅲ組分別行肺靜脈逆行灌注4℃LPDG液稀釋的空病毒載體和重組腺病毒載體611010VPML。供肺保存3H后行左肺原位移植，移植肺再灌注4H后，阻斷右肺門，測(cè)量氣道壓力，動(dòng)脈血PAO2、PACO2。隨后處死大鼠測(cè)定肺WD比率、肺組織中SOD活性、MDA含量、MPO活性；光鏡觀察移植物病理組織學(xué)變化；PCR和免疫組化法測(cè)定肺組織HO1表達(dá)ELISA檢測(cè)移植肺TNFA量的變化；免疫組化檢測(cè)TNFΑ、IL10、BCL2表達(dá)情況TUNEL法檢測(cè)移植肺細(xì)胞凋亡水平。結(jié)果基因和蛋白水平檢測(cè)顯示Ⅲ組肺組織HO1表達(dá)較Ⅰ組、Ⅱ組明顯升高P001，表明Ⅲ組供肺成功特異性轉(zhuǎn)染外源性HO1目的基因。與Ⅰ組、Ⅱ組相比，Ⅲ組氣道壓力降低、PAO2上升、肺WD下降、SOD活性增高、MDA含量和MPO活性下降P001；光鏡檢查Ⅲ組肺泡間質(zhì)水腫明顯減輕，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、肺泡腔內(nèi)水腫和滲出改變明顯減輕；免疫組化移植肺TNFΑ表達(dá)減弱，IL10表達(dá)增強(qiáng)BCL2表達(dá)增強(qiáng)P001，TUNEL法檢測(cè)移植肺細(xì)胞凋亡減少P001。結(jié)論AD5HO1的構(gòu)建為開展HO1基因治療創(chuàng)造了有利條件。腺病毒介導(dǎo)HO1轉(zhuǎn)基因治療能成功地在移植肺高表達(dá)外源性HO1目的基因。HO1通過其抗氧化、抗炎和抗凋亡等多種途徑明顯減輕供肺IRI，提高肺移植術(shù)后早期肺功能。因此應(yīng)用腺病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因技術(shù)在移植肺局部高表達(dá)HO1可成為預(yù)防和減輕同種異體肺移植物IRI的一種新策略。

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簡(jiǎn)介：全文分為二部分第一部分含人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因的腺病毒載體的構(gòu)建及病毒體外感染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞目的構(gòu)建含人全長(zhǎng)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子HUMANHEPATOCYTEGROWTHFACTHHGF基因與綠色熒光蛋白GREENFLUESCENCEPROTEIN，GFP基因融合的腺病毒表達(dá)載體PDC316HGFIRESEGFP，經(jīng)293細(xì)胞包裝，同源重組產(chǎn)生重組腺病毒ADHGF。病毒液感染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELLS，BMMSCS，研究病毒感染效率，以及HHGF基因在BMMSCS中表達(dá)情況。方法將人全長(zhǎng)HGFCDNA亞克隆入腺病毒質(zhì)粒載體PDC316IRESEGFPLACZA，建立含HHGF基因的腺病毒表達(dá)載體PDC316HGFIRESEGFP，采用酶切法、PCR法和測(cè)序法分別鑒定。采用同源重組法獲得含HHGF的重組腺病毒AD5HGFIRESEGFP簡(jiǎn)寫為ADHGF。用CSEL密度梯度超離心法純化病毒，用空斑形成試驗(yàn)進(jìn)行病毒滴度測(cè)定。體外分離、培養(yǎng)BMMSCS。以僅表達(dá)GFP基因的重組腺病毒AD5IRESEGFP簡(jiǎn)寫為ADGFP為對(duì)照，體外分別感染MSCS。熒光顯微鏡下觀察MSCS有無GFP基因表達(dá)；用熒光激活細(xì)胞分選術(shù)FLUESCENCEACTIVATEDCELLSTER，F(xiàn)ACS檢測(cè)受染細(xì)胞的GFP標(biāo)記以判定HGF表達(dá)。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAY，ELISA檢測(cè)轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞培養(yǎng)上清HHGF表達(dá)的濃度和持續(xù)時(shí)間。感染ADHGF，ADGFP的MSCS細(xì)胞分別命名為HGFMSCS，GFPMSCS。結(jié)果腺病毒表達(dá)載體PDC316HGFIRESEGFP經(jīng)限制性內(nèi)切酶切電泳后顯示有23KB的HHGF目的基因片段和52KB的線性化PDC316IRESEGFP載體片段，顯示構(gòu)建的腺病毒表達(dá)載體中含有HHGF基因；目的片段測(cè)序結(jié)果與GENEBANK中HHGFCDNA序列一致。經(jīng)293包裝所產(chǎn)生病毒ADHGF，純化后滴度可以達(dá)到5010PFUML。熒光顯微鏡下觀察到HGFMSCS，GFPMSCS細(xì)胞都有GFP基因表達(dá)。HGFMSCS細(xì)胞培養(yǎng)上清中HHGF水平升高，能持續(xù)表達(dá)HHGF大約14天；最高濃度達(dá)到103NGML。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)中腺病毒表達(dá)載體構(gòu)建正確；重組腺病毒液ADHGF滴度高；轉(zhuǎn)導(dǎo)MSCS后在MSCS中獲得高效、穩(wěn)定和持續(xù)表達(dá)的HHGF。該載體達(dá)到實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求，為其在進(jìn)一步的體內(nèi)、外研究奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。第二部分HGFMSCS促進(jìn)小移植肝再生的實(shí)驗(yàn)研究目的建立大鼠原位30％小體積肝移植模型，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步了解大鼠行同種原位減體積肝移植后，經(jīng)門靜脈輸注表達(dá)HHGF的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞HGFMSCS，研究其對(duì)移植后小移植肝的保護(hù)作用。方法1采用LEWIS大鼠，改良“二袖套法”建立大鼠30％肝移植模型，分別稱取受體肝臟重量及供肝重量。術(shù)后1，3，5，7天處死大鼠，稱取肝臟重量并取肝組織行組織學(xué)檢查，了解移植后肝臟再生的初步情況。2在模型建立的基礎(chǔ)上，將受體分為4組，每組5只，實(shí)驗(yàn)組在供肝植入、門靜脈開放后，立即經(jīng)門靜脈輸注510HGFMSCS。對(duì)照組則分別輸注相同體積的生理鹽水，510GFPMSCS，或1010PFUADHGF以上都定容至1ML。分別于術(shù)后1，3，5，7天在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中各隨機(jī)抽取5只大鼠處死。取血檢測(cè)血清ALT。記錄移植物濕重。取肝組織用免疫組化法檢測(cè)肝細(xì)胞凋亡和增殖活性，或行相關(guān)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果1對(duì)照組大鼠30％肝移植模型7天存活率333％。而實(shí)驗(yàn)組大鼠生存率為733％；2對(duì)照組移植物組織學(xué)檢查示術(shù)后1天中央靜脈以及肝竇擴(kuò)張、部分肝細(xì)胞增大氣球樣變，3天和5天組可見匯管區(qū)單核細(xì)胞浸潤(rùn)多；而實(shí)驗(yàn)組肝臟結(jié)構(gòu)損傷輕，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)少，二倍體和多倍體肝細(xì)胞多見；3HGFMSCS輸注的大鼠在術(shù)后3天和5天時(shí)血ALT水平較對(duì)照組明顯降低；4實(shí)驗(yàn)組移植物濕重在術(shù)后3天和5天時(shí)較對(duì)照組明顯增加；5術(shù)后3天和5天實(shí)驗(yàn)組大鼠的肝移植物增殖和凋亡細(xì)胞明顯較對(duì)照組高；6實(shí)驗(yàn)組大鼠28天生存率較對(duì)照組高，且移植肝肝纖維化發(fā)生率低。結(jié)論1大鼠原位部分肝移植是研究肝再生的良好實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，移植肝仍具有良好的增殖活性?大鼠部分肝移植后，輸注HGFMSCS能夠保護(hù)肝細(xì)胞和移植物，促進(jìn)肝功能的恢復(fù)，提高7天生存率；3HGFMSCS輸注能夠明顯促進(jìn)大鼠部分肝移植后供肝的再生4HGFMSCS能夠維持移植肝的正常結(jié)構(gòu)，提高長(zhǎng)期生存率。

簡(jiǎn)介：胰島移植治療糖尿病具血糖易控制、手術(shù)安全簡(jiǎn)單、可重復(fù)性佳、免疫抑制要求較低等優(yōu)點(diǎn)。然而，供體嚴(yán)重短缺限制了其在臨床上的應(yīng)用。異種移植具近無限的胰腺供給能力，是目前最有望突破這一“瓶頸”的途徑之一。但異種移植異種間的免疫排斥反應(yīng)問題，目前尚無有效的解決方案。血紅素加氧酶HEMEOXYGENASE，HO是血紅素分解代謝的起始酶和限速酶，可將血紅素分解為一氧化碳CO、亞鐵離子FE2＋）和膽綠素?，F(xiàn)有的研究證實(shí)，HO1及其分解血紅素的產(chǎn)物組成的HO1系統(tǒng)可通過抗炎、抗氧化及抗凋亡作用在同種異體移植中保護(hù)移植胰島，另外，研究者還發(fā)現(xiàn)HO1尚可在動(dòng)物心、肝等異種移植模型中發(fā)揮保護(hù)移植器官的作用，而HO1是否可保護(hù)異種移植胰島、延長(zhǎng)其有功能存活期，目前尚不得而知，我們進(jìn)行了如下研究。第一部分大鼠胰島分離改良研究目的探討SD大鼠胰島分離、純化的較優(yōu)方案，并評(píng)價(jià)依該法分離所得胰島的生物性特性。方法以濃度為075MGML的Ⅺ型膠原酶經(jīng)膽管充分灌注SD大鼠胰腺完整分離后37℃水浴振蕩消化17MIN，DEXTRON70不連續(xù)密度梯度（1091、1081及1037）離心法分離、純化胰島，DTZ染色鑒定胰島并計(jì)數(shù)得率，AO－PI染色檢測(cè)胰島活性，糖刺激試驗(yàn)判定胰島功能光鏡觀察體外培養(yǎng)胰島的形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果純化后每只大鼠胰島收獲量為74360±4307，胰島純度90％，胰島細(xì)胞活率90％。胰島細(xì)胞在低糖和高糖刺激下分泌的胰島素濃度分別為2535±700和8648±1275UIUML110ISLET145MIN1。結(jié)論依改良后的分離純化方案分離大鼠胰島可獲得高純度高活率的胰島細(xì)胞，且細(xì)胞形態(tài)正常、功能良好。第二部分鈷卟啉誘導(dǎo)胰島血紅素加氧酶1過表達(dá)研究目的探討鈷卟啉腹腔注射誘導(dǎo)大鼠胰島血紅素加氧酶1（HO1）過表達(dá)的量效關(guān)系及其對(duì)胰島功能的影響。方法大鼠分為5組，A、B、C、D等4組分別在提取胰島前24H予腹腔注射25、5、75及10MGKG體重的鈷卟啉溶液，對(duì)照組予15ML生理鹽水。改良GOTH法提取胰島，計(jì)數(shù)胰島得率、估定純度，REALTIMEPCR和WESTERN印跡法檢測(cè)胰島組織內(nèi)HO1MRNA及蛋白表達(dá)，糖刺激試驗(yàn)評(píng)價(jià)胰島功能。結(jié)果C、D組大鼠在注射COPP溶液后出現(xiàn)機(jī)體損傷，D組部分大鼠死亡。A、B、C及對(duì)照組胰島得率及純度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P005），B組HO1MRNA及蛋白表達(dá)量為4組中最高（B組HO1MRNA表達(dá)量達(dá)對(duì)照組的8418倍）。A、B及對(duì)照組胰島于低糖刺激時(shí)，胰島素分泌量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P005），而高糖刺激下，胰島素分泌量以B組最高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（A、B及對(duì)照組分別為17237±164、18768±1993及9125±1264UIUML110ISLETS145MIN1，P005）。實(shí)驗(yàn)組移植物內(nèi)IL10MRNA表達(dá)量高于對(duì)照、阻斷兩組（P005）。實(shí)驗(yàn)組受體血清IL10含量亦高于對(duì)照、阻斷兩組（P005）。而3組移植物和受體血清TNFA、IL1B及INF表達(dá)、含量比較無顯著差異。實(shí)驗(yàn)組移植物內(nèi)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)情況少于對(duì)照及阻斷組。結(jié)論HO1過表達(dá)可延長(zhǎng)異種移植胰島的有功能存活期，IL10在其中起重要作用?？偨Y(jié)腹腔注射5MGKG體重鈷卟啉相對(duì)安全，不影響大鼠胰島分離的得率及純度，可大幅提高大鼠胰島組織中HO1的表達(dá)量，并能增強(qiáng)胰島功能。而經(jīng)鈷卟啉誘導(dǎo)HO1過表達(dá)的胰島在異種移植模型中有功能存活期明顯延長(zhǎng)，其中，IL10的表達(dá)上調(diào)起重要作用。

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