簡介：點擊查看更多α-亞麻酸植物甾醇酯對動脈粥樣硬化的保護作用及其機制研究.pdf精彩內容。

簡介：第一部分血紅素氧合酶1基因重組腺病毒載體的構建及表達目的克隆血紅素氧合酶1HEMEOXYGENASE1HO1基因并構建含HO1基因的重組腺病毒載體在血管內皮細胞中進行蛋白表達鑒定結論成功克隆了HO1基因并構建了含有HO1基因的重組腺病毒載體重組腺病毒能有效介導HO1基因在血管內皮細胞中表達為進一步研究其生物學功能奠定了基礎第二部分血紅素氧合酶1基因轉染人血管內皮細胞對淋巴細胞粘附和增殖的影響目的探討血紅素氧合酶1HEMEOXYGENASE1HO1基因轉染人血管內皮細胞對淋巴細胞粘附和增殖的影響結論HO1可以明顯抑制淋巴細胞對人血管內皮細胞的粘附作用這種抑制作用可能與減少HLADR的表達HO1可以抑制淋巴細胞的增值第三部分重組腺病毒載體介導血紅素氧合酶1基因轉染對慢性移植物血管病的影響目的研究重組腺病毒載體介導血紅素氧合酶1HEMEOXYGENASE1HO1表達對慢性移植物血管病的影響并探討HO1基因對移植物動脈保護的可能機制結論HO1在慢性排斥所致血管病變中具有顯著的保護作用可以抑制慢性排斥反應所致移植物血管病這種保護作用可能與抑制NFKB的表達和減少移植物細胞凋亡有關

簡介：背景肝臟移植是根治終末期肝病唯一有效手段，移植術后患者將面臨免疫排斥導致的移植物失功能和免疫抑制劑終生使用帶來高感染率、高腫瘤發(fā)生和復發(fā)率、高昂的經濟負擔等問題。如何減少和避免免疫抑制劑的應用，是肝臟移植研究領域的重要方向。免疫調節(jié)細胞的細胞學治療使其成為可能。而目前公認的具有免疫調控能力的細胞為IMDC和TREG。當前認為IMDC和TREG在調控免疫中相互促進，協(xié)同作用。已知IMDC促進TREG分化并且擴增TREG，而TREG能幫助IMDC保持其未分化狀態(tài)。不過總體來說IMDC處于中心地位3。但是其受限于保存時間短，體內易被激活成熟，因而治療性研究受到限制。可喜的是，研究發(fā)現(xiàn)DC分泌的膜性微囊EXOSOME，表面富含免疫相關分子，并內含DC所提呈的外源性抗原，甚至具有一定量的遺傳物質，且性質穩(wěn)定，低溫下可長久保存。為解決上述DC治療性研究受限制及誘導耐受效果弱等問題，文獻報道和前期研究都利用了供體IMDC來源的EXOSOME（IMDEX）探究其保護移植物的作用。結果表明供體來源IMDEX可一定程度上延長鼠類心臟和小腸移植物的存活時間，且該保護效果與體內TREG比例有密切關系。另外如需誘導出理想的耐受狀態(tài)還需聯(lián)合小劑量免疫抑制藥物才可行。我們猜想，與IMDC相似，IMDEX在體內可能也是通過擴增TREG數(shù)量和增強其功能來發(fā)揮免疫調節(jié)。目的為了進一步減少免疫抑制藥物的使用，并且驗證我們的猜想。我們構建了近交系大鼠原位肝臟移植模型，在體內外試驗中聯(lián)用供體來源IMDEX和抗原特異性TREG，觀察二者聯(lián)用的免疫調節(jié)效果，探究IMDEX與TREG之間的作用關系。方法以BNF344大鼠為供體，LEWIS大鼠為受體，建立大鼠原位肝臟移植模型。利用超高速梯度離心法獲得供體IMDEX。電子顯微鏡和流式細胞術對IMDEX進行形態(tài)學和分子表型鑒定。對移植受體行不同劑量IMDEX處理，再進行生存分析探究其對肝臟移植物的保護作用，并探索該作用與劑量之間的關系。利用兩步免疫磁珠分選技術分選受體脾臟來源CD4CD25T細胞，而后與供體抗原提呈細胞共培養(yǎng)，獲得供體抗原預刺激的TREG。流式鑒定其功能分子的變化，體外實驗鑒定其免疫抑制效果。不同來源和不同特異性的TREG用于移植受體，驗證抗原特異性對于TREG在移植免疫中的重要性。進一步體內實驗中聯(lián)合IMDEX和TREG，應用生存分析，組織形態(tài)學和混合淋巴細胞培養(yǎng)技術觀察兩者聯(lián)用對移植物可能的保護作用和受體體內免疫狀態(tài)的變化。體外實驗探究IMDEX對TREG的作用，體內實驗中，用CFSE標記TREG聯(lián)合IMDEX輸注受體，觀察TREG的增殖與IMDEX之間的關系，驗證體外結論。結果1以超高速梯度離心法分離出較好保持了IMDC表型的IMDEX，其最佳作用劑量為20ΜG。2具有供體抗原特異性TREG對移植物的保護作用顯著高于單純磁珠分選后的自然TREG（P3IMDEX和TREG兩者聯(lián)用組生存時間長于對照組（P4進一步體外實驗中發(fā)現(xiàn)IMDEX可以擴增TREG，5TH天IMDEX高劑量組TREG增殖比例更高，但是7TH后不同劑量IMDEX處理TREG增殖效果相似，這提示IMDEX的體內應用可能不需要過高劑量，這與前述的體內實驗的結果相符。5對體內TREG的檢測表明，IMDEX聯(lián)合處理組TREG增殖顯著高于單純的外源性TREG處理組，驗證了體外的實驗結果。結論供體來源IMDEX可以保護大鼠移植肝臟，本研究的分離和凍存方法穩(wěn)定可靠。IMDEX的應用一定程度上解決了IMDC體外難以長期保存的難題；我們發(fā)現(xiàn)聯(lián)合TREG細胞后可以實現(xiàn)穩(wěn)定的移植免疫耐受狀態(tài)。有望為臨床提供新的治療思路。

簡介：該文分三部分第一部分大鼠小體積肝移植模型的建立及不同體積肝移植的療效結論1大鼠小體積肝移植模型的建立有不同的方法和技術，選取體重或周齡相近的供受體可建立起不同體積的肝移植模型2術中肝葉切除小體積供肝獲取，即體內肝葉切除減體積法技術上可行，術后技術性并發(fā)癥少，成功率高3大鼠肝移植移植肝最小比例應為50﹪，＜50﹪應視為小體積肝移植，可作為大鼠小體積肝移植領域研究的參考標準＜30﹪可視為超小體積肝移植4小體積肝移植術后動物死亡率除與移植肝體積不足不關外，尚與移植物的冷缺血再灌注損傷有關，但其詳細機制尚不清楚，值得進一步研究

簡介：目的構建骨保護素植物表達載體PZP211UBIOPG，將PZP211OPG轉入優(yōu)良玉米自交系昌72和18599，以玉米作為生物反應器大量生產骨保護素。方法OPG位于克隆載體PMD18T的ECV處，兩端設計帶有BAMHI和SACI酶切位點的引物，提取的含PMD18T的大腸桿菌的質粒作為PCR擴增的模板擴增OPG序列，用BAMHI和SACI分別雙酶切表達載體PZP211和擴增產物，回收大小片段并連接，將OPG定向克隆到表達載體PZP211UBI啟動子的下游，經酶切、PCR以及測序驗證克隆正確。以優(yōu)良玉米自交系昌72和18599誘導出的愈傷組織為試材，通過基因槍轟擊法完成了PZP211UBIOPG基因的遺傳轉化，轉化后的愈傷組織經巴龍霉素25MGL、50MGL、25MGL三輪篩選后分化成抗性苗，通過PCR、RTPCR分子檢測獲得了轉基因植株。結果通過PCR方法將目的基因OPG從克隆載體PMD18T上擴增出來，利用酶切和連接技術成功將目的基因與表達載體連接，構建了人OPG的植物表達載體PZP211UBIOPG；通過基因槍轟擊法將該表達載體成功地導入玉米自交系18599和昌72的愈傷組織中，經篩選分化獲得抗性苗；分子檢測初步證明OPG已整合入玉米基因組中。結論成功構建了植物表達載體PZP211UBIOPG，完成了玉米的遺傳轉化，初步檢測確定目的基因已整合到玉米基因組中，獲得了含OPG的18599和昌72兩種玉米材料，為以玉米作為生物反應器生產骨保護素奠定了實驗基礎。

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簡介：目的探索間充質干細胞（MESENCHYMALSTEMCELLSMSCS）在體內外對同系胰島移植物的保護作用及其機制。方法將鏈脲佐菌素（STREPTOZOCINSTZ）誘導的糖尿病小鼠隨機分為4組接受腎包膜下移植手術（1）MSCS對照組，接受1106個MSCS移植；（2）胰島ISLETS對照組，接受300個胰島當量（ISLETEQUIVALENTSIEQ）移植；（3）MSCS與ISLETS共移植組，接受1106個MSCS和300個IEQ共移植。術后1、2、3、5、7、14、28天，檢測血糖值；術后28天行左腎切除術，24H后檢測血糖值；術后1、7、28天獲取含胰島移植物的腎組織行胰島素免疫熒光染色。體外培養(yǎng)、擴增MSCS，將其分為MSCS對照組和LPS處理組，培養(yǎng)第3天以WESTERNBLOT實驗和激光共聚焦實驗檢測GAS6的表達。體外擴增小鼠胰島Β細胞系，將其分為胰島Β細胞對照組和LPS處理組，第3天收集細胞，以WESTERNBLOT實驗和激光共聚焦實驗檢測AXL的表達。體外將提取的胰島按如下分組（A）ISLETS對照組，單獨培養(yǎng)胰島；（B）MSCS對照組，單獨培養(yǎng)MSCS；（C）MSCS與ISLETS接觸共培養(yǎng)組；（D）MSCS與ISLETS非接觸共培養(yǎng)組，通過TRANSWELL裝置避免兩者直接接觸；E）ISLETSGAS6共培養(yǎng)組；（F）ISLETSGAS6FCAXL共培養(yǎng)組。3天后，行吖啶橙（ACRIDINEANGEAO）碘化丙啶（PROPIDUMIODIDEPI）染色檢測胰島活性，行葡萄糖刺激胰島素分泌實驗（GLUCOSESTIMULATEDINSULINSECRETIONGSIS）檢測胰島功能。結果移植術后，MSCS對照組的糖尿病小鼠血糖水平無明顯下降，ISLETS對照組血糖有改善但無法逆轉糖尿病，MSCS與ISLETS共移植組逆轉糖尿病，移植側腎臟切除后，受者小鼠血糖均回升至術前水平。免疫熒光染色顯示，ISLETS對照組及MSCS與ISLETS共移植組小鼠的腎包膜下胰島移植物INSULIN染色陽性。激光共聚焦檢測結果顯示MSCS陽性表達GAS6，胰島Β細胞陽性表達AXL。WESTERNBLOT檢測結果顯示，比較對照組，LPS處理組的MSCS高表達GAS6，LPS處理組的Β細胞高表達AXL。AOPI活性染色檢測顯示，ISLETS對照組、MSCS與ISLETS非接觸共培養(yǎng)組、MSCS與ISLETS接觸共培養(yǎng)組，3組的胰島活性依次增強；比較ISLETS對照組，ISLETSGAS6共培養(yǎng)組的胰島活性明顯改善，ISLETSGAS6FCAXL共培養(yǎng)組的胰島活力無改善。GSIS實驗結果顯示，ISLETS對照組、MSCS與ISLETS非接觸共培養(yǎng)組、MSCS與ISLETS接觸共培養(yǎng)組，3組胰島素分泌量依次增強；比較ISLETS對照組，ISLETSGAS6共培養(yǎng)組的胰島素分泌量增加，ISLETSGAS6FCAXL共培養(yǎng)組的胰島素分泌量無改變。結論MSCS在體內外均可改善胰島移植物的功能，MSCS與ISLETS接觸有利于MSCS發(fā)揮保護作用，GAS6AXL通路可能參與了MSCS對胰島的接觸保護效應。

簡介：山西醫(yī)科大學碩士學位論文高膽固醇飲食誘發(fā)去卵巢兔AD樣病理學變化及植物雌激素的保護作用姓名王志華申請學位級別碩士專業(yè)神經生理學指導教師李琳20050610學位論文獨創(chuàng)性聲明本人王志華聲明，所星交的學位論文系在導師李琳指導下本人獨立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明確標注或得到許可。論文內容未包含法律意義上已屬于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人己用于其他學位申請的論文或成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。本文如違反上述聲明，愿意承擔以下責任和后果L、交回學校授予的學位證書；2、學?？稍谙嚓P媒體上對作者本人的行為進行通報；3、本文按照學校規(guī)定的方式，對因不當取得學位給學校造成的名譽損害，進行公開道歉。4、本人負責因論文成果不實產生的法律糾紛。論文作者簽名日期年月日學位論文版權使用授權書本人完全了解山西醫(yī)科大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關部門或機構送交淪文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱本人授權山西醫(yī)科大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文和匯編本學位論文。本人離校后發(fā)表或使用學位論文或與該論文直接相關的學術論文或成果時，署名單位仍然為山西醫(yī)科大學。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定1論文作者簽名指導教師簽名日期年月日日期年月日本聲明的版權歸山西醫(yī)科大學所有，未經許可，任何單位及任何個人不得擅自使用

簡介：目的老年婦女雌激素水平降低是患阿爾茨海默病ALZHEIMERSDISEASEAD的危險因素老年婦女中AD的發(fā)病率是同齡男性的23倍近年來大量的流行病學和臨床資料提示絕經后婦女接受雌激素替代療法ESTROGENREPLCEMENTTHERAPYERT能預防AD的發(fā)病但是也有部分學者認為ERT抗AD的作用不明顯因此因此雌激素的神經保護作用及其機制仍然需要進一步研究該研究旨在探討內源性雌激素水平低下能否導致腦內AD病理相關的一些改變并進一步探討雌激素和植物雌激素葛根素的腦保護作用結論雌激素低下模型動物腦內出現(xiàn)AΒ含量增加、CHAT表達下降和磷酸化TAU蛋白增加的改變外源性給予雌激素、葛根素的治療能不同程度地促進CHAT表達減少AΒ含量但是對抑制TAU蛋白的異常磷酸化效果不顯著卵巢切除動物腦內NEPRILYSIN表達上調可能與腦內AΒ含量增加有關

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簡介：點擊查看更多體外誘導胰島HO-1適度表達保護異種胰島移植物.pdf精彩內容。

簡介：前言冠狀動脈旁路移植術CONARYARTERYBYPASSGRAFTCABG是臨床上治療冠心病的重要途徑之一。而血管移植后的遠期通暢率仍不盡如人意據(jù)統(tǒng)計靜脈橋的十年通暢率僅601仍有大部分患者需后續(xù)治療。移植損傷、血管擴張管壁缺血、血流動力學改變動脈壓、剪切力等因素引起多種細胞因子和生長因子分泌促使血管平滑肌細胞增生并向內膜遷移進而引起細胞外基質沉積、斑塊形成2被認為是遠期血管狹窄的主要機制。有研究表明靜脈手術后粘附分子表達增加致使單核細胞早期發(fā)生粘附浸潤內膜移行為巨噬細胞最終轉化為泡沫細胞成為粥樣硬化的核心這就是最終導致靜脈橋狹窄的過程12。因此針對移植血管保護的許多新技術如藥物應用、血管外支架、保存液、電磁輻射、基因工程等也逐漸進入臨床在搭橋過程中的血管保護也逐漸為臨床醫(yī)師所重視。搭橋手術中往往需要搭23根橋而公認通暢率較高的動脈橋因其數(shù)量及長短范圍等因素限制了其臨床應用大隱靜脈以其易獲得、足夠長度、損傷小等優(yōu)點成為較多臨床醫(yī)院的首選。在CABG中取下靜脈至搭到最后一根靜脈往往需要30分鐘以上的時間在這段時間內靜脈血管的保護不足使得血管內皮細胞受到破壞進而導致血栓形成及內皮細胞增生。而傳統(tǒng)的罌粟堿保存液雖具有良好的擴血管功能但其PH值、滲透壓及血管內皮細胞的保護都不甚理想所以很多新型的保存液發(fā)展出來。全血保存液可以良好的保護血管內皮細胞維拉帕米硝酸甘油保存液可以良好的擴張血管及抑制CA2通道從而保護內皮細胞本實驗探討罌粟堿保存液、硝酸甘油維拉帕米保存液、肝素化全血保存液及林格生理鹽水對照液對兔靜脈移植血管的保護作用效果從而為臨床的應用及進一步研究提供依據(jù)。材料與方法健康新西蘭大耳兔48只分四組每組12只分別為A組維拉帕米硝酸甘油保存液組NITROGLYCERINVERAPAMILSOLUCOINGV組、B組肝素化全血保存液組HCPARINIZEDBLOODSOLUTIONPB組、C組罌粟堿保存液組PAPAVERINESOLUTIONPAP組及D組對照組林格液肝素。取兔頸外靜脈分別放置與不同保存液中30分鐘后移植至頸內動脈。于移植后第7天、14天、28天取出移植物HE染色觀察不同時期內皮增厚及中膜增生情況。另取5只兔雙側頸外靜脈共10支長約2CM粗細均勻分為40段每段約05鋤分別放入1ML不同保存液中30分鐘后取出靜脈ELISA法測量1ML保存液中內皮素ET1含量HE染色觀察短時間保存后內皮細胞破壞情況。結果第7天各靜脈移植物比較各組間內膜中膜比值INTIMAMEDIAVALUEIM值無差異第14天及第28天的各組比較A組及B組內膜增厚最輕C組及D組內膜增生最為嚴重測得IM值進行比較其中A組與B組比較其IM值無差異A組與C組及D組均有差異P＜005B組與C組及D組比較均有差異P＜005C組與D組比較無差異。ELISA法測定內皮素1ENDOTHELIN1ET1釋放量A組ET1釋放量較B組、C組、D組均明顯降低其差異有統(tǒng)計學意義P＜001B組ET1釋放量較高與C組及D組比較均有差異P＜005C組與D組無差異短時間保存后四組內皮脫落情況觀察A組及B組短期保存后的血管內皮破壞情況較C組、D組要輕內皮細胞覆蓋率較高A組與B組內皮細胞覆蓋率比較無差異A組與C組及D組比較均有差異P＜001B組與C組及D組比較均有差異P＜001C組與D組比較無差異。結論1、肝素化全血保存液及GV液對兔靜脈血管的保護作用優(yōu)于罌粟堿組及對照組其內膜增厚情況小于罌粟堿組及對照組內皮細胞覆蓋率優(yōu)于罌粟堿組及對照組2、肝素化全血保存液的ET1在四組中最高GV組ET1釋放量在四組中最低3、GV保存液在四組保存液中對血管的保護作用最理想。

簡介：背景與目的冠狀動脈旁路移植術CONARYARTERYBYPASSGRAFTING，CABG是目前最有效的治療冠心病的方式之一。橋血管主要來源于乳內動脈INTERNALMAMMARYARTERYIMA、胃網膜右動脈RIGHTGASTROOMENTALARTERYRGEA、橈動脈RADICALARTERY、大隱靜脈橋SAPHENOUSVEINGRAFT，SVG等，各種動脈橋尤其是IMA很少發(fā)生粥樣硬化其十年通暢率約為90％，已成為廣泛接受和首先考慮應用的血管橋。但是SVG具有來源充分、口徑夠大、易于離取等優(yōu)點，仍然是主要的橋血管來源。據(jù)報道，靜脈血管橋的第一年再狹窄率約是20％；且以后每年以2％4％的再狹窄率遞增，其十年通暢率約是40％50％。SVG再狹窄可發(fā)生于術后早期和晚期。早期以血栓阻塞為主；晚期以內膜增生和粥樣硬化形成導致的管腔狹窄為主。SVG狹窄的中心環(huán)節(jié)是靜脈血管內皮細胞的損傷和脫落。CABG術引起血管內皮細胞VULARENDOTHELIALCELL，VEC損傷的因素是多方面的①在SVG的制備過程中，離取技術的不當；②壓力擴張；③體外保存過程中非生理狀態(tài)下靜脈內皮的損傷；④術后缺血再灌注損傷、高切應力等。其中體外保存以成為廣受關注的領域，各種保存液的研究已是國內外研究的熱點。本研究主要通過觀察內皮細胞的形態(tài)結構變化及功能代謝改變對比幾種不同的保存液對靜脈橋的保護作用，以期找到較理想的血管保存液，提高SVG的近、遠期通暢率，為臨床推廣和應用提供實驗依據(jù)。通過測定單位面積VEC合成和釋放一氧化氮NITRICOXIDE，NO及保存液中內皮素ENDOTHELIN，ET含量，說明內皮細胞功能代謝變化，通過觀察VEC脫落情況，說明VEC形態(tài)結構變化。材料與方法十只成年的中國家兔，雌雄不限，體重25003000克，平均為2700±250克。取雙側股靜脈2CM，均勻地分為四段，共80段分別放入林格液、罌粟堿溶液PAPAVERINESOLUTION，PAP、UW液UNIVERSITYOFWISCONSINSOLUTION、異博定硝酸甘油復合溶液NITROGLYCERINVERAPAMILSOLUTION，GV等4ML的保存液中，室溫下1820℃一個小時后，做HE染色、及硝酸還原酶法測定單位面積內皮細胞NO的合成和釋放量及特異性放射免疫法測定保存液中內皮素的含量。內皮細胞地脫落情況評價以每高倍視野下股靜脈內膜固有層表面內皮細胞覆蓋比例表示，每組保存液靜脈段取二十張切片，每張切片隨機取5個高倍視野記錄其內皮脫落情況，求其平均值，＞75％為；50～75％為；25～50％為；＜25％為。統(tǒng)計學方法，應用SPSSL00軟件包進行統(tǒng)計學分析，等級數(shù)據(jù)用非參數(shù)秩和檢驗，計量數(shù)據(jù)用X±S表示，用完全隨機設計的單因素方差分析，P≤005認為差別具有統(tǒng)計學意義。結果1單位面積VEC合成和釋放的NO的量在GV組中為209±030UMOLMM2、在PAP組中為106±039UMOLMM2、在林格液中為075±030UMOLMM2、在UW液中為168±025UMOLMM2，四組間比較P≤005差別具有顯著性；2各組保存液中ET的含量在GV組為4073±513PGML、PAP組為6763±527PGML、林格液中為7863±537PGML、UW液中為5312±525PGML，P≤001差別有顯著性。3內皮細胞損傷和脫落率在GV組約為20％；UW液中約為40％；PAP中約為55％；在林格中約為80％，P≤005差別具有顯著性。結論1林格液使單位面積的內皮細胞合成和釋放NO量顯著降低；保存液內ET含量明顯增加；內皮細胞損傷和脫落的程度較嚴重，不能有效保護靜脈血管。2PAP能夠使單位面積內皮細胞合成和釋放NO的量降低；且其ET的增高，形態(tài)學上內皮細胞損傷和脫落的程度嚴重，說明在室溫罌粟堿溶液對靜脈血管保護作用不好。3UW液使單位面積內皮細胞合成和釋放NO的量減少；其ET的含量增加，內皮細胞的損傷和脫落程度嚴重，在室溫下UW液對靜脈血管保護作用不好。4GV對靜脈血管的內皮細胞保護作用較好，是理想的保存液，可能會提高靜脈橋近、遠期通暢率，需臨床進一步證實。

簡介：目的隨著社會的發(fā)展缺血性心臟病的患病率和死亡率也在逐年提高目前成為一些地區(qū)居民死亡的首位原因其中冠狀動脈粥樣硬化性心臟病ATHEROSCLEROTICHEARTDISEASEAHD占很大的部分。冠狀動脈旁路移植術自1969年FAVALA將自體大隱靜脈GREATSAPHENOUSVEINGSV作為血管橋第一次應用于臨床獲得成功以后以GSV為材料的冠狀動脈移植術已經成為了臨床上治療冠狀動脈粥樣硬化性心臟病AHD的有效手段之一。由于自身的組織學和生理學的特點GSV存在明顯的近遠期病變率從而導致移植手術的失敗或影響術后的長期效果。乳內動脈、橈動脈等動脈性管道已經被廣泛應用于臨床且比GSV有更高的近遠期通暢率10年通暢率可達90％以上但是由于動脈移植手術自身特點如手術難度較大、操作繁瑣、耗時較長、取材部位較少等缺點現(xiàn)臨床上最廣泛應用的血管橋的材料還是大隱靜脈。如何提高GSV橋遠期的通暢率已經成為了心血管外科研究的熱點。影響GSV通暢率的因素有很多其中包括血管本身條件外科離取技術血管內皮細胞VEC的保護完整程度移植后GSV的動脈化反應抗凝藥物應用危險因素控制等等。血管內膜形態(tài)結構的完整性及其功能的完整性對遠期通暢效果起著十分重要的作用。目前臨床圍手術期采用的治療和預防狹窄發(fā)生的方法有很多如藥物治療、光動力學療法、基因治療和放射線照射療法等等但都沒有明確可靠地效果。研究表明血管內皮損傷從開始離取、擴張和保存血管時就已經開始。所以NOTOUCH外科離取技術離取后血管橋的保護和手術過程中嫻熟輕柔的操作是狹窄預防的關鍵。臨床上在冠狀動脈旁路移植術CONARYARTERYBYPASSGRAFTCABG中GSV離取后到手術吻合之前常用不同的保護液充盈、沖洗管腔和浸泡保存。理想的保護液能快速明顯的擴張GSV抑制GSV的痙攣減少血管內膜損害保護GSV內皮細胞形態(tài)結構和功能的完整性從而起到預防狹窄的作用。臨床最常用的肝素和或罌粟堿鹽水保護液能夠一定程度上緩解GSV的痙攣但缺乏對內皮細胞的有效保護作用。本實驗旨在研究前列地爾PGE1對兔頸外靜脈血管橋的保護作用從而為臨床冠狀動脈旁路移植術中靜脈保護液的選取提供有力的實驗證據(jù)。方法實驗于2009年3月至2009年12月于河北醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院心外科實驗室完成。本實驗采用同側頸外靜脈頸總動脈實驗動物模型。選用30只健康普通家兔由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供隨機分為三組A、B、C三組術中以三種不同保護液肝素保護液、罌粟堿保護液、前列地爾保護液對靜脈橋構建過程中血管橋的保存進行干預獲取的頸外靜脈以三種不同保護液50MMHG壓力沖洗管腔2次檢查有無漏血后存放于不同的保護液中60分鐘。取部分頸外靜脈作為血管橋行端側吻合于同側頸總動脈之上部分靜脈制作成相應的標本進行電鏡下超微結構的對比觀察術后2周對在體靜脈橋近吻合口處和中央部進行活體取材。對浸泡1小時的標本采用透射電鏡對比觀察內皮細胞超微結構以判斷不同處理因素之間保護效果的差異對術后2周的標本采用計算機圖像分析系統(tǒng)在顯微鏡下進行分析對管腔增生程度進行形態(tài)學對比測量不同處理組管腔內膜層增生程度的差異測定血管壁內皮細胞和平滑肌細胞SP免疫組化染色的陽性率并進行統(tǒng)計學分析初步探討PGE1對GSV內膜增生所引起的術后狹窄的預防效果。結果肝素組A組罌粟堿組B組前列地爾組C組對實驗動物近吻合口處和中央部靜脈橋進行分別取材1移植靜脈的吻合口處標本組織病理學變化HE染色11各處理組之間近吻合口處相比管腔內皮細胞和平滑肌細胞增生程度內膜和中膜增生厚度均不存在差異P＞005統(tǒng)計學無明顯意義。12各處理組之間近吻合口處SP染色結果顯示各組之間內皮細胞和平滑肌細胞增生程度均不存在差異P＞005。2移植靜脈的中央部標本組織病理學變化HE染色21管腔增生程度術后兩周管腔內膜中膜厚度D1與術前內膜中膜厚0度D2之比D1D2％A組480126±27460、B組478881±46608、C組282115±44757A組和B組相比P＞005無明顯差異C組與A或B組相比P＜005C組與A、B組之間均有明顯差別有統(tǒng)計學意義。22SP免疫組化染色結果顯示每高倍鏡400X視野下單位面積中增生細胞數(shù)總細胞數(shù)N0N％A肝素組53340±5681、B罌粟堿組53198±5837、C前列地爾組31516±2543A組和B組相比P＞005無明顯差異C組與A或B組相比P＜005統(tǒng)計學有明顯意義。23透射電鏡觀察231肝素組內膜層不連續(xù)甚至中斷、殘缺細胞連接破壞內皮細胞水腫與基底連接不緊密可見線粒體、內質網等細胞器水腫部分胞膜不完整胞漿、細胞器流失細胞變的疏松內膜層附著血小板纖維素等物質并有部分可見中膜平滑肌暴露。232罌粟堿組內膜連續(xù)尚可有局部內膜薄弱疏松細胞結構尚完整線粒體及內質網等細胞器水腫程度較肝素組輕。233前列地爾組內膜上偶見附著的血小板和纖維素等細胞膜結構完整胞核核膜完整胞核染色質稀疏均勻胞漿均勻線粒體及內質網等細胞器水腫程度較輕細胞器狀態(tài)穩(wěn)定內膜層連接緊密未見中膜暴露基底部連接緊密內膜層保護較完整。結論本實驗結果表明1兔頸外靜脈頸總動脈移植模型中術后吻合口處的再狹窄與選用何種保護液關系不大可能與吻合技術、縫線和血流動力學的變化有關。2前列地爾保護液組兔頸外靜脈橋再狹窄的程度要明顯小于臨床中常用的肝素和罌粟堿延緩了靜脈橋再狹窄的進程提高了移植靜脈通暢率。3前列地爾保護液對血管內皮細胞完整性的保護作用要優(yōu)于肝素鹽水和罌粟堿并且對內皮細胞和中膜平滑肌細胞的過度增殖有一定的抑制作用使血管橋遠期通暢率有所提高。

簡介：部分肝移植的廣泛開展，一定程度上緩解了供肝短缺矛盾，使更多肝病患者得到及時有效的治療，但由于供肝體積較小，特別是在小體積肝移植時，常常由于供肝功能不足導致術后出現(xiàn)不同程度的小肝綜合征SFSS表現(xiàn)，影響受體存活，嚴重困擾部分肝移植的進一步發(fā)展。目前對SFSS的詳細發(fā)生機制并不清楚，可能與供、受體雙方多種因素有關，門靜脈高灌注損傷、肝動脈低灌注、肝內微循環(huán)障礙以及異常的肝再生與SFSS的發(fā)生發(fā)展密切相關。理想的動物模型是進行基礎和干預研究的前提，非靜脈轉流下的豬小體積肝移植模型與臨床有著相似的手術操作過程和病理生理變化，不但進行了大鼠模型中不常采用而臨床必需的肝動脈重建，保留了肝動脈灌注的動態(tài)變化對SFSS發(fā)生發(fā)展的作用，而且避免了傳統(tǒng)豬移植模型中體外靜脈轉流帶來的不必要的脾臟切除及其對術后早期門脈高灌注、供肝再生等的干擾，因此特別適合SFSS的系統(tǒng)研究。生長抑素SST是一種多效應激素，在降低門脈血流、調節(jié)肝竇收縮、抑制肝臟纖維增生、減輕腸道缺血再灌注損傷以及抑制肝細胞再生等多個方面具有重要作用，基于大鼠模型和臨床個案的研究結果顯示SST具有潛在的減輕小體積供肝損傷的作用，但是目前仍然缺少更多證據(jù)的支持。在本課題中，我們先建立非轉流下豬30％體積供肝移植模型，并評價其安全性和臨床貼合性；然后在穩(wěn)定有效的小體積肝移植模型上，進行SST的干預研究，并初步探討相關機制。一、非轉流下豬小體積肝移植物損傷模型的建立目的建立非轉流下豬30％體積供肝移植模型，并評價其安全性和臨床貼合性。材料和方法13對巴馬小型豬，體重25～30KG，隨機分為100％全肝移植組N5和30％小體積肝移植組N8，均在非靜脈轉流條件下完成肝移植術。觀察比較兩組供肝特征及增重率，存活情況非轉流耐受率、手術存活率、供肝7D累積存活率，術中血流動力學及血氣變化，術后2H及第1、2、3、5、7D的肝腎功能變化。結果兩組除供肝大小外，在熱缺血時間、冷缺血時間、溫缺血時間、無肝期、肝下下腔靜脈阻斷時間、受體手術時間以及術中輸血量方面差異均無統(tǒng)計學意義；兩組非靜脈轉流耐受率分別為80％45和100％88，手術存活率為80％45和75％68；30％供肝組的供肝7D累積存活率明顯低于100％供肝組333％VS100％，但由于實驗例數(shù)較少，尚無統(tǒng)計學差異P00521＞005；兩組受體無肝期均出現(xiàn)相似的血流動力學改變，與無肝前期比較，MAP、CVP、PH以及BE值顯著下降P＜001，而HR及血K濃度顯著升高P＜001，但兩組間比較無統(tǒng)計學差異，門脈血流開放后，上述指標逐漸恢復，至關腹前除輕微酸中毒外已基本恢復至無肝前期水平；與100％供肝組比較，30％供肝組ALT、AST在術后5D內顯著升高P＜005，TBIL在術后1至7D顯著升高P＜001，PT同樣在術后1、2、5和7D明顯延長P＜005。兩組血清肌酐均于術后第1D達到高峰后快速恢復，組間比較沒有顯著性差異。30％供肝組的供肝平均增重率明顯高于100％供肝組1528％VS159％。結論非轉流下豬30％體積供肝移植模型穩(wěn)定有效，可以用于小體積肝移植物損傷的研究。二、生長抑素對豬小體積肝移植物損傷的保護作用及機制目的研究SST對術后早期豬小體積肝移植物損傷的保護，并初步從門脈壓力梯度變化PPG、肝內微循環(huán)調節(jié)、肝再生及凋亡等方面探討相關機制。材料和方法12對巴馬小型豬，體重25～30KG，隨機分為30％小體積肝移植生理鹽水對照組小肝NS組，N7和30％小體積肝移植SST干預組小肝SST組，N5，均在非靜脈轉流條件下完成肝移植術，另取前一部分中手術存活的100％供肝組全肝對照組，N4作為模型對照。SST14干預方案受體門脈開放前3MIN團注125ΜG，然后以5ΜGKGH持續(xù)給藥24H，B組以等量生理鹽水作為對照。觀察比較各組供肝特征及增重率，供肝7D累積存活率，術后2H及第1、2、3、5、7D的肝腎功能變化，術后2H、3D和7D的肝臟病理改變光鏡和電鏡，鹽水柱法監(jiān)測術中及術后PPG的變化；免疫組化和TUNEL法分別檢測術后2H、3D和7D的KI67增殖指數(shù)和凋亡指數(shù)；REALTIMEPCR和免疫組化法分別檢測術后2H各組肝內ET1轉錄和第3D的蛋白表達水平；ELISA法連續(xù)檢測術后2H、1、2、3、5、7D外周血ET1和NO的濃度，并計算兩者比值。結果1、供肝存活率各組除供肝大小外，在熱缺血時間、冷缺血時間、溫缺血時間、無肝期、肝下下腔靜脈阻斷時間、受體手術時間以及術中輸血量方面差異均無統(tǒng)計學意義；小肝SST組供肝7D累積存活率高于小肝NS組80％VS429％，但是差異仍缺少統(tǒng)計學意義，可能與實驗例數(shù)較少有關P01283＞005，LOGRANKTEST。2、肝腎功能變化與小肝NS組比較，小肝SST組ALT、AST在術后1、2、3D顯著下降P＜005，TBIL在術后1至7D顯著下降P＜005，PT同樣在術后1至5D顯著下降P＜005。術后肌酐水平各時間點兩組比較均無顯著性差異。3、光鏡下病理檢查小肝NS組與全肝對照組比較，術后2H肝細胞腫脹變性壞死、肝竇擴張淤血、門管區(qū)靜脈內皮損傷、出血等均較嚴重，術后第3D大量肝細胞脂肪變，肝索增厚、壞死后纖維增生、匯管區(qū)擴大及炎癥反應均較明顯，術后第7D仍然存在肝小葉結構紊亂和肝細胞空泡樣變性，可見肝細胞增殖反應；與小肝NS組比較，小肝SST組各時間點的損傷、增殖及纖維化反應均較輕，肝小葉結構無明顯紊亂，炎癥反應不明顯。4、電鏡下超微結構檢查小肝NS組與全肝對照組比較，術后2H肝細胞線粒體明顯腫脹，胞漿內可見大量脂肪滴，細胞核有固縮反應，肝竇淤血、竇內皮破壞嚴重，DISSE間隙消失并可見間隙內出血；與小肝NS組比較，小肝SST組肝細胞變性輕微，線粒體輕度擴張，肝竇結構基本完整。5、PPG的變化與全肝對照組比較，小肝NS組術后5D內各時間點PPG顯著升高P＜005，并于術后30MIN和1D達到峰值，至術后7D基本恢復，而小肝SST組較NS組顯著降低P＜005，術后5MIN達到峰值后逐步下降，術后第3D基本恢復，與全肝組比較，術后各時間點及術后2D仍顯著升高P＜005。6、肝再生情況與全肝對照組比較，小肝NS組術后2H、3D、7D的KI67增殖指數(shù)均顯著升高P＜005，第7D的供肝增重率明顯升高P＜005；與小肝NS組比較，小肝SST組術后2H和第3D的KI67增殖指數(shù)顯著下降P＜005，但術后第7D兩者無顯著性差異，且兩組供肝增重率比較亦無顯著性差異。7、凋亡指數(shù)與全肝對照組比較，小肝NS組術后2H、3D、7D的凋亡指數(shù)均顯著升高P＜005；與小肝NS組比較，小肝SST組術后各時間點凋亡指數(shù)均顯著下降P＜005。8、肝內ET1轉錄及表達水平與全肝對照組比較，小肝NS組術后2HET1轉錄及第3D的蛋白表達水平均顯著升高P＜005；與小肝NS組比較，小肝SST組術后2HET1轉錄及第3D的蛋白表達水平均顯著降低P＜005。9、外周血ET1NO比值的變化與全肝對照組比較，小肝NS組術后1、2、3D的ETNO比值顯著升高P＜005；而小肝SST組術后除第1D顯著下降外，其余各時間點與全肝對照組無顯著性差異；與小肝NS組比較，小肝SST組術后1、2、3D的ETNO比值顯著下降P＜005。結論1、小體積肝移植術后早期持續(xù)升高的PPG和微循環(huán)障礙與小體積供肝損傷密切相關。2、小體積肝移植術后早期肝細胞的過度增殖對于小肝功能和體積的恢復并不是必需的，甚至可能存在負面效應。3、SST14可通過降低PPG、改善ET1與NO介導的肝內微循環(huán)功能紊亂及減少肝細胞凋亡來保護小體積供肝功能，改善供肝7D累積存活率。4、短期SST14干預可降低小體積肝移植術后早期肝細胞增殖速度，但是并不影響供肝功能和體積的恢復。