簡介：目錄一、摘要中文摘要胃癌細胞系中FILAGGRIN基因突變的生物學意義及分子調(diào)控機制（1）英文摘要BIOLOGICALSIGNIFICANCEMOLECULARREGULATYMECHANISMOFFILAGGRINGENEMUTATIONINGASTRICCANCERCELLLINES（3）二、論文胃癌細胞系中FILAGGRIN基因突變的生物學意義及分子調(diào)控機制前言（5）第一部分胃癌細胞系中FILAGGRIN基因突變的生物學意義材料和方法（7）結(jié)果（13）討論（20）結(jié)論（23）第二部分胃癌細胞系中FILAGGRIN基因突變的分子調(diào)控機制材料和方法（25）結(jié)果（26）討論（28）結(jié)論（28）本研究的創(chuàng)新性與自我評價（29）三、參考文獻（30）四、附錄附錄英文縮略詞表（36）五、綜述FILAGGRIN基因及聚角蛋白微絲蛋白的研究現(xiàn)狀及進展（37）六、攻讀碩士期間發(fā)表文章情況（47）七、個人簡歷（49）八、致謝（50）基金資助內(nèi)蒙古自治區(qū)科技創(chuàng)新團隊項目資助KJT2013北京大學腫瘤醫(yī)院腫瘤防治研究所分子生物學實驗室

簡介：天津醫(yī)科大學碩士學位論文應用組織芯片技術(shù)研究肺癌中ETS1MRNA表達的生物學意義和相關(guān)分子機制姓名孫翠云申請學位級別碩士專業(yè)病理學與病理生理學指導教師王新允20060518

簡介：中國協(xié)和醫(yī)科大學中國醫(yī)學科學院博士學位論文梅毒的快速診斷、免疫學以及分子生物學的研究姓名王林娜申請學位級別博士專業(yè)臨床皮膚性病學指導教師鄭和義20070501LR日協(xié)和‘T土季博士唧竟T論文EDTASDSTRIS乙二胺四乙酸SODIUMDODECYLSULF砒C十二烷基磺酸鈉三羥甲基氨基甲烷

簡介：天津醫(yī)科大學博士學位論文ARF缺失與腫瘤細胞MDMX異常調(diào)控的分子生物學機制姓名李小龍申請學位級別博士專業(yè)臨床醫(yī)學；腫瘤學指導教師郝希山201205天津醫(yī)科大學博士學位論文ABSTRACTMDMXISAHETERODIMERICPARTNEROFMDM2ANDACRITICALREGULATOROFP53THEMDMXLEVELISGENERALLYELEVATEDINTUMORSWITHWILDTYPEP53ANDCONTRIBUTESTOP53INACTIVATIONMDMDDEGRADATIONISCONTROLLEDINPARTBVMDM2MEDIATEDUBIQUITINATIONHEREWESHOWTHATⅣIDⅣⅨTURNOVERISHIGHLYRESPONSIVETOCHANGESINMDM2LEVELINNONTRANSFORMEDCELLSBUTNOTINTMNORCELLSWEFOUNDTHAT10SSOFALTEMATEREADINGFRAMEARFEXPRESSION，WHICHOCCURSINMOSTTUMORS謝THWILDTYPEP53SIGNIFICANTLYREDUCESMDMXSENSITIVITYTOMDM2RESTORATIONOFAI江EXPRESSIONINTUMORCELLSENABLESMDM2TODEGRADEMDMXINADOSEDEPENDENTMANNERARFBINDSTOMDⅣ【2ANDSTIMULATESASECONDSITEINTERACTIONBETWEENTHECENTRALREGIONOFMDM2ANDMDMXANDTHUSINCREASESMDMX_】ⅥDM2BINDINGANDMDMXUBIQUITINATIONTHESERESULTSREVEALANIMPORTANTABNORMALITYINTHEP53REGULATORYPATHWAYASACONSEQUENCEOFAI邛DEFICIENCYLOSSOFARFDURINGTUMORDEVELOPMENTNOTONLYPREVENTSP53STABILIZATIONBYPROLIFERATIVESTRESSBUTALSOCAUSESACCUMULATIONOFMDⅣTHATCOMPROMISESP53ACTIVITYTHISPHENOMENONMAYREDUCETHECLINICALEFFICACYOFMDM2一SPECIFICINHIBITORSBYPREVENTINGMDMXDOWNREGULATIONKEYWORDSMDM2MDMXARFP53UBIQUITINATIONNUTLINII

簡介：目的脊柱黃韌帶骨化OSSIFICATIONOFLIGAMENTUMFLAVUM，0LF本質(zhì)屬于軟骨內(nèi)成骨，但是，關(guān)于其病因和發(fā)病機制的分歧較多，目前尚無有效的藥物防治方法，手術(shù)是唯一治療手段，但手術(shù)風險大且遠期效果不確切。如何預測骨化是否進展，如何防止骨化的繼續(xù)發(fā)展和術(shù)后復發(fā)，是臨床上亟待解決的問題，這些問題的解決都必須建立在對發(fā)病機制清晰了解的基礎上。因此，從多角度對其發(fā)病機制進行研究是非常必要的。已知局部解剖力學和生長因子BMPS、TGFΒ是黃韌帶骨化的可能因素，黃韌帶骨化初期有豐富的血管增生，血管生成是骨化的必備條件。調(diào)節(jié)血管生成的細胞因子眾多，主要有血管內(nèi)皮生長因子VEGF、成纖維細胞生長因子FGF、骨形成蛋白BMPS、轉(zhuǎn)化生長因子ΒTGFΒ、胰島素樣生長因子IGF、血小板源性生長因子PDGF和環(huán)氧化酶2COX2等，推測BMPS和TGFΒ可能是通過促進局部血管生成而發(fā)揮促韌帶骨化的作用。VEGF是迄今為止已知的最強的促血管生成因子，COX2是炎癥因子PGE2介導的血管生成的關(guān)鍵酶?；谝陨涎芯砍晒瑢嶒瀼难苌珊忘S韌帶局部解剖學角度，研究血管生成和胸椎椎板傾斜角在黃韌帶骨化中的作用和臨床意義，從宏觀生物力學到微觀分子生物學研究脊柱黃韌帶骨化發(fā)病的可能中心環(huán)節(jié)，提出藥物預防和控制的可能性，以期更好地指導臨床，為黃韌帶骨化的綜合施治尋找可能的途徑。方法脊柱后路手術(shù)切取的正常NL，5例、退變DL，9例和骨化OL，L8例的黃韌帶標本，作HE染色，地衣紅染色，SP法作VEGF、COX2、ON、CD34免疫組化染色，觀察比較各組纖維組成、血管生成和各因子的表達分析OL組CD34表達與CT、MRI影像學表現(xiàn)的關(guān)系。組織塊結(jié)合酶消化法體外培養(yǎng)骨化13例和正常5例黃韌帶細胞LFCS，觀察其生物學特性，作ALP染色和透射電鏡觀察，在常規(guī)、低氧和不同濃度塞來昔布藥物作用下，采用SP法作VEGF、COX2免疫細胞化學染色和ELISA法測定細胞培養(yǎng)上清液VEGF濃度，RTPCR法測定骨化6例和正常3例LFCS的VEGF、COX2和BMP2MRNA表達，分析各因子對骨化的作用及其相互關(guān)系。以直立狀態(tài)下脊柱矢狀面重力線為參照，分析不同節(jié)段黃韌帶所受力矩大小，測量干燥胸椎標本20具共233個椎骨椎板傾斜角LSA，并分析其角度分布與TOLF患者22例共90個骨化灶黃韌帶骨化好發(fā)部位之間的關(guān)系。將黃韌帶與其相鄰上下椎板視為“椎板黃韌帶椎板復合體”，從理論上分析黃韌帶在不同LSA時受力情況。結(jié)果DL和OL組彈力纖維含量明顯低于NL組QND468，QNO670，OL組在韌帶與骨化的交界處可見豐富血管增生，OL組VEGF和COX2表達IOD值高于DL組TVEGF219，TCOX2247，DL和OL組ON表達差異無顯著性T0N036，DL和OL組MVD高于NL組QND379，QNO610，DL和OL組差異無顯著性QDO237，MVD在CT和MRI的兩種不同分型中差異有顯著性TCT424，TMRI462。共體外培養(yǎng)黃韌帶細胞17株，正常LFCS5株，骨化LFCSL2株。細胞從貼附于培養(yǎng)瓶內(nèi)的韌帶組織小塊萌出緩慢，約需610D可見有細胞從組織小塊邊緣萌出，呈典型成纖維細胞形態(tài)。OL組常規(guī)培養(yǎng)細胞可形成不透亮鈣化結(jié)節(jié)，ALP染色陽性，免疫細胞化學染色COX2陽性，VEGF弱陽性，NL組表達均陰性。OL組LFCS低氧培養(yǎng)24H后COX2和VEGF均強陽性表達，塞來昔布10ΜMOLL組培養(yǎng)72H后，COX2和VEGF表達弱陽性，20100ΜMOLL組表達均陰性。常規(guī)培養(yǎng)組在細胞80％匯合時上清液VEGF濃度顯著高于鈣化結(jié)節(jié)形成時測定值T260，低于低氧培養(yǎng)組T543，塞來昔布組隨藥物濃度增加，上清液VEGF濃度整體呈下降趨勢，塞來昔布抑制細胞生成VEGF，并呈劑量效應關(guān)系。細胞存活率在藥物濃度20ΜMOLL組顯著低于對照組P118，Q294，Q176，P值均大于005，即三者之間相對表達量無統(tǒng)計學差異，NL組LFCS三者表達陰性。胸椎LSA與相應椎體水平面成鈍角，分布以T7T10為波谷段，TOLF分布以T8T10為波峰段，兩者分布具有相關(guān)性，LSA最小的下胸段與TOLF好發(fā)部位大體一致。黃韌帶受軸向牽拉力為FSINΑ，在椎板垂直的理想狀態(tài)下黃韌帶受力為F，角Α越大，黃韌帶受到的張力越小，反之亦然。結(jié)論1反復微小創(chuàng)傷→韌帶修復增生→局部肥厚低氧→VEGF、COX2異常分泌→血管生成→韌帶纖維化、骨化。黃韌帶骨化是一個連續(xù)性發(fā)展的病理過程，血管生成可能是啟動骨化過程的最終步驟，有重要的臨床影像學和治療學意義。2體外培養(yǎng)黃韌帶骨化患者的非骨化部位的黃韌帶細胞可表達成骨細胞表型，低氧能刺激黃韌帶細胞異常分泌COX2和VEGF，選擇性COX2抑制劑塞來昔布能抑制黃韌帶細胞的分裂增殖和COX2和VEGF的產(chǎn)生，提示血管生成抑制劑可能有預防術(shù)后骨化復發(fā)和控制骨化進展的作用，為臨床綜合施治提供可能的途徑。3VEGF、COX2和BMP2三者關(guān)系密切，互相作用，共同促使黃韌帶內(nèi)血管生成和骨化發(fā)生。4脊柱生理曲度是0LF多發(fā)于胸椎和HLF多發(fā)于頸、腰椎的解剖學基礎，胸椎黃韌帶所受的張應力是牽拉性骨贅形成的力學因素，胸椎LSA的不同和由此作用于LF牽拉力的不同可能是TOLF多發(fā)于下胸段的解剖學和生物力學因素之一。5反復機械應力引起脊柱黃韌帶細胞分子生物學改變，宏觀力學機制通過微觀分子生物學機制來發(fā)揮作用，兩者是統(tǒng)一體，不應割裂開來研究黃韌帶骨化的機制。

簡介：隨著人們對藥用植物內(nèi)生菌根真菌研究的深入，越來越多的藥用植物內(nèi)生菌根真菌的次生代謝產(chǎn)物被分離鑒定，并被證明其中含有與宿主植物相同或相似的有效成分。研究藥用植物內(nèi)生菌根真菌的活性成分、為藥用植物資源尋找合理的替代品已成為當今藥用植物研究的熱點問題之一。本實驗通過對藥用植物內(nèi)生菌根真菌的研究，為其成為藥用植物合理的替代品提供了基礎數(shù)據(jù)。本實驗利用組織分離的方法，從常見的16種藥用植物的根部分離得到了11株內(nèi)生菌根真菌。并對其中的5個菌株進行了生物學特陛、抑菌活性、有效化學成份及分子生物學等方面了研究。供試的5個菌株分別為分離自桔梗中的內(nèi)生菌根真菌JG1102，分離自防風中的內(nèi)生菌根真菌FF0121，分離自苦參中的內(nèi)生菌根真菌KS1220，分離自玉竹中的內(nèi)生菌根真菌YZ1104，分離自黃芩的內(nèi)生菌根真菌NQIN0116。其中，可以通過形態(tài)學，即分生孢子的形態(tài)特征進行鑒定的有4株。即桔梗內(nèi)生菌根真菌JG1102初步鑒定為桔梗鏈格孢ALTERNARIAPLATYCODONIS，防風內(nèi)生菌根真菌FF0121根鏈格孢ALTERNARIARADICINA，苦參內(nèi)生菌根真菌KS1220豆鏈格孢ALTERNARIAAZUKIEA，玉竹內(nèi)生菌根真菌YZ1104初步鑒定為燕麥鐮孢菌FUSARIUMAVENACEUM本實驗分別從5種不同的碳源和氮源中，篩選出適宜菌株JG1102、FF0121、KSL220、YZ1104和LHQIN0116生長的碳源和氮源。綜合實驗結(jié)果，并本著節(jié)約成本的原則，我們分別選擇了葡萄糖和馬鈴薯作為內(nèi)生菌根真菌培養(yǎng)中的最佳碳源和氮源，即在供試的內(nèi)生菌根真菌的培養(yǎng)中，利用馬鈴薯葡萄糖PDA培養(yǎng)基就可以達到最佳的效果。在最適生長溫度的研究中，本實驗確定了20～25℃為內(nèi)生菌根真菌的最適溫度。從供試的5個菌株中篩選出了3株具有抑制細菌活性的菌株，分別為JG1102、YZ1104和HQIN0116。抑菌結(jié)果表明，此3個菌株的發(fā)酵產(chǎn)物、甲醇提取液、乙醇提取液對細菌均有一定的抑菌活性，并且甲醇提取液的抑菌率較乙醇提取液的抑菌率略高。但這3個菌株的水提液對測試細菌則都沒有抑菌活性。通過薄層層析色譜的分析，分別用黃酮展開劑CHCLMEOH8515和生物堿展開劑CHCLMEOH71加少量氨水和二乙胺薄層展開后，10％的濃硫酸顯色，觀察熒光和顯色斑點。結(jié)果表明菌株JG1102、YZ1104和HQIN0116與其宿主原植物含有相同或相似生物堿和黃酮類的有效成分。以ITS1和ITS4為引物，對KS1220的RDNA進行了PCR擴增，并對擴增產(chǎn)物進行了測序，結(jié)果表明這種內(nèi)生菌根真菌與已有的土壤真菌的同源相似性較高。本文的創(chuàng)新點本實驗首次采用組織分離和形態(tài)學鑒定的方法，確定了桔梗內(nèi)生菌根真菌JG1102為桔梗鏈格孢，防風內(nèi)生菌根真菌FF0121為根鏈格孢，苦參內(nèi)生菌根真菌KS1220位為鏈格孢，玉竹內(nèi)生菌根真菌YZ1104為燕麥鐮孢菌。本實驗首次篩選出了3株具有抑制細菌活性的內(nèi)生菌根菌株，分別為桔梗內(nèi)生菌根真菌JG1102桔梗鏈格孢、玉竹內(nèi)生菌根真菌YZ1104燕麥鐮孢菌和黃芩內(nèi)生菌根真菌HQIN0116。并通過化學成分的初步檢驗，證明了這3個菌株與其宿主原植物含有相同或相似的生物堿和黃酮類有效成分。

簡介：NO20032323河暗蓮科六蠆碩士研究生畢業(yè)論文實驗動物皮膚病原真菌分子生物學檢測方法的建立及應用研究生導師專業(yè)二級學院研究起止日期提交同期龔巧玲劉福英教授劉軍須副教授生物化學與分子生物學基礎醫(yī)學院2004年9月一2006年3月2006年3月中文摘要養(yǎng)物，接種于沙氏液體培養(yǎng)基，置27℃恒溫搖床80轉(zhuǎn)／分振蕩培養(yǎng)10天。將培養(yǎng)液倒入100ML離心管內(nèi)離心，沉淀裝入15MLEP管中，70℃或液氮保存。取以上冷凍保存的三種菌沉淀物少量各約1OMG用破壁酶破壁，使用酚氯仿抽提法抽提DNA；然后用皮膚病原真菌通用引物CHS11S，CHS11R和隨機引物FML進行PCR擴增，鑒別三種皮膚真菌標準菌株。2通用引物PCR特異性及敏感性測定特異性測定用皮膚病原真菌通用引物進行PCR，擴增大腸桿菌DNA化學裂解法提取、犬肝炎病毒DNA及小鼠肝癌H22細胞DNA由本室提供。敏感性測定DNA提取方法同上，以紫外分光光度法測定DNA質(zhì)量濃度，根據(jù)測定值將DNA進行1O倍系列質(zhì)量濃度稀釋，得到100NG一10龜?shù)?個質(zhì)量濃度，然后對其進行PCR擴增。3皮膚病原真菌動物模型的建立取三種標準菌株傳種到沙氏斜面固體培養(yǎng)基，27℃培養(yǎng)1O天。取下菌落加適量滅菌生理鹽水制成菌懸液，用劃痕法建立實驗動物皮膚病原真菌動物模型。4使用分子生物學方法及傳統(tǒng)方法檢測皮膚病原真菌用接種鏟從建立的動物模型身上刮取毛發(fā)及鱗屑于沙氏斜面固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，2～3天后菌落長出，從培養(yǎng)基上刮取菌落提取DNA及用通用引物PCR擴增鑒別，同時將可疑菌落分離純化，6～7天后用隨機引物FML進行PCR擴增鑒別，12～14天后根據(jù)鏡檢及菌落形態(tài)鑒別皮膚病原真菌。5河北省各地實驗動物的皮膚病原真菌檢測從實驗動

簡介：第四軍醫(yī)大學博士學位論文人源性抗角蛋白單鏈抗體的構(gòu)建、表達和FAB片段生物學作用及其分子機理的研究姓名李承新申請學位級別博士專業(yè)皮膚病與性病學指導教師劉玉峰200161第四軍醫(yī)大掌博士掌位論文諸多限制，而且，由于角蛋白是分子量在48～68KD之間的一組分子，我們自正常人血清中所提取純化的AKAUTOAB也是針對這一組分子量不同的角蛋白的多克隆抗體，這就使研究中的AKAUTOAB作用特異性較差，無法明確AKAUTOAB的作用究竟是源于針對某一特定角蛋白抗體的單獨作用，還是多種抗角蛋白抗體的綜合作用。因此，既往所觀察到的實驗結(jié)果至少應該是針對多種分子量角蛋白的綜合作用，尚無法反映針對不同分子量角蛋白的單克隆AKAUTOAB的作用。目前AKAUTOAB的研究正面臨兩大問題①臨床應用研制具有良好療效、能批量生產(chǎn)且無毒副作用的產(chǎn)品，因此研發(fā)有效的抗角蛋白的基因工程抗體已是勢在必行；②作用機理在分子水平上闡明AKAUTOAB生物學作用的細胞與分子機理，特別是AKAUTOAB發(fā)揮作用的信號傳導機制，后者是全面闡明AKAUTOAB生物學作用的基礎。分子機理的研究是臨床應用的基礎，而臨床應用又是闡明機理的目的。尋找更為有效和準確的研究方法及手段來盡快解決這些問題已迫在眉睫。我們進行取研究的目的就在于觀察抗角蛋白基因工程抗體FAB片段的生物學效應、制備抗角蛋白基因工程單鏈抗體及探討抗不同分子量角蛋白的抗體生物學作用的、可能的信號傳導機制，為今后的深入研究奠定基礎。主碉實驗內(nèi)容吸結(jié)果＼／＼／第一部分人源性抗角蛋白單鏈抗體的克隆、表達及活性測定1利用基因重組技術(shù)對從半合成噬菌體抗體庫中克隆的人源性抗角蛋白抗體FAB片段進行了改造，獲得了人源性抗角蛋白SEFV片段。FDNA序列分析結(jié)果表明，PSCFV的VK和VH基因序列同RRKZ的VK和VN基因序列完全相同，表明在FAB片段改建成SCFV過程中未發(fā)生基因突變。用ELISA的方法測定可溶性表達的SCFV抗體與角蛋白以及鐵蛋白、胃蛋白酶、HBSAG等無關(guān)抗原的結(jié)合反應，發(fā)現(xiàn)SCFV能特異性地與角蛋白結(jié)合而與其它抗原不結(jié)合，說明人源性抗角蛋白FAB抗體改建為SCFV后具有較好的特異性和親和力，但可溶性表達的SCFV的親和力低于可溶性FAB片段；0、2將利用噬菌體抗體庫技術(shù)從半合成噬菌體抗體庫中克隆到的人源性抗角蛋白抗體FAB片段成功地進行了可溶性表達。表達產(chǎn)物經(jīng)金屬鏊合層析純化后，并采用ELISA和WESTERNBLOT等方法進行鑒定。結(jié)果表明，可溶性表達的FAB片段不僅具有良好的抗原結(jié)合活性，而且，具有相當高的特異性，僅識別48KD的角蛋白，與其它分子量的角蛋白或鐵蛋白、胃蛋白酶、HBSAG等無關(guān)抗原無交叉反應；＼J

簡介：復旦大學博士學位論文高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細胞表面分子特異性結(jié)合肽的篩選及其生物學功能姓名莢衛(wèi)東申請學位級別博士專業(yè)外科學指導教師湯釗猷20060401博士論文中文摘要能肝癌細胞表面特異性結(jié)合肽。為使篩選到的特異性結(jié)合肽具有代表性，我們采取差減篩選策略，先將噬菌體肽庫與MHCC97L共育，這樣得到的新噬菌體肽庫就消除了與MHCC97L細胞表面結(jié)合的非特異性噬菌體，然后再篩選與HCCLM3細胞表面結(jié)合的噬菌體。由于MHCC97L和HCCLM3具有相似的遺傳背景，從而消除了不同樣本由于遺傳背景不同而固有的性狀差異，將混雜因素減少到最低。研究顯示經(jīng)過3輪連續(xù)差減篩選，回收率從39010弓增加到11510～，陽性噬菌體克隆得到有效的富集；隨機挑選48個噬菌體克隆進行DNA序列分析，獲得11種肽序列，其中展示ALATRPTYRPROLEUPROPROAWYPLPP肽的噬菌體被高度富集，占第3輪噬菌體克隆的77％37／48。噬菌體體外結(jié)合實驗顯示所獲得的11種噬菌體克隆與HCCLM3細胞表面的結(jié)合效率明顯高于對照空白噬菌體33～278倍；平均為47倍，其中AWYPLPP噬菌體與HCCLM3的結(jié)合效率是對照空白噬菌體的278倍。將AWYPLPP序列與蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫BLAST進行同源序列搜索，結(jié)果顯示所得到的蛋白質(zhì)主要為細胞外或細胞表面蛋白、腫瘤特異性抗原及前體、底物蛋白等，如可能與腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移以及腫瘤血管生成相關(guān)的細胞外基質(zhì)蛋白一1ECML，同源性為71％。上述結(jié)果表明，采用BRASL噬菌體隨機肽庫技術(shù)和差減篩選策略，獲得了11種與高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細胞表面分子的結(jié)合肽，其中為首的結(jié)合肽為AWYPIPP。2高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細胞表面分子特異性結(jié)合肷的鑒定本部分的研究目的采用噬菌體體外結(jié)合實驗、流式細胞儀、抗噬菌體免疫細胞化學染色、免疫熒光染色和激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)以及噬菌體結(jié)合抑制實驗，利用具有不同轉(zhuǎn)移潛能的人肝癌細胞株，對高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細胞表面結(jié)合肽AWYPLPP肽的特異性進行鑒定。本課題的初衷是篩選高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細胞特異性結(jié)合肽，盡管AWYPLPP噬菌體對高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細胞株HCCLM3展示了良好的選擇性，但不能確保AWYPLPP噬菌體可以與高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細胞結(jié)合。我們選擇了7種不同轉(zhuǎn)移潛能的人肝癌細胞株，包括高轉(zhuǎn)移潛能的人肝癌細胞株MHCC97、MHCC97H、HCCLM3、HCCLM6，低轉(zhuǎn)移潛能肝癌細胞株MHCC97L、PLC／PRE／5和無轉(zhuǎn)移潛能肝癌細胞株HEP3B，正常人肝細胞株CCLL3即CHANG1IVET，對AWYPLPP肽的特異性進行鑒定。噬菌體體外結(jié)合實驗和流式細胞儀研究顯示，與低轉(zhuǎn)移潛能肝癌細胞株MHCC97L、PLC／PRE／5和無轉(zhuǎn)移潛能肝癌細胞株HEP3B以及正常人肝細胞

簡介：以骨組織衰老為特征的一系列代謝性骨病正成為威脅中老年人健康生活的重要因素破骨細胞骨吸收功能和成骨細胞骨形成功能失衡是其發(fā)生的主要機制研究和闡明破骨細胞的增齡改變規(guī)律和衰老特點有利于對其病理機制的認識、防治方案的制定該文以不同月齡大鼠為研究對象分別以股骨和腰椎為皮質(zhì)骨和松質(zhì)骨代表采用TRAP染色技術(shù)、吸收陷窩定量分析技術(shù)和RTPCR等手段觀察比較大鼠幼年、青年、中年和老年等不同生理階段破骨細胞的數(shù)量、骨吸收功能變化和破骨細胞功能酶表達等狀態(tài)并從破骨細胞發(fā)生的血源前體干細胞和微環(huán)境骨髓細胞的增齡變化等不同角度探索其形成的可能機制

簡介：點擊查看更多外周原始神經(jīng)外胚葉瘤臨床病理學和分子生物學研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的本研究的主要目的是對2003年濟南章丘市無菌性腦膜炎爆發(fā)開展全面的調(diào)查，從現(xiàn)場流行病學的角度出發(fā)，初步描述所有病例的“三間”分布等基本情況，探討其流行因素；同時，結(jié)合血清流行病學、病毒學和分子生物學技術(shù)，運用已經(jīng)建立的血清中和抗體檢測、腸道病毒分離鑒定和RTPCR快速診斷等方法，從病原學上明確病因，并對分離到ECHO30的VP1段進行基因序列的測定和分析，確定ECHO30山東分離株的基因型及其變異程度。材料與方法所有病例信息來源于2003年章丘市無菌性腦膜炎爆發(fā)調(diào)查的資料，包括發(fā)病情況調(diào)查和個案調(diào)查。病原學標本來源于爆發(fā)期內(nèi)采集的43份糞便標本和24份急性期、14份恢復期血清標本。病毒的分離、型別鑒定以及血清中和抗體試驗按照WHO脊髓灰質(zhì)炎實驗室手冊規(guī)定的方法進行；19株陽性分離株，經(jīng)TRIZOL試劑提取總RNA，進行逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應RTPCR合成互補脫氧核糖核酸CDNA，PCR產(chǎn)物純化后測定VP1基因的全長。借助SEQUENCHER，BIOEDIT，MEGA21等軟件進行結(jié)果分析。血清流行病學標本采用按比例多級抽樣方法，NTS2Δ38，設置7個年齡組，發(fā)病地區(qū)病例組和未發(fā)病地區(qū)對照組各取2各鄉(xiāng)鎮(zhèn)，以每個鄉(xiāng)鎮(zhèn)每個年齡組20人為標準，每人采集靜脈血3ML。得到血清標本病例組397份，對照組248份，運用中和抗體試驗技術(shù)，測定血清中和抗體的滴度。以上所得結(jié)果用SPSS120進行統(tǒng)計學分析處理。結(jié)果2003年6～9月，濟南章丘市發(fā)生了無菌性腦膜炎的爆發(fā)，發(fā)病高峰集中在7～8月，發(fā)病1743例，發(fā)病年齡集中在15歲以下，本次爆發(fā)的罹患率181‰，5～9歲年齡組高發(fā)，占全部病例數(shù)的55％，男女性別比157∶1，按照罹患率大小的空間分布，本次爆發(fā)以明水鎮(zhèn)為中心，向東呈扇形分布，臨床表現(xiàn)以發(fā)熱9456％、頭痛9596％、嘔吐8287％為主，預后良好，無致死病例出現(xiàn)。病原學結(jié)果提示引起爆發(fā)的病原體為單一的人類腸道病毒ECHO30；理化特性顯示，該分離株為具有“D”特征的強毒株，致病力強。分離株基因序列測定的結(jié)果進一步證實病原體為ECHO30，但相較于BASTIANNI標準株，已經(jīng)出現(xiàn)了核苷酸序列的變異，進化樹顯示ECHO30山東章丘株已經(jīng)與2003年山東泰安株、浙江株共同形成了新的基因組；同時認為，分子生物學診斷方法的確立和運用，將加速病原學診斷的過程，降低對病患的傷害，提高經(jīng)濟和社會效益。血清流行病學結(jié)果證實，章丘地區(qū)確實存在ECHO30爆發(fā)和流行，15歲以下健康兒童的中和抗體GMT達到了1∶5308，高于對照地區(qū)的GMT1∶3245，中和抗體滴度分布集中在1∶64～1∶256之間，抗體陽性率達到9093％，提示疾病流行過后，人群具有一定的免疫力。流行因素分析認為，此次爆發(fā)應歸結(jié)為以下幾個因素共同的作用，該地區(qū)多年未曾有過ECHO30所致疾病的流行，易感人群累積較多；病原體ECHO30亞型發(fā)生了核苷酸的變異，形成了新的基因組，并且毒力較以往的流行株有所提升，具有了強毒株的“D”特征；當?shù)氐淖匀坏乩項l件和飲食習慣，成為此次爆發(fā)的有利客觀條件。結(jié)論2003年濟南章丘市無菌性腦膜炎爆發(fā)是由當?shù)囟嗄晡丛l(fā)現(xiàn)循環(huán)的非脊灰腸道病毒ECHO30新基因組廣泛感染所致。今后，應當加強非脊灰腸道病毒所致疾病的監(jiān)測和控制工作。

簡介：中山大學碩士學位論文低分子肝素及肝素結(jié)合型表皮生長因子對人早孕期滋養(yǎng)細胞生物學功能的影響姓名吳曉霞申請學位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學指導教師張建平20070520◇之童碩士論文中文摘要2、探討LMWH是否可以對體外培養(yǎng)的滋養(yǎng)細胞產(chǎn)生作用，影響其增殖、侵襲及分化能力。3、LML|『H、HBEGF單獨或共同作用于滋養(yǎng)細胞，觀察Ⅲ州和HBFM；F是否存在對滋養(yǎng)細胞影響的相互作用。研究方法1滋養(yǎng)細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定人早孕期絨毛組織取自復旦大學附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院5～10孕周行人工流產(chǎn)的正常妊娠婦女。按照胰蛋白酶／DNA酶I消化和密度梯度離心兩步法分離滋養(yǎng)細胞。分離后的細胞用免疫細胞化學法鑒定細胞及其純度。20％胎牛血清的叫跚高糖培養(yǎng)液體外培養(yǎng)。2姍H對人早孕期滋養(yǎng)細胞生物學功能的影響21實驗分組LMWH組成分為ENOXAPARIN，藥物終濃度為0025IU／M1、025IU／M1、25IU／ML、25IU／M1、250IU／M1，對照組即蹦蹦培養(yǎng)液組。22枷嚇增殖試驗研究不同濃度LMWH對滋養(yǎng)細胞增殖能力的影響作用。將人早孕滋養(yǎng)細胞加入預先包被MATRIGEL的96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)過夜。在培養(yǎng)液中添加各種處理因素，繼續(xù)培養(yǎng)48H。行W丌比色試驗檢測細胞增殖情況。23TRANSWELL侵襲試驗研究不同濃度LMWH對滋養(yǎng)細胞侵襲能力的影響作用。預先將TRANSWELL板包被MATRIGEL備用。往上室加入滋養(yǎng)細胞懸液，并分別加入各種處理因素；下室加入叫聊高糖培養(yǎng)液，37℃，5％C0培養(yǎng)箱中孵育48H。棉簽輕輕拭去上室濾膜內(nèi)面的細胞，保留定向遷移至濾膜下表面的細胞，多聚甲醛固定，蘇木素染色，中性樹膠封片，高倍顯微鏡200倍下每孔隨機選擇5個視野計數(shù)細胞。24HCG分泌試驗研究不同濃度LMWH對滋養(yǎng)細胞分化能力的影響作用。將滋養(yǎng)細胞加入24孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)過夜。在培養(yǎng)液中添加各種處理因素，繼續(xù)培養(yǎng)48H。收集各孔的培養(yǎng)上清液，儲存于一20℃?zhèn)溆?，采用化學發(fā)光法測定BHOG濃度。

簡介：華中科技大學博士學位論文LRIG2對膠質(zhì)母細胞瘤細胞系GL15生物學特性的影響及其分子生物學機制研究姓名王寶峰申請學位級別博士專業(yè)外科學（神經(jīng)外科）指導教師雷霆20090501華中科技大學博士學位論文華中科技大學博士學位論文3第二部分第二部分LRIG2基因短發(fā)夾基因短發(fā)夾RNA表達穩(wěn)定株的建立及下調(diào)表達穩(wěn)定株的建立及下調(diào)LRIG2對EGFR信號通路的影響信號通路的影響目的目的構(gòu)建針對LRIG2基因的短發(fā)夾RNASHRNA的表達載體，建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞株觀察目的基因表達的變化及其對EGFR信號通路的影響。方法方法根據(jù)GENBANK中LRIG2基因序列設計2條RNA干擾序列，命名LRIG2SHRNA1、LRIG2SHRNA2，同時設計1條非特異性序列作為陰性對照。據(jù)此設計合成各自的寡核苷酸鏈，退火后連接入PGENESIL2載體，轉(zhuǎn)化擴增后進行序列測定。用不同濃度的G418作用于GL15細胞，得到G418對于GL15細胞的篩選濃度。3種重組表達載體轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細胞系GL15細胞，用G418篩選后挑單克隆后擴增獲得穩(wěn)定株。逆轉(zhuǎn)錄RTPCR和WESTERN印跡法分別在MRNA和蛋白水平上檢測LRIG2的表達。用表皮生長因子EGF100NGML體外干預得到的穩(wěn)定細胞株，WESTERNBLOT測定EGFR和磷酸化EGFR水平的變化。結(jié)果結(jié)果3種重組表達載體PGENESIL2LRIG2SHRNA1、PGENESIL2LRIG2SHRNA2和PGENESIL2NEGATIVESHRNA經(jīng)限制性酶切及DNA測序分析證明序列插入正確。G418對于GL15細胞的篩選濃度為600GML，篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染三種質(zhì)粒的GL15細胞，轉(zhuǎn)染PGENESIL2LRIG2SHRNA2組細胞LRIG2MRNA和蛋白表達明顯低于轉(zhuǎn)染PGENESIL2NEGATIVESHRNA組PGENESIL2LRIG2SHRNA1組LRIG2蛋白無明顯變化。EGF刺激5分鐘和30分鐘后，PGENESIL2LRIG2SHRNA2組細胞EGFR和PEGFR蛋白水平均低于對照組。結(jié)論結(jié)論成功構(gòu)建了針對LRIG2基因的SHRNA表達載體PGENESIL2LRIG2SHRNA2，轉(zhuǎn)染細胞后可抑制LRIG2基因表達，LRIG2與LRIG1作用相反，下調(diào)LRIG2可減少EGF誘導的EGFR磷酸化，促進EGFR降解。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞富含亮氨酸重復序列免疫球蛋白樣蛋白2；RNA干擾；短發(fā)夾RNA；EGFR

簡介：Y1406904分類號R361密級學位類別科學學位D專業(yè)學位口◎?qū)W校代碼學號1006220033009又蚌醬科矢垮TLANJINMEDICALUNIVERSITY碩士學位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目肺癌進展組織芯片中OPN和相關(guān)蛋白表達的生物學意義和分子機制的探討TITLERESEACHOFBIOLOGICALSIGNIFICANCEANDTHEMOLECULARMECHANISMOFOPNANDRELATIVEPROTEINEXPRESSIONINLUNGCANCERPROGRESSIONTISSUEMICROARRAY一級學科基礎醫(yī)學二級學科病理學與病理生理學論文作者吳興業(yè)指導教師王新允教授天津醫(yī)科大學研究生院二OO八年五月天津醫(yī)科人學碩七學位論文2．在肺原發(fā)癌中，隨著腫瘤分化程度的降低，OPN的表達逐漸升高。腫瘤的分化程度越低，其惡性度也越高，腫瘤細胞的增殖能力越強。III期IV期肺癌中OPN蛋白色表達明顯高于III期者，說明在肺癌的進展過程中發(fā)揮著重要作用。因而OPN作為判斷腫瘤預后的新指標，其表達強度可進一步指導臨床治療。3．原發(fā)性肺癌中CD44V6蛋白的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期顯著相關(guān)，提示CD44V6通過促進腫瘤細胞的增殖和促進腫瘤血管形成等方式參與腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移，CD44V6可以作為預后估計的參考指標。4．原發(fā)性肺癌中MMP．9蛋白的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期顯著相關(guān)，提示MMP．9通過降解ECM，調(diào)節(jié)細胞間黏附功能，與其他蛋白發(fā)揮協(xié)同作用，并促進腫瘤血管形成，參與肺癌的浸潤和轉(zhuǎn)移，MMP．9可以作為早期診斷和預后估計的參考指標。5．CD44V6與MMP．9的表達無相關(guān)性，提示二者通過不同的作用機制抑制細胞的凋亡和腫瘤血管的生成，從而在肺癌的發(fā)生發(fā)展中起著不同的作用。6．原發(fā)性肺癌中OPN、CD44V6和MMP．9蛋白表達和臨床分期顯著正相關(guān)；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達陽性率要明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，在IIIIV期肺癌中的陽性率顯著高于IIL期。這些結(jié)果提示三者均可以促進肺癌的浸潤和轉(zhuǎn)移，與肺癌進展和不良生物學行為相關(guān)，聯(lián)合檢測三者可以作為預后估計的參考指標。7．組織芯片技術(shù)作為一項高新技術(shù)，完全適用于科研工作，該研究進一步證實其可行性，使用此項技術(shù)既節(jié)省了時間和試劑，又提高了效率，減少誤差，組織芯片有望成為未來病理學工作者們進行科學研究的有力武器。關(guān)鍵詞組織芯片肺癌癌前病變OPNCD44V6MMP．9免疫組織化學