梅毒的快速診斷、免疫學(xué)以及分子生物學(xué)的研究.pdf

1、背景和目的：梅毒是由梅毒螺旋體感染引起的一種性傳播感染疾病，與HIV感染及其傳播率增長(zhǎng)有關(guān)。因其癥狀隱匿，治療常常被延誤，導(dǎo)致更廣泛的流行和傳播。近些年來(lái)，很多國(guó)家包括中國(guó)都有梅毒復(fù)燃流行的報(bào)道，提醒我們必須采取措施制止梅毒的蔓延。在梅毒快速診斷方面，世界衛(wèi)生組織(World HealthOrganization，WHO)已經(jīng)選擇出一些具有高敏感性和特異性的試劑盒在全球范圍推廣。這些以重組抗原為基礎(chǔ)的試劑盒在梅毒篩查中有望取代傳統(tǒng)的篩查

2、及確證試驗(yàn)，是未來(lái)大范圍檢測(cè)梅毒的高效檢測(cè)手段。在治療和預(yù)后方面，梅毒治療后的RPR滴度持續(xù)陽(yáng)性，雖然視為臨床治愈，但其潛伏復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)使患者的心理負(fù)擔(dān)始終不能消除。故探索血清抵抗的原因，分析其與免疫學(xué)因素的關(guān)系，最終達(dá)到心理生理的痊愈也是我們的研究任務(wù)之一。在流行病學(xué)方面，從1999年開始，美國(guó)疾病控制中心(Centers for Disease Control and Prevention，CDC)已經(jīng)加大力度將消除梅毒作為一個(gè)全球性

3、目標(biāo)。其中一個(gè)重要任務(wù)是監(jiān)控地方性爆發(fā)和傳播，阻止其擴(kuò)散到其他地區(qū)。而我們要研究梅毒的地方性流行病學(xué)和地方性爆發(fā)，必須開展其基因分型的研究。此外，應(yīng)用RT-PCR的梅毒螺旋體：DNA定量檢測(cè)方法，對(duì)于觀察治療效果、病情發(fā)展、尋找血清抵抗的原因等都是一個(gè)新的方法和思路。 方法： 1.梅毒的快速診斷： 1) 以TPHA為金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估幾種重組梅毒螺旋體抗原為基礎(chǔ)的快速酶聯(lián)免疫診斷試驗(yàn)在臨床上的應(yīng)用價(jià)值。 2)比

4、較傳統(tǒng)的快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)與重組梅毒螺旋體抗原為基礎(chǔ)的梅毒快速試驗(yàn)的敏感性和特異性。 2.梅毒的免疫學(xué)研究： 1)118例梅毒療后的RPR滴度變化的臨床資料分析?；仡櫺苑治龅味鹊某掷m(xù)陽(yáng)性與其年齡、性別、初始滴度、病期、治療藥物等相關(guān)影響因素的關(guān)系。 2)與健康對(duì)照組比較，分析梅毒治療前和治療后血清抵抗的免疫學(xué)特點(diǎn)。 3.梅毒螺旋體的分子生物學(xué)研究： 1)提取梅毒患者外周血中的基因

5、組DNA，篩選陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行基因分型：用巢式PCR以及RFLP技術(shù)，對(duì)不同病程時(shí)期的患者進(jìn)行基因分型，是梅毒流行病學(xué)研究的基礎(chǔ)。 2)DNA載量：正規(guī)驅(qū)梅治療前后，比較梅毒螺旋體在血液中的載量變化。通過(guò)RT-PCR方法，對(duì)6例外周血樣本DNA的表達(dá)進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果： 1.1)幾種試劑盒在血清檢測(cè)及全血檢測(cè)中均表現(xiàn)優(yōu)良，血清敏感性很高。①Abbott Determine Syphilis TP test：敏感性

6、為100％，特異性為98.9％。②SDBIOLINE Syphilis 3.0 test：敏感性為95.5％，特異性為97.9％。③VISITECT-SYPHILIS test：敏感性為94.0％，特異性為98.1％。④Syphicheck-WBtest：敏感性為67.4％，特異性為98.8％。 2)Abbott Determine Syphilis TP test：血清敏感性為100％，特異性為98.4％。RPR test：血

7、清敏感性為65.1％，特異性為98.4％。 2.1)血清抵抗的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果：不同年齡組、性別組分析分別比較P<0.05。初始滴度分組P<0.05，差異有顯著性，滴度為1：8患者抵抗比例高達(dá)61％。不同病期P<0.05，差異有顯著性，潛伏梅毒比例高達(dá)45.6％，而一期梅毒血清抵抗者僅占10％。不同藥物種類分組P<0.05，差異有顯著性，芐星青霉素療后血清抵抗比例只有28.3％，而大環(huán)內(nèi)酯類為72.7％。 2)未治梅毒患者

8、組、血清抵抗梅毒患者組及健康組的T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異無(wú)顯著性。 3.1)67例外周血標(biāo)本中，32例為持續(xù)RPR陽(yáng)性患者和5例RPR已經(jīng)陰轉(zhuǎn)的患者，檢測(cè)梅毒螺旋體DNA結(jié)果均為陰性。30例RPR滴度在1：32-1：128之間的患者外周血中，檢測(cè)到梅毒螺旋體DNA陽(yáng)性的為5例。將這5例進(jìn)一步進(jìn)行巢式PCR檢測(cè)，得到3種亞型：1個(gè)13c，2個(gè)14b，2個(gè)14d。 2)治療前患者血液中梅毒螺旋體的DN

9、A載量明顯高于療后。 結(jié)論： 1.4種以重組梅毒螺旋體抗原為基礎(chǔ)的試劑盒在臨床實(shí)驗(yàn)中，血清檢測(cè)比全血檢測(cè)具有敏感性更高、特異性更強(qiáng)，適合應(yīng)用于STD門診的梅毒檢測(cè)。以重組梅毒螺旋體抗原為基礎(chǔ)的試驗(yàn)方法與RPR試驗(yàn)相比，具有更高的敏感性。 2.潛伏梅毒、初始滴度較低者、以及治療應(yīng)用大環(huán)內(nèi)酯類藥物后的梅毒患者的血清抵抗率較高，統(tǒng)計(jì)學(xué)比較差異具有顯著性。免疫學(xué)檢測(cè)梅毒未治患者以及血清抵抗患者的T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞值