分子生物學(xué)總結(jié)

1、問答題：1衰老與基因的結(jié)構(gòu)與功能的變化有關(guān)，涉及到：衰老與基因的結(jié)構(gòu)與功能的變化有關(guān)，涉及到：（1）生長停滯；（2）端粒縮短現(xiàn)象；（3）DNA損傷的累積與修復(fù)能力減退；（4）基因調(diào)控能力減退。2超螺旋的生物學(xué)意義：超螺旋的生物學(xué)意義：（1）超螺旋的DNA比松馳型DNA更緊密，使DNA分子體積變得更小，對其在細(xì)胞的包裝過程更為有利；（2）超螺旋能影響雙螺旋的解鏈程序，因而影響DNA分子與其它分子（如酶、蛋白質(zhì)）之間的相互作用。3原核與真核

2、生物學(xué)原核與真核生物學(xué)mRNA的區(qū)別：的區(qū)別：原核：（1）往往是多順反子的，即每分子mRNA帶有幾種蛋白質(zhì)的遺傳信息（來自幾個(gè)結(jié)構(gòu)基因）。（2）5端無帽子結(jié)構(gòu)，3端一般無多聚A尾巴。（3）一般沒有修飾堿基，即這類mRNA分子鏈完全不被修飾。真核：（1）5端有帽子結(jié)構(gòu)（2）3端絕大多數(shù)均帶有多聚腺苷酸尾巴，其長度為20200個(gè)腺苷酸。（3）分子中可能有修飾堿基，主要有甲基化，（4）分子中有編碼區(qū)與非編碼區(qū)。4tRNA的共同特征：的共同特征

3、：（?。﹩捂溞》肿?，含7393個(gè)核苷酸。（2）含有很多稀有堿基或修飾堿基。（3）5端總是磷酸化，5末端核苷酸往往是pG。（4）3端是CPCPAOH序列。（5）分子中約半數(shù)的堿基通過鏈內(nèi)堿基配對互相結(jié)合，開成雙螺旋，從而構(gòu)成其二級結(jié)構(gòu)，開頭類似三葉草。（6）三級結(jié)構(gòu)是倒L型。5核酶分類：核酶分類：（1）異體催化的剪切型，如RNaseP；（2）自體催化的剪切型，如植物類病毒等；（3）內(nèi)含子的自我剪接型，如四膜蟲大核26SrRNA前體。6hn

4、RNA變成有活性的成熟的變成有活性的成熟的mRNA的加工過程的加工過程：（1）5端加帽；（2）3端加尾（3）內(nèi)含子的切除和外顯子的拼接；（4）分子內(nèi)部的甲基化修飾作用，（5）核苷酸序列的編輯作用。7反義反義RNA及其功能：及其功能：堿基序列正好與有意義mRNA互補(bǔ)的RNA稱為反意義或反義RNA，又稱調(diào)節(jié)RNA，這類RNA是單鏈RNA，可與mRNA配對結(jié)合形成雙鏈，最終抑制mRNA作為模板進(jìn)行翻譯。這是其主要調(diào)控功能，還可作為DNA復(fù)制的

5、抑制因子，與引物RNA互補(bǔ)結(jié)合抑制DNA的復(fù)制，以及在轉(zhuǎn)錄水平上與mRNA5末端互補(bǔ)，阻止RNA合成轉(zhuǎn)錄。8病毒基因組分型：病毒基因組分型：（1）雙鏈DNA（2）單鏈正股DNA（3）雙鏈RNA（4）單鏈負(fù)股RNA（5）單鏈正股RNA9病毒基因組結(jié)構(gòu)與功能的特點(diǎn)：病毒基因組結(jié)構(gòu)與功能的特點(diǎn)：（1）不同病毒基因組大小相差較大；（2）不同病毒的基因組可以是不同結(jié)構(gòu)的核酸。（3）病毒基因組有連續(xù)的也有不連續(xù)的；（4）病毒基因組的編碼序列大于90

6、%；（5）單倍體基因組，（6）基因有連續(xù)的和間斷的，（7）相關(guān)基因叢集；（8）基因重疊（9）病毒基因組含有不規(guī)則結(jié)構(gòu)基因，主要類型有：a幾個(gè)結(jié)構(gòu)基因的編碼區(qū)無間隔；bmRNA沒有5端的帽結(jié)構(gòu)；c結(jié)構(gòu)基因本身沒有翻譯起始序列。10原核生物基因組的結(jié)構(gòu)的功能特點(diǎn)：原核生物基因組的結(jié)構(gòu)的功能特點(diǎn)：（1）基因組通常僅由一條環(huán)狀雙鏈DNA分子組成。（2）基因組中只有1個(gè)復(fù)制起點(diǎn)。（3）具有操縱子結(jié)構(gòu)。（4）編碼順序一般不會重疊。（5）基因是連續(xù)的

7、，無內(nèi)含子，因此轉(zhuǎn)錄后不需要剪切。（6）編碼區(qū)在基因組中所占的比例（約占50%）遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于真核基因組，但又遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于病毒基因組。（7）基因組中重復(fù)序列很少（8）具有編碼同工酶的基因。（9）細(xì)菌基因組中存在著可移動的DNA序列，包括插入序列和轉(zhuǎn)座子。（10）在DNA分子中具有多種功能的識別區(qū)域。11真核生物基因組結(jié)構(gòu)與功能的特點(diǎn)：真核生物基因組結(jié)構(gòu)與功能的特點(diǎn)：（1）每一種真核生物都有一定的染色體數(shù)目，除了配子為單倍體外，體細(xì)胞一般為雙倍體。

8、（2）真核基因組遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于原核生物的基因組，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因數(shù)龐大。（3）都由一個(gè)結(jié)構(gòu)基因與相關(guān)的調(diào)控區(qū)組成，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子。（4）含有大量重復(fù)順序。（5）基因組內(nèi)非編碼的順序占90%以上。（6）真核基因是斷裂基因，（7）功能相關(guān)的基因構(gòu)成各種基因家族，它們可串聯(lián)在一起，亦可相距很遠(yuǎn)，但即使串聯(lián)在一起的成簇的基因也是分別轉(zhuǎn)錄的。（8）真核生物基因組中也存在一些可移動的遺傳因素，這些DNA順序并無明顯生物學(xué)功能，似乎為自己的目的而組織，故

9、有自私DNA之稱。12根據(jù)同源性程度，主要分五種類型：根據(jù)同源性程度，主要分五種類型：（1）核酸序列相同，實(shí)際上是多拷貝基因；（2）核酸序列高度同源，如人類生長激素基因家族；（3）編碼產(chǎn)物具有同源功能區(qū)；（4）編碼產(chǎn)物具有小段保守基序；（5）基因超家族。13DNA復(fù)制的基本過程：復(fù)制的基本過程：（1）DNA雙鏈解開；（2）RNA引物的合成；（3）DNA鏈的延長；（4）切除引物、填補(bǔ)缺口、連接相鄰DNA片段；（5）切除和修復(fù)錯(cuò)配堿基。14

10、DＮＡ的損傷方式：ＮＡ的損傷方式：（１）轉(zhuǎn)換：由一種嘧啶變成另一種嘧啶，或種嘌呤變成另一種嘌呤；（２）顛換：嘧呤與嘌呤互換。轉(zhuǎn)換和顛換只引起ＤＮＡ局部的改變，而ＤＮＡ其它部分的結(jié)構(gòu)不受影響，故稱為點(diǎn)突變。（３）丟失或插當(dāng)物理或化學(xué)信號刺激受體時(shí)，受體活化，與G蛋白結(jié)合并使之發(fā)生構(gòu)象改變。A亞基與GDP的親和力下降，結(jié)合的GDP為GTP所取代。A亞基結(jié)合了GTP后即與BR亞基發(fā)生解離，成為活化狀態(tài)的A亞基?；罨说腁亞基此時(shí)可以作用于下游

11、的各種效應(yīng)分子。這種活化狀態(tài)將一直持續(xù)到GTP被A亞基自身具有的GTP酶水解為GDP。33小分子細(xì)胞內(nèi)信使一般具有的三個(gè)特點(diǎn)：小分子細(xì)胞內(nèi)信使一般具有的三個(gè)特點(diǎn)：（1）不位于能量代謝途徑的中心；（2）在細(xì)胞中的濃度或分布可以迅速地改變；（3）作為變構(gòu)效應(yīng)劑作用于相應(yīng)的靶分子，已知的靶分子主要為各種蛋白激酶。34表皮生長因子受體（表皮生長因子受體（EGFR）介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑）介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑EGFR——Ras——MAPK（1）受體二聚

12、體的形成及其磷酸化；（2）募集接頭蛋白Grb2：（3）調(diào)控分子SOS的活化（4）低分子量G蛋白Ras的活化；（5）MAPK的級聯(lián)激活；（6）轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。35r——干擾素受體介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑：干擾素受體介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑：r干擾素與受體結(jié)合以后。也可以導(dǎo)致受體二聚體化，二聚體化的體可以激活JALSTAT系統(tǒng)，后者將干擾素刺激信號傳入核內(nèi)。JAK為一種存在于胞漿中的蛋白酪氨酸激酶，它活化后可使干擾素受體磷酸化。STA

13、T可以通過其SH2結(jié)構(gòu)域識別磷酸化的受體并與之結(jié)合，然后STAT分子亦發(fā)生酪氨酸的磷酸化，酪氨酸磷酸化的STAT形成二聚體并進(jìn)入胞核。二聚體STAT分子作為有活性的轉(zhuǎn)錄因子，影響相關(guān)基因的表達(dá)，進(jìn)而改變靶細(xì)胞的增殖與分化。36Klenow片段的用途：片段的用途：（1）補(bǔ)齊雙鏈DNA的3末端；（2）通過補(bǔ)齊3端使3末端標(biāo)記；（3）在cDNA克隆中，第二股鏈的合成。（4）DNA序列分析。37幾種常見修飾酶：幾種常見修飾酶：（1）DNA聚合酶

14、I：這個(gè)酶除有聚合酶活性外，尚有35及53核酸外切酶活性。由于它具有53核酸外切酶活性，當(dāng)用缺口平移法標(biāo)記DNA探針時(shí)，常用DNA聚合酶I。（2）逆轉(zhuǎn)錄酶：逆轉(zhuǎn)錄酶以RNA為模板合成DAN，合成時(shí)需要4種脫氧核苷酸及引物，合成方向?yàn)?3延伸，無35外切酶活性。廣泛用于mRNA為模板合成cDNA，構(gòu)建cDNA文庫。（3）T4DNA連接酶：催化雙鏈DNA一端3OH與另一雙鏈DNA的5端磷酸根形成3、5磷酸二酯鍵，使具有相同粘性末端或平端的D

15、NA末端連接起來。（4）堿性磷酸酶：去除DNA或RNA5端的磷酸根，制備載體時(shí)，用堿性磷酸酶處理后，可防止載體自身連接，提高重組效率。（5）末端脫氧核苷酰轉(zhuǎn)移酶：（TdT）：將脫氧核苷酸加到DNA的3OH上，主要用于探針標(biāo)記；或者在載體和待克隆的片段上形成同聚物尾，以便于進(jìn)行連接。（6）TaqDNA聚合酶和其它耐熱DNA聚合酶。38作為克隆載體的質(zhì)粒具備以下特點(diǎn)：作為克隆載體的質(zhì)粒具備以下特點(diǎn)：（1）分子量相對較小，能在細(xì)菌內(nèi)穩(wěn)定存在，

16、有較高的拷貝數(shù)。（2）具有一個(gè)以上的遺傳標(biāo)志，便于對宿主細(xì)胞進(jìn)行選擇，（3）具有多個(gè)限制酶的單一切點(diǎn)，稱為多克隆位點(diǎn)（MCS）。3939粘性質(zhì)粒的特點(diǎn)：粘性質(zhì)粒的特點(diǎn)：（1）含有質(zhì)粒的抗藥性標(biāo)記（2）帶有入噬菌體的粘性末端（cos區(qū)）；（3）具有一個(gè)或多個(gè)限制酶的酶切位點(diǎn)；（4）其本身分子量小，容納40kb左右的DNA片段；（5）由于非重組粘性質(zhì)粒很小，不能在體外包裝，因而體外包裝的主要是重組體，有利于以后的篩選。4040M31M31噬

17、菌體的優(yōu)點(diǎn)：噬菌體的優(yōu)點(diǎn)：（1）噬菌體顆粒中所含有的是單鏈DNA，該單鏈DNA可作為模板用于DNA序列分析；（2）利用單鏈M13克隆可制備成單鏈DNA探針用于雜交分析，檢測DNA或RNA，或者作為基因定點(diǎn)誘變的載體。4141大腸桿菌與哺乳動物表達(dá)載體的不同：大腸桿菌與哺乳動物表達(dá)載體的不同：大腸桿菌：含有復(fù)制位點(diǎn)、抗性基因、克隆位點(diǎn)，可導(dǎo)入大腸桿菌，與克隆載體一樣，表達(dá)載體中含有表達(dá)系統(tǒng)元件，即啟動子核糖體結(jié)合位點(diǎn)克隆位點(diǎn)轉(zhuǎn)錄終止信號。

18、哺乳動物：真核表達(dá)載體中含有一套真核表達(dá)元件：；啟動子增強(qiáng)子克隆位點(diǎn)終止信號和加poly(A)信號。4242重組重組DNADNA的目的和基本過程：的目的和基本過程：目的：（1）克隆某個(gè)特定的基因；（2）建立基因文庫、cDNA文庫，（3）將特定的基因片段進(jìn)行亞克隆以進(jìn)行DNA序列測定；（4）構(gòu)建表達(dá)載體以便在特定的宿主細(xì)胞中表達(dá)某個(gè)基因。過程：（1）制備目的基因和相關(guān)載體（2）將目的基因和有關(guān)載體進(jìn)行連接（3）將重組的DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞（