常見(jiàn)藥用植物內(nèi)生菌根真菌抑菌活性及分子生物學(xué)的初步研究.pdf

1、隨著人們對(duì)藥用植物內(nèi)生菌根真菌研究的深入，越來(lái)越多的藥用植物內(nèi)生菌根真菌的次生代謝產(chǎn)物被分離鑒定，并被證明其中含有與宿主植物相同或相似的有效成分。研究藥用植物內(nèi)生菌根真菌的活性成分、為藥用植物資源尋找合理的替代品已成為當(dāng)今藥用植物研究的熱點(diǎn)問(wèn)題之一。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)藥用植物內(nèi)生菌根真菌的研究，為其成為藥用植物合理的替代品提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。 本實(shí)驗(yàn)利用組織分離的方法，從常見(jiàn)的16種藥用植物的根部分離得到了11株內(nèi)生菌根真菌。并對(duì)其中的5

2、個(gè)菌株進(jìn)行了生物學(xué)特陛、抑菌活性、有效化學(xué)成份及分子生物學(xué)等方面了研究。 供試的5個(gè)菌株分別為：分離自桔梗中的內(nèi)生菌根真菌JG1102，分離自防風(fēng)中的內(nèi)生菌根真菌FF0121，分離自苦參中的內(nèi)生菌根真菌KS1220，分離自玉竹中的內(nèi)生菌根真菌YZ1104，分離自黃芩的內(nèi)生菌根真菌nQin0116。其中，可以通過(guò)形態(tài)學(xué)，即分生孢子的形態(tài)特征進(jìn)行鑒定的有4株。即桔梗內(nèi)生菌根真菌JG1102初步鑒定為桔梗鏈格孢(Alternaria

3、platycodonis)，防風(fēng)內(nèi)生菌根真菌FF0121根鏈格孢(Alternaria radicina)，苦參內(nèi)生菌根真菌KS1220豆鏈格孢(Alternaria azukiea)，玉竹內(nèi)生菌根真菌YZ1104初步鑒定為燕麥鐮孢菌(Fusarium avenaceum)本實(shí)驗(yàn)分別從5種不同的碳源和氮源中，篩選出適宜菌株JG1102、FF0121、KSl220、YZ1104和lHQin0116生長(zhǎng)的碳源和氮源。綜合實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并本著節(jié)約

4、成本的原則，我們分別選擇了葡萄糖和馬鈴薯作為內(nèi)生菌根真菌培養(yǎng)中的最佳碳源和氮源，即在供試的內(nèi)生菌根真菌的培養(yǎng)中，利用馬鈴薯葡萄糖(PDA)培養(yǎng)基就可以達(dá)到最佳的效果。在最適生長(zhǎng)溫度的研究中，本實(shí)驗(yàn)確定了20～25℃為內(nèi)生菌根真菌的最適溫度。 從供試的5個(gè)菌株中篩選出了3株具有抑制細(xì)菌活性的菌株，分別為JG1102、YZ1104和HQin0116。抑菌結(jié)果表明，此3個(gè)菌株的發(fā)酵產(chǎn)物、甲醇提取液、乙醇提取液對(duì)細(xì)菌均有一定的抑菌活性，

5、并且甲醇提取液的抑菌率較乙醇提取液的抑菌率略高。但這3個(gè)菌株的水提液對(duì)測(cè)試細(xì)菌則都沒(méi)有抑菌活性。 通過(guò)薄層層析色譜的分析，分別用黃酮展開(kāi)劑CHCl<,3>:MeOH(8.5:1.5)和生物堿展開(kāi)劑CHCl<,3>:MeOH(7:1)(加少量氨水和二乙胺)薄層展開(kāi)后，10％的濃硫酸顯色，觀察熒光和顯色斑點(diǎn)。結(jié)果表明：菌株JG1102、YZ1104和HQin0116與其宿主原植物含有相同或相似生物堿和黃酮類(lèi)的有效成分。 以I

6、TS1和ITS4為引物，對(duì)KS1220的rDNA進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行了測(cè)序，結(jié)果表明：這種內(nèi)生菌根真菌與已有的土壤真菌的同源相似性較高。 本文的創(chuàng)新點(diǎn)： 本實(shí)驗(yàn)首次采用組織分離和形態(tài)學(xué)鑒定的方法，確定了桔梗內(nèi)生菌根真菌JG1102為桔梗鏈格孢，防風(fēng)內(nèi)生菌根真菌FF0121為根鏈格孢，苦參內(nèi)生菌根真菌KS1220位為鏈格孢，玉竹內(nèi)生菌根真菌YZ1104為燕麥鐮孢菌。 本實(shí)驗(yàn)首次篩選出了3株具有抑制細(xì)菌