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簡(jiǎn)介：本文為了進(jìn)一步了解我國(guó)PUUV病毒在宿主動(dòng)物中的流行情況，加強(qiáng)我國(guó)腎綜合征出血熱的防治，進(jìn)行了以下的研究1對(duì)我國(guó)吉林省和內(nèi)蒙古地區(qū)的岸鼠平進(jìn)行了PUUV病毒感染情況調(diào)查。1應(yīng)用RTPCR技術(shù)首次在我國(guó)內(nèi)蒙古地區(qū)捕捉的紅背中發(fā)現(xiàn)PUUV。2于2005年和2006年在吉林省撫松市共采集了277份標(biāo)本，使用IFA和RTPCR分別檢測(cè)了標(biāo)本中病毒抗原和核酸。發(fā)現(xiàn)此次標(biāo)本中的PUUV病毒序列與在該地區(qū)2002年所發(fā)現(xiàn)的存在著較大差異。發(fā)現(xiàn)不同年份宿主動(dòng)物的PUUV感染率存在著較大的差異。2普馬拉病毒新亞型S片段和M片段基因的獲得及遺傳學(xué)研究。1成功地獲得了S片段和M片段基因全序列。2對(duì)獲得的基因序列進(jìn)行了遺傳學(xué)分析。發(fā)現(xiàn)與其它普馬拉病毒株S片段序列的核苷酸同源性為682％756％，推導(dǎo)的氨基酸序列的同源性為929％977％。全長(zhǎng)M片段與其它普馬拉病毒M片段序列的核苷酸同源性為687％730％，推導(dǎo)的氨基酸序列的同源性為900％928％。證實(shí)我國(guó)存在著普馬拉病毒的新亞型。3對(duì)病毒分離進(jìn)行了嘗試。本課題進(jìn)行了中國(guó)普馬拉病毒株的病毒學(xué)、遺傳學(xué)研究，在我國(guó)發(fā)現(xiàn)了PUUV新亞型，發(fā)現(xiàn)我國(guó)東北地區(qū)不同年份棕背的PUUV感染率不同。此外，在我國(guó)內(nèi)蒙古地區(qū)首次發(fā)現(xiàn)存在PUUV病毒感染。對(duì)我國(guó)腎綜合征出血熱的防治提供了有益的幫助和依據(jù)。

簡(jiǎn)介：南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文IGFBP3功能性多態(tài)與胃癌遺傳易感性的分子流行病學(xué)研究姓名陳文森申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)指導(dǎo)教師沈洪兵20080510南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文IGFBP3功能性多態(tài)與胃癌遺傳易感性的分子流行病學(xué)研究南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)系研究生陳文森導(dǎo)師沈洪兵教授中文摘要第一部分IGFBP3功能性多態(tài)與胃癌遺傳易感性的分子流行病學(xué)研究胰島素樣因子IIGF．I在細(xì)胞增殖、分化和凋亡等過(guò)程中發(fā)揮重要作用，與腫瘤的發(fā)生有關(guān)。體循環(huán)中超過(guò)90％的IGF．I和胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3IGFBP3結(jié)合在一起，其生物利用度受IGFBP3調(diào)節(jié)。IGFBP3蛋白可通過(guò)調(diào)節(jié)IGF。I的功能或者獨(dú)立作用從而影響個(gè)體腫瘤患病風(fēng)險(xiǎn)。流行病學(xué)研究表明，IGFBP3表達(dá)水平與胃癌的發(fā)生及預(yù)后有關(guān)。研究表明，IGFBP3表達(dá)水平受其基因多態(tài)A．202C和GLY32ALA能／IN節(jié)。因此推測(cè)IGFBP3功能性多態(tài)可能影響胃癌的發(fā)生．【目的】研究IGFBP3功能性多態(tài)A．202C和GLY32ALA與胃癌遺傳易感性的關(guān)系，并探討潛在的基因．環(huán)境交互效應(yīng)在胃癌發(fā)生中的作用?！痉椒ā坎捎貌±畬?duì)照研究設(shè)計(jì)和分子流行病學(xué)研究方法。病例為經(jīng)病理學(xué)明確診斷的新發(fā)胃癌患者，對(duì)照選自同期居住在當(dāng)?shù)氐臒o(wú)惡性腫瘤病史居民，與病例按性別和年齡進(jìn)行頻數(shù)匹配。采用PCR限

簡(jiǎn)介：山東大學(xué)博士學(xué)位論文卵巢早衰不孕癥的臨床及相關(guān)遺傳學(xué)基礎(chǔ)研究姓名張鵬申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)婦產(chǎn)科生殖醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師陳子江20070410山東大學(xué)博士學(xué)位論文卵巢早衰不孕癥的臨床及相關(guān)遺傳學(xué)基礎(chǔ)研究專業(yè)婦產(chǎn)科生殖醫(yī)學(xué)博士研究生張鵬博士生導(dǎo)師陳子江卵巢早衰PREMATUREOVARIANFAILURE，POF是育齡期常見的婦科內(nèi)分泌疾病，發(fā)，’病機(jī)理尚不清楚，新的觀點(diǎn)不斷出現(xiàn)，已成為婦科內(nèi)分泌學(xué)研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)“1．POF對(duì)婦女精神和身體帶來(lái)巨大的痛苦嘲，POF為多因素疾病，但具體病因不明“’。只有510％的POF患者在確診后能自發(fā)妊娠伽，這意味著大多數(shù)POF患者要受到不孕癥的困擾。目前較為確定的助孕治療為供卵體外授精一胚胎移植Ⅲ。POF不孕癥的患病狀況、臨床特征、遺傳特點(diǎn)是否有其特殊性本研究從下述兩個(gè)部分、四個(gè)獨(dú)立又密切相關(guān)方面對(duì)其進(jìn)行了探討。希望為POF不孕癥的病因分型、有效的治療以及POF的預(yù)防提供一些理論依據(jù)。一、卵巢早衰的不孕癥患者的臨床分析1．卵巢早衰的不孕癥患者臨床特征的初步探討2．核型分析在POF不孕患者中的探討二、卵巢早衰的不孕癥相關(guān)候選基因的基礎(chǔ)研究3．BMPL5基因外顯子突變與多態(tài)研究與POF不孕癥的關(guān)聯(lián)性研究4．FMRL基因5’UTRCG6N重復(fù)次數(shù)與卵巢早衰不孕癥的相關(guān)性研究

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多男性特發(fā)性低促性腺激素性機(jī)能減退癥的臨床及分子遺傳學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：微小按蚊是我國(guó)重要的瘧疾傳播媒介室內(nèi)滯留噴灑和擬除蟲菊酯殺蟲劑浸泡蚊帳是重要的防治措施我國(guó)云南一直在應(yīng)用該化學(xué)方法防制。有報(bào)道稱已發(fā)現(xiàn)微小按蚊對(duì)擬除蟲菊酯殺蟲劑產(chǎn)生了抗藥性有研究認(rèn)為我國(guó)云南的微小按蚊A和C型吸血行為和棲息行為也有所差異但更進(jìn)一步的行為差異特別是應(yīng)用殺蟲劑之后在殺蟲劑壓力下微小按蚊對(duì)殺蟲劑抗藥性與吸血和棲息行為的關(guān)系還有待于深入研究。1微小按蚊分子分型微小按蚊復(fù)合組成員以及幾種親緣相近的蚊種具有相近的外形特征在外形上容易混淆形態(tài)學(xué)鑒定容易出現(xiàn)錯(cuò)誤。該復(fù)合組迄今已記錄有微小按蚊A、B、C、D、E我國(guó)云南南部主要為A型、C型近年也有AC混合型微小按蚊的報(bào)道。先對(duì)做采集的蚊蟲進(jìn)行形態(tài)學(xué)分型再用PCR方法對(duì)捕獲的微小按蚊進(jìn)行分子分型。ANMINIMUSA364只ANMINIMUSC593只ANJEYPIENSIS19只ANACONITUS15只另有2只疑似為微小按蚊AC混合型54只不是微小組按蚊種團(tuán)成員。2微小按蚊棲息習(xí)性研究在東方紅村選取若干牛圈和人房為采樣點(diǎn)使用誘蚊燈采集成蟲每日1900掛燈開始采集次日800收集蚊蟲。對(duì)各個(gè)誘蚊燈所采集蚊蟲進(jìn)行分別計(jì)數(shù)。經(jīng)過(guò)SPSS軟件統(tǒng)計(jì)分析得出結(jié)論ANMINIMUSA偏好棲息人房而ANMINIMUSC偏好棲息于牛圈。3微小按蚊吸血習(xí)性研究根據(jù)東方紅村的實(shí)際情況調(diào)查當(dāng)?shù)氐闹饕獎(jiǎng)游镅礊榕?、豬和雞再加上人血源設(shè)計(jì)特異性引物鑒別捕獲蚊蟲胃血來(lái)源。結(jié)果經(jīng)SPSS軟件分析ANMINIMUSA無(wú)明顯的吸血偏好而ANMINIMUSC偏好吸食牛血。4微小按蚊鈉通道基因序列研究登錄GENBANK可以查詢到ANMINIMUS鈉離子通道部分編碼序列區(qū)CDS片段序列GENBANKGU0649303和PARA型鈉離子通道基因序列GENBANKEU1553861。根據(jù)PARA型鈉離子通道基因序列設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增ANMINIMUS的ⅡS6區(qū)段序列并測(cè)序共測(cè)序微小按蚊736只其中415只測(cè)序結(jié)果理想比對(duì)結(jié)果顯示在常見KDR突變的1014位點(diǎn)并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)突變提示該地區(qū)微小按蚊的擊倒抗性很低或并沒(méi)有產(chǎn)生擊倒抗性。5微衛(wèi)星位點(diǎn)多樣性檢測(cè)結(jié)果及分析登錄GENBANK可以查詢到ANMINIMUS已有28條微衛(wèi)星序列編號(hào)為HQ8397971、HQ8397991、HQ8398011、HQ8398031、HQ8397971、HQ8397951、HQ8397931、HQ8397931、HQ8397891、HQ8398161、HQ8398141、HQ8398101、HQ8398121、HQ8398081、HQ8398061、HQ8398041、HQ8398021、HQ8398021、HQ8397981、HQ8397961、HQ8397941、HQ8397921、HQ8397921、HQ8398151、HQ8398131。根據(jù)以上序列設(shè)計(jì)引物其中AM4、AM71、AM8、AM12、AM21、AM23、AM251和AM271八個(gè)位點(diǎn)擴(kuò)增出清晰的條帶測(cè)序結(jié)果理想可用于微衛(wèi)星數(shù)據(jù)分析。將采集蚊蟲分為八個(gè)組A組為ANMINIMUSA云南東方紅村B組為ANMINIMUSC云南東方紅村C組為ANJEYPIENSIS云南龍?zhí)链錎組為ANACONITUS海南牙營(yíng)村E組為ANACONITUS云南龍?zhí)链錐組為ANMINIMUSA云南龍?zhí)链錑組為ANMINIMUSC云南龍?zhí)链錒組為ANMINIMUSA海南牙營(yíng)村用微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)這些組的期望雜合度與觀察雜合度、多態(tài)性信息含量、哈迪溫伯格平衡分析、群體內(nèi)的近交系數(shù)、群體分化系數(shù)等多方面分析并對(duì)微小按蚊種團(tuán)進(jìn)行聚類。各個(gè)位點(diǎn)期望雜合度與觀察雜合度的值非常相似說(shuō)明這些標(biāo)記具有良好的多態(tài)性適用于群體分析。實(shí)驗(yàn)用8個(gè)按蚊種群間的生物多樣性很好各個(gè)位點(diǎn)的平均多態(tài)信息含量處于053～077之間云南龍?zhí)链宀东@的ANACONITUS遺傳多樣性略低但都05仍然比較豐富。哈迪溫伯格平衡檢驗(yàn)結(jié)果各種群存在多位點(diǎn)的雜合子缺失偏離了哈迪溫伯格平衡標(biāo)準(zhǔn)總的群體遺傳分化系數(shù)FST01386各種群之間基因交流較少。聚類分析結(jié)果表明同種之間距離接近微小按蚊A型、C型與烏頭按蚊距離接近與杰普爾按蚊距離較遠(yuǎn)符合微小按蚊種團(tuán)的基本情況。

簡(jiǎn)介：華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文膽管癌表遺傳學(xué)研究DNMTI與HDACI對(duì)膽管癌細(xì)胞干預(yù)效應(yīng)的研究姓名李宏申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)外科學(xué)普外專業(yè)指導(dǎo)教師鄒聲泉20090401華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文3基因沉默以至腫瘤的發(fā)生中有非常重要的作用，為此我們專門探討了DNA甲基化酶抑制劑、組蛋白脫乙?；敢种苿┡cSIRT1之間的關(guān)聯(lián)性。在研究中我們發(fā)現(xiàn)對(duì)于組蛋白脫乙?；敢种苿┎幻舾械腟IRT1在組蛋白脫乙?；敢种苿┡cDNA甲基化酶抑制劑聯(lián)合作用下表達(dá)減少。進(jìn)一步研究后明確了恢復(fù)HIC1基因表達(dá)，抑制SIRT1表達(dá)是組蛋白脫乙?；敢种苿┡cDNA甲基化酶抑制劑聯(lián)合作用膽管癌細(xì)胞中抑癌基因表達(dá)的機(jī)制之一。本研究為進(jìn)一步明確組蛋白脫乙?；敢种苿┡cDNA甲基化酶抑制劑聯(lián)合作用機(jī)制、明確表遺傳學(xué)變化間的關(guān)系奠定了基礎(chǔ)，并為利用表遺傳學(xué)方法治療膽管癌提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

簡(jiǎn)介：汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文1博士研究生學(xué)位論文GN刺激和IVM對(duì)小鼠卵母細(xì)胞遺傳學(xué)的影響EFFECTSOFGNIVMONTHECYTOGEICSOFMOUSEOOCYTE專業(yè)生殖遺傳學(xué)博士研究生徐嵐博士生導(dǎo)師黃天華專業(yè)生殖遺傳學(xué)博士研究生徐嵐博士生導(dǎo)師黃天華汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院中國(guó)汕頭二00八年四月汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文II實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果一、促性腺激素刺激和體外成熟培養(yǎng)對(duì)小鼠卵母細(xì)胞受精及其后發(fā)育潛能的影響1促性腺激素刺激周期和自然周期體內(nèi)成熟卵母細(xì)胞的受精率、2CELL和囊胚形成率相比無(wú)明顯差異；2促性腺激素刺激周期體外成熟卵母細(xì)胞與體內(nèi)成熟卵母細(xì)胞相比，受精率和囊胚形成率明顯降低；3自然周期體外成熟卵母細(xì)胞與體內(nèi)成熟卵母細(xì)胞相比，受精率和囊胚形成率明顯降低；4促性腺激素刺激周期與自然周期體外成熟卵母細(xì)胞的核成熟率和受精率相比無(wú)明顯差異，但前者的囊胚形成率明顯高于后者。二、促性腺激素刺激和體外成熟培養(yǎng)對(duì)MⅡ期卵母細(xì)胞蛋白合成的影響通過(guò)SDS－PAGE單向電泳／銀染和凝膠成像系統(tǒng)分析，促性腺激素刺激和體外成熟培養(yǎng)對(duì)卵母細(xì)胞MII期蛋白質(zhì)合成無(wú)明顯影響。三、促性腺激素刺激和體外成熟培養(yǎng)對(duì)卵母細(xì)胞的紡垂體結(jié)構(gòu)和染色體排列的影響通過(guò)LCPOLSCOPE活體觀察及ＦＩＴＣ／DAPI免疫染色結(jié)合熒光顯微鏡觀察，結(jié)果表明促性腺激素刺激和體外成熟培養(yǎng)對(duì)卵母細(xì)胞MII期紡垂體出現(xiàn)率、紡垂體長(zhǎng)度、紡垂體結(jié)構(gòu)形態(tài)和染色體排列無(wú)明顯影響。四、促性腺激素刺激和體外成熟培養(yǎng)對(duì)卵母細(xì)胞染色體非整倍性的影響通過(guò)孤雌激活、GIEMSA染色結(jié)合FISH技術(shù)檢測(cè)各組成熟卵母細(xì)胞染色體數(shù)目，四組相比染色體非整倍性發(fā)生率無(wú)明顯差異。結(jié)論結(jié)論1促性腺激素刺激不影響體內(nèi)成熟卵母細(xì)胞的受精和其后的發(fā)育潛能；2體外成熟培養(yǎng)降低卵母細(xì)胞的受精和其后的發(fā)育潛能；3促性腺激素刺激不增加體內(nèi)成熟卵母細(xì)胞受精后胚胎的發(fā)育潛能，但可以增加體外成熟卵母細(xì)胞受精后胚胎發(fā)育潛能；4促性腺激素刺激和體外成熟培養(yǎng)不影響小鼠卵母細(xì)胞MⅡ期的蛋白合成；5促性腺激素刺激和體外成熟培養(yǎng)不增加卵母細(xì)胞紡垂體結(jié)構(gòu)和染色體排列異常的發(fā)生率；6促性腺激素刺激和體外成熟培養(yǎng)不增加卵母細(xì)胞染色體非整倍性的發(fā)生；

簡(jiǎn)介：癌癥對(duì)于人類健康有巨大威脅并且是導(dǎo)致人類死亡的最常見的疾病之一。經(jīng)過(guò)前一段時(shí)間里表觀遺傳學(xué)研究的快速發(fā)展，癌癥現(xiàn)在已經(jīng)被認(rèn)為是無(wú)數(shù)遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)的變異在細(xì)胞內(nèi)累計(jì)的最終結(jié)果。表觀遺傳修飾對(duì)于腫瘤形成和發(fā)展有主要的推動(dòng)作用。所以靶向表觀遺傳修飾藥物的研究受到人們高度重視。盡管我們已經(jīng)掌握了這個(gè)理論，但是仍有一個(gè)問(wèn)題需要被解答，那就是怎樣將研究結(jié)果轉(zhuǎn)換到臨床的應(yīng)用。最古老但也是最有效的方法就是使用化學(xué)化合物來(lái)實(shí)現(xiàn)這個(gè)目標(biāo)。本研究中我確認(rèn)了一個(gè)嶄新的作用于表觀遺傳調(diào)控的化合物3DCAZANEPLANOCINADZNEP，并且將其應(yīng)用于多種腫瘤細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)了DZNEP誘導(dǎo)凋亡的能力和它的作用機(jī)制。DZNEP可以靶向PRC2蛋白，我們使用DZNEP作為工具發(fā)現(xiàn)一些重要的PRC2靶基因，并且確認(rèn)他們?cè)谀[瘤生物學(xué)中的功能。我也選擇一個(gè)已知的腫瘤抑制基因CDKN1C來(lái)加以研究，詳細(xì)分析其轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的表觀遺傳修飾模式。并且這個(gè)EZH2靶基因在乳腺癌患者中有強(qiáng)的預(yù)后價(jià)值。1篩選化合物庫(kù)后發(fā)現(xiàn)3DEAZANEPLANOCINADZNEP并確認(rèn)其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞E2F1依賴凋亡的活性腫瘤的發(fā)生取決于細(xì)胞生長(zhǎng)和程序死亡是否能保持精確平衡。RBE2F1通路在調(diào)控細(xì)胞周期中起到重要作用。已經(jīng)有報(bào)道發(fā)現(xiàn)表觀遺傳抗腫瘤藥物SAHA能通過(guò)激活E2F1下游靶基因BIM誘導(dǎo)腫瘤特異的凋亡。這里我展開大規(guī)模藥物篩選以發(fā)現(xiàn)更多的類似SAHA可以通過(guò)E2F1通路誘導(dǎo)凋亡的藥物。我用基于HCT116P53NULLERE2F1細(xì)胞株的篩選平臺(tái)篩選了一個(gè)包括了4000個(gè)化合物NATIONALCANCERINSTITUTENCI化合物庫(kù)。經(jīng)過(guò)不同方法和細(xì)胞系的篩選和確認(rèn)。我發(fā)現(xiàn)一個(gè)活性化合物3DEAZANEPLANOCINADZNEP。DZNEP誘導(dǎo)E2F1依賴凋亡的能力通過(guò)檢測(cè)不同凋亡標(biāo)志被確認(rèn)。DZNEP可以促進(jìn)E2F1促凋亡的靶基因表達(dá)，這些高度表達(dá)的基因最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。2通過(guò)藥理學(xué)方法抑制POLYCOMBREPRESSIVECOMPLEX2介導(dǎo)的基因抑制可選擇性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡POLYCOMBREPRESSIVECOMPLEX2PRC2介導(dǎo)的組蛋白甲基化在腫瘤基因異常沉默中起到重點(diǎn)作用，并且成為癌癥治療的潛在靶點(diǎn)。這里我發(fā)現(xiàn)SADENOSYLHOMOCYSTEINE水解酶抑制劑3DEAZANEPLANOCINADZNEP有效誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡但對(duì)正常細(xì)胞沒(méi)有作用。我發(fā)現(xiàn)DZNEP有效消除細(xì)胞內(nèi)PRC2組分包括EZH2，SUZ12和EED蛋白并且抑制相關(guān)的組蛋白H3賴氨酸27位三甲基化但不是組蛋白H3賴氨酸9位三甲基化。通過(guò)RNA干擾分析，全基因組表達(dá)分析和染色質(zhì)免疫沉淀研究，我確認(rèn)一組突出的基因在乳腺腫瘤中被PRC2抑制。并且它們的表達(dá)可被DZNEP重新激活。我進(jìn)一步展示DZNEP優(yōu)先的激活包括新發(fā)現(xiàn)的凋亡作用子FBXO32的一系列基因，都對(duì)DZNEP誘導(dǎo)的乳腺腫瘤細(xì)胞凋亡起作用。我的結(jié)果顯示DZNEP作為嶄新的改變?nèi)旧|(zhì)的化合物具有獨(dú)一無(wú)二的特點(diǎn)，并且提出了通過(guò)藥理學(xué)DZNEP處理來(lái)逆轉(zhuǎn)PRC2介導(dǎo)的基因抑制將可能是一種嶄新的治療腫瘤的方法。3腫瘤抑制基因CDKNICP57KIP2是EZH2靶標(biāo)并且在乳腺腫瘤中通過(guò)不同組蛋白修飾協(xié)同作用而被抑制CDKNIC編碼P57KIP2）是周期素依賴性激酶CDK抑制劑腫瘤抑制家族中的一員，它在人類腫瘤通常通過(guò)啟動(dòng)子區(qū)域的DNA甲基化而被抑制。在這一部分工作中我發(fā)現(xiàn)CDKNIC在乳腺腫瘤細(xì)胞中的抑制與DNA甲基化狀態(tài)無(wú)關(guān)我證明CDKNIC轉(zhuǎn)錄通過(guò)POLYCOMB蛋白EZH2及其相關(guān)組蛋白賴氨酸27位甲基化而抑制。用SADENOSYLHOMOCYSTEINE水解酶抑制劑3DEAZANEPLANOSINADZNEP處理導(dǎo)致EZH2蛋白表達(dá)和H3K27ME3的抑制，如果聯(lián)合使用組蛋白去乙酰酶抑制劑TRICHOSTATINATSA來(lái)有效逆轉(zhuǎn)組蛋白修飾將導(dǎo)致一個(gè)CDKNIC表達(dá)的驚人升高。單獨(dú)消除EZH2并不足以激活CDKNIC但是加入TSA就可以達(dá)到這個(gè)目的。這就顯示了組蛋白甲基化和去乙酰化協(xié)同而抑制CDKNIC表達(dá)。進(jìn)一步研究顯示CDKNIC表達(dá)抑制在包括乳腺腫瘤的多種人類腫瘤中存在。并且聯(lián)合高EZH2和低CDKNIC表達(dá)水平可以預(yù)測(cè)一個(gè)乳腺腫瘤的特別不良預(yù)后?？偟膩?lái)說(shuō)這些發(fā)現(xiàn)揭示在乳腺腫瘤中CDKNIC表達(dá)抑制的一個(gè)嶄新的機(jī)制，并且發(fā)現(xiàn)其作為EZH2靶點(diǎn)的預(yù)后價(jià)值。我在這里要特別指出了一個(gè)在乳腺腫瘤中通過(guò)藥理學(xué)途徑重新激活CDKNIC腫瘤抑制基因的有效方法。

簡(jiǎn)介：甲型流感病毒嚴(yán)重危害人類健康，由于其變異引發(fā)的大流行對(duì)人類造成嚴(yán)重威脅，近年來(lái)人感染禽流感病毒H5N1和甲型H1N1流感的流行，進(jìn)一步提示加強(qiáng)甲型流感病毒的研究和控制的重要性。血凝素HA和神經(jīng)氨酸酶NA是甲型流感病毒編碼的糖蛋白，變異性強(qiáng)，根據(jù)抗原性不同可進(jìn)一步分為16個(gè)HA亞型H1～H16和9個(gè)NA亞型N1～N9。盡管HA和NA是流感病毒主要的免疫原，但由于HA和NA的變異性強(qiáng)，亞型眾多，而目前甲型流感病毒16個(gè)HA和9個(gè)NA不同亞型之間的免疫交叉關(guān)系尚未系統(tǒng)研究，對(duì)流感病毒亞型特異性免疫檢測(cè)技術(shù)的建立和疫苗的研發(fā)提出了嚴(yán)峻的考驗(yàn)。為此，本研究對(duì)甲型流感病毒16個(gè)亞型的HA1和9個(gè)亞型NA的交叉反應(yīng)性進(jìn)行了研究，以期闡明其免疫反應(yīng)特征，為甲型流感病毒免疫檢測(cè)技術(shù)和通用疫苗的研制提供可行性的理論依據(jù)。另一方面，近年來(lái)反向遺傳系統(tǒng)的發(fā)明為人工改造甲型流感病毒和研發(fā)疫苗提供了關(guān)鍵技術(shù)平臺(tái)，但現(xiàn)有系統(tǒng)的拯救效率有待提高，本研究擬通過(guò)對(duì)甲型流流感病毒反向遺傳系統(tǒng)的轉(zhuǎn)錄表達(dá)載體的改建提高其拯救效率。一、甲型流感病毒HA和NA血清學(xué)交叉反應(yīng)特征研究對(duì)本實(shí)驗(yàn)選取的甲型流感病毒16個(gè)亞型的HA基因和9個(gè)亞型的NA基因的序列進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，16個(gè)HA和9個(gè)NA的核苷酸與氨基酸序列的進(jìn)化樹都主要向兩個(gè)趨勢(shì)進(jìn)化，16個(gè)HA核苷酸序列之間的同源率在28％～767之間，其氨基酸序列之間的同源率在362～785之間，9個(gè)NA亞型核苷酸序列之間的同源率在431～704之間，其氨基酸序列之間的同源率在379～666之間。盡管16個(gè)HA和9個(gè)NA基因的預(yù)測(cè)B細(xì)胞線性表位分布區(qū)域一致，但其具體表位組成卻存在差異，這些信息為進(jìn)行各亞型之間的血清學(xué)交叉反應(yīng)以及確定亞型特異性表位序列提供研究方向，進(jìn)而為研究HA和NA的結(jié)構(gòu)與功能、免疫識(shí)別、構(gòu)建HA和NA的突變體以及選擇表達(dá)新型HA和NA分子、研發(fā)診斷和基因工程疫苗奠定了基礎(chǔ)。隨后將PCR擴(kuò)增的經(jīng)密碼子優(yōu)化的16個(gè)HA1和9個(gè)NA基因克隆到改建的GP67PFASTBAC1載體中，獲得了25個(gè)重組桿狀病毒。將重組桿狀病毒分別感染SF9細(xì)胞，分別收取上清和細(xì)胞用抗6HIS抗體進(jìn)行WESTERNBLOT分析。結(jié)果表明，16個(gè)HA1和9個(gè)NA基因的表達(dá)產(chǎn)物分子質(zhì)量分別約為525KD與716KD，與預(yù)期相符，并且16個(gè)HA1和9個(gè)NA基因還呈分泌性表達(dá)。其中H5HA1和H9HA1經(jīng)NI柱純化后的純度達(dá)90左右，回收率分別為05和09。同時(shí)，將16個(gè)亞型的HA和9個(gè)亞型的NA基因克隆到5型重組腺病毒載體中，得到了25個(gè)重組腺病毒。分別將25個(gè)重組腺病毒通過(guò)滴鼻途徑免疫BALBC小鼠，制備了相應(yīng)亞型的抗體，三次免疫后ELISA檢測(cè)陽(yáng)轉(zhuǎn)率為100，ELISA檢測(cè)的抗體效價(jià)約為1∶6400左右。利用桿狀病毒系統(tǒng)表達(dá)的各個(gè)亞型的目的蛋白作為抗原，利用重組腺病毒免疫BALBC小鼠制備的血清作為抗體，通過(guò)ELISA方法確定16個(gè)HA亞型及9個(gè)NA亞型之間的血清學(xué)交叉反應(yīng)關(guān)系。結(jié)果表明，HA1和NA各亞型之間的交叉反應(yīng)關(guān)系錯(cuò)綜復(fù)雜，H2、H5、H7亞型與其他亞型之間的交叉反應(yīng)弱，而H6、H12、H16與其他亞型之間的交叉反應(yīng)強(qiáng)。N1、N2亞型與其他亞型之間的交叉反應(yīng)強(qiáng)，HA1和NA各亞型之間的交叉反應(yīng)結(jié)果與其序列分析的結(jié)果存在一定的差異。二、甲型流感病毒反向遺傳系統(tǒng)的優(yōu)化利用RTPCR的方法擴(kuò)增了甲型流感病毒APR834H1N1毒株8個(gè)基因片斷，克隆入PⅣⅦ載體中，其中在PB1片段中引入了3個(gè)沉默突變標(biāo)簽。將8個(gè)功能質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T和MDCK混合培養(yǎng)細(xì)胞，利用細(xì)胞病變、RTPCR、電鏡技術(shù)等證明該系統(tǒng)可成功拯救甲型流感病毒。為提高甲型流感病毒的拯救效率，用人工合成的SCPI啟動(dòng)子1插入PⅣⅦ載體，構(gòu)建出PⅣVS質(zhì)粒，再將APR834H1N1的8個(gè)基因片斷克隆入PⅣVS載體中，把優(yōu)化后的8個(gè)功能質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T和MDCK混合細(xì)胞，在共轉(zhuǎn)染后的24H、48H、72H及96H分別收獲轉(zhuǎn)染細(xì)胞的上清和細(xì)胞，通過(guò)EGFP表達(dá)量、NP表達(dá)的時(shí)相變化以及血凝試驗(yàn)鑒定兩個(gè)包裝系統(tǒng)的拯救效率。結(jié)果表明，優(yōu)化后系統(tǒng)不同時(shí)間點(diǎn)的EGFP表達(dá)量、NP表達(dá)量及血凝效價(jià)均高于未優(yōu)化系統(tǒng)，說(shuō)明利用高強(qiáng)度的SCPI啟動(dòng)子可有效提高甲型流感病毒的包裝效率，為改進(jìn)甲型流感病毒疫苗的研發(fā)系統(tǒng)奠定了基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：目的探討各BLPD的遺傳學(xué)異常比較不同BLPD間遺傳學(xué)異常差異為進(jìn)一步探討其發(fā)病機(jī)制及為各BLPD臨床診斷和鑒別診斷提供依據(jù)。結(jié)合臨床資料探討遺傳學(xué)異常與CLL、MCL臨床特點(diǎn)的關(guān)系及其對(duì)預(yù)后的影響。方法應(yīng)用熒光原位雜交FISH技術(shù)對(duì)在我院確診的BLPD患者骨髓或外周學(xué)標(biāo)本進(jìn)行遺傳學(xué)異常檢測(cè)主要檢測(cè)位點(diǎn)探針為13Q14D13S25、RB1、11Q2223ATM、14Q32IGH、17P13P53、12號(hào)染色體著絲粒CSP12、6Q23MYB、8Q24CMYC、1Q21、T11；14Q13；Q32CCND1IGH。應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法評(píng)價(jià)各BLPD間遺傳學(xué)異常差異。結(jié)合臨床資料探討各位點(diǎn)異常對(duì)CLL、MCL預(yù)后的影響。結(jié)果一各BLPD遺傳學(xué)異常率及其差異CLLN161DELD13S25488％DELRB1273％DEL11Q131％DEL17P125％12234％IGH易位174％總陽(yáng)性率795％。MCLN26DELD13S25520％DELRB1385％DEL11Q240％DEL17P440％12130％IGH易位920％CMYC易位或擴(kuò)增520％總陽(yáng)性率769％除外IGH易位。SMZLN11DELD13S25182％DELRB1167％DEL11Q0％DEL17P0％12273％IGH易位455％總陽(yáng)性率818％。LPLWMN34DELD13S2559％DELRB129％DEL11Q0％DEL17P118％1265％IGH易位29％DEL6Q214％總陽(yáng)性率387％。HCLN13DELD13S250％DELRB10％DEL11Q0％DEL17P83％120％IGH異常231％總陽(yáng)性率273％。BPLLN4DELD13S25500％DELRB1500％DEL11Q0％DEL17P750％120％IGH易位0％總陽(yáng)性率750％。MZLN5DELD13S2540％DELRB1333％DEL11Q0％DEL17P0％1220％IGH易位20％總陽(yáng)性率80％。CD5不能分類N18DELD13S25222％DELRBL111％DEL11Q56％DEL17P167％12250％IGH易位333％總陽(yáng)性率647％。高度疑似SMZLN25DELD13S25160％DELRB180％DEL11Q0％DEL17P160％1242％IGH易位160％總陽(yáng)性率417％。CD5不能分類N12DELD13S25167％DELRB10％DEL11Q83％DEL17P77％120％IGH易位308％總陽(yáng)性率417％。CLL與MCL在DEL17P上存在顯著差異P二遺傳學(xué)異常與BLPD臨床特征及預(yù)后的關(guān)系1遺傳學(xué)異常與CLL臨床特征及預(yù)后關(guān)系DELD13S25和單獨(dú)DELD13S25多見于CLL早期DEL11Q在CD38陽(yáng)性組為348％顯著高于陰性組的107％P0003。在IGVH未突變組DEL11Q和DEL17P分別為28％和32％顯著高于突變組的105％和70％P值分別為0046和0003；而IGVH突變組中DELD13S25和單獨(dú)DELD13S25分別為596％和351％顯著高于未突變組的36％和40％P值分別為0048和0003。單因素分析顯示伴DEL11Q和DEL17P為至需要治療時(shí)間TTT的不良預(yù)后因素而單獨(dú)DELD13S25為TTT的預(yù)后良好因素。對(duì)于總生存OS僅DEL17P為預(yù)后不良因素。結(jié)合其它臨床因素對(duì)TTT和OS的影響進(jìn)行多因素分析顯示DEL11QRR268P0001和DEL17PRR213P0013為TTT的不良影響因素而DEL17PRR331P0016和B癥狀RR232P0029為OS的不良預(yù)后因素。2遺傳學(xué)異常與MCL臨床特點(diǎn)和預(yù)后的關(guān)系DELD13S25與MIPI中高危、年齡60歲、LDH升高顯著相關(guān)；伴有2個(gè)或以上附加遺傳學(xué)異常多見于Β2微球蛋白60MG1和LDH升高患者；DEL17P亦多見于LDH升高者。單因素分析顯示DEL11Q、DEL17P、CMYC異常和2個(gè)或以上遺傳學(xué)異常為OS的不良預(yù)后因素而DELRB1、DEL17P、CMYC異常和2個(gè)或以上遺傳學(xué)異常為PFS不良預(yù)后因素。多因素分析顯示DEL17P為PFS和OS的唯一獨(dú)立影響因素。結(jié)論1DELD13S25在BLPD間普遍存在提示各BLPD可能存在共同的發(fā)病機(jī)制；2遺傳學(xué)異常可為各BLPD間鑒別診斷提供線索如12可作為SMZL與其它CD5BLPD患者的鑒別標(biāo)記IGH易位可作為L(zhǎng)PLWM與其它BLPD及MM的鑒別依據(jù)。3遺傳學(xué)異常與CLL分期、CD38表達(dá)及IGVH突變狀態(tài)相關(guān)；DEL11Q和DEL17P為TTT的獨(dú)立不良影響因素而DEL17P為OS的獨(dú)立不良預(yù)后因素。4DEL17P為MCL患者PFS和OS的唯一獨(dú)立影響因素。

簡(jiǎn)介：上海第二醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文淋巴瘤分子細(xì)胞遺傳學(xué)異常及其與臨床相關(guān)性研究姓名夏海龍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（血液學(xué)）指導(dǎo)教師陳賽娟20041201上海第二醫(yī)科犬學(xué)博士論文本課題第二部分基于第一部分的研究在淋巴瘤病例中發(fā)現(xiàn)6Q1621高頻缺失，而PRDML基因位于該區(qū)域是與淋巴細(xì)胞分化發(fā)育密切相關(guān)的轉(zhuǎn)錄抑制基因。我們采用PCR直接測(cè)序的方法對(duì)PRDML基因的突變／SNP進(jìn)行研究，分析PRDML基因突變／SNP在淋巴瘤發(fā)病中的作用及與淋巴瘤表型特征之間的相關(guān)性。結(jié)果在66例淋巴瘤病例中檢測(cè)到PRDML基因的J個(gè)單個(gè)堿基改變位點(diǎn)；PRDMI基因的第六外顯子的第44位核苷酸AT變異是導(dǎo)致氨基酸改變的錯(cuò)義突變，使野生型PRDML蛋白第678位氨基酸由谷氨酰氨轉(zhuǎn)變?yōu)榱涟彼?，改變了PRDML蛋白的第二個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)，有可能改變PRDML蛋白的功能參與淋巴瘤的發(fā)??；PRDML基因5’調(diào)控區(qū)616位GC突變，改變了AM。1基因?qū)ROML基因的調(diào)控結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致PRDML基因的轉(zhuǎn)錄異常，可能介導(dǎo)了淋巴瘤的發(fā)??；PROML基因第2外顯子的113位C／A位點(diǎn)；A轉(zhuǎn)換足多態(tài)性位點(diǎn)，在本組淋巴瘤病例中等位基岡A的頻率明顯高于；的頻率，該位點(diǎn)等似基因A、G參與編碼的氨基酸分別是絲氨酸和甘氮酸，位JPRDM蛋一的只有RP壤轉(zhuǎn)移酶活性的功能域，由丁絲氨酸和片氦酸珊化性質(zhì)明顯不同仃TU能改變州㈨蛋R的甲基轉(zhuǎn)移酶活性而介導(dǎo)淋巴瘤的發(fā)病PRD、LL基因第亂7外顯子存在的單核J‘酸變異是SNP，由于不改變氨基酸的編碼，推測(cè)與淋巴瘤的發(fā)病和IFI床表型無(wú)關(guān)；分析PRDML旗因突變／SNP與淋巴瘤表型特鉦相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，PICDML基閃突變／SNP與淋巴瘤B細(xì)胞免疫表型相關(guān)，主要見于彌漫大B細(xì)胞淋巴痛，提示PRD～11基燃突變／SNP有可能介導(dǎo)B細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生。關(guān)鍵詞淋巴瘤比較基因組雜交分子細(xì)胞遺傳學(xué)染色體突變單核；酸多態(tài)性

簡(jiǎn)介：目的探討卷煙的不同含量焦油對(duì)人體氧化損傷和遺傳損傷和相關(guān)機(jī)制。方法在某企業(yè)中問(wèn)卷調(diào)查選取足夠數(shù)量符合研究要求的研究對(duì)象，按研究對(duì)象所抽卷煙的焦油含量分為3組，即高焦油含量組12MG，中焦油含量組8MG和低焦油含量組5MG，不吸煙人群作為對(duì)照組。使研究對(duì)象停止抽吸原先牌子的卷煙，每組給予統(tǒng)一牌子卷煙，且卷煙的焦油含量與其停吸卷煙的相當(dāng)，使其每天抽煙量相同（20支天），跟蹤隨訪十天，采集第十天早晨空腹靜脈血，低溫運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室2000轉(zhuǎn)分離心10MIN分離制得血清和血漿，80℃冰箱保存。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAYELISA檢測(cè)血樣中的柯替寧COTININE、8羥基脫氧鳥嘌呤核苷8HYDROXYDEOXYGUNOSINE，8OHDG、多環(huán)芳烴DNA加合物POLYCYCLICAROMATICHYDROCARBONDNA，PAHDNA加合物、C反應(yīng)蛋白CREACTIVEPROTEIN，CRP、RAP2B蛋白和8羥基鳥嘌呤DNA糖苷酶（HUMAN8OXOGUANINEDNAGLYCOSYLASE1，HOGG1）的濃度水平運(yùn)用外周血淋巴細(xì)胞胞質(zhì)分裂阻滯法微核試驗(yàn)CYTOKINESISBLOCKMICRONUCLEUSASSAYINHUMANLYMPHOCYTE，CBMN檢測(cè)各組研究對(duì)象的外周血淋巴細(xì)胞的微核細(xì)胞率和微核率使用堿性單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)SINGLECELLGELELECTROPHESIS，SCGE微量全血法檢測(cè)各組研究對(duì)象的DNA單鏈斷裂損傷，以彗星拖尾率和彗星尾長(zhǎng)為檢測(cè)指標(biāo)。結(jié)果1現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查人群資料最終共納入147例研究對(duì)象，平均年齡為430531655025歲。各組的年齡KRUSKALWALLIS檢驗(yàn)方法比較得X27009，P＜00001，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即上述各組的年齡的總體分布不同。本研究用協(xié)方差等分析方法對(duì)年齡等因素的影響進(jìn)行消除。2柯替寧、8OHDG檢測(cè)結(jié)果各組的柯替寧、8OHDG濃度的總體分布不同。其中兩兩比較對(duì)照組和中焦油含量組、對(duì)照組和高焦油含量組、低焦油含量組和中焦油含量組、低焦油含量組和高焦油含量組，P＜00001，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3PAHSDNA加合物檢測(cè)結(jié)果各組的PAHSDNA加合物濃度的總體分布不同。其中兩兩比較對(duì)照組和低焦油含量組、對(duì)照組和中焦油含量組、對(duì)照組和高焦油含量組、低焦油含量組和中焦油含量組、低焦油含量組和高焦油含量組，P＜0001，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4C反應(yīng)蛋白檢測(cè)結(jié)果各組的C反應(yīng)蛋白濃度的總體分布不同。其中兩兩比較對(duì)照組和高焦油含量組、低焦油含量組和高焦油含量組、中焦油含量組和高焦油含量組，P＜00001，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5RAP2B蛋白檢測(cè)結(jié)果各組的RAP2B蛋白濃度的總體分布不同。其中兩兩比較對(duì)照組和中焦油含量組、對(duì)照組和高焦油含量組、低焦油含量組和中焦油含量組、低焦油含量組和高焦油含量組，P＜005，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。6HOGG1、彗星拖尾率和彗星尾長(zhǎng)檢測(cè)結(jié)果各組的HOGG1濃度、彗星拖尾率和彗星尾長(zhǎng)的總體分布不同。其中兩兩比較對(duì)照組和低焦油含量組、對(duì)照組和中焦油含量組、對(duì)照組和高焦油含量組、低焦油含量組和中焦油含量組、低焦油含量組和高焦油含量組、中焦油含量組和高焦油含量組，P＜005，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。7微核細(xì)胞率和微核率各組的微核細(xì)胞率和微核率的總體分布相同。其中兩兩比較對(duì)照組和低焦油含量組、對(duì)照組和中焦油含量組、對(duì)照組和高焦油含量組、低焦油含量組和高焦油含量組，P＜001，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論研究表明，高焦油含量組研究對(duì)象較對(duì)照組產(chǎn)生明顯的更多的氧化及遺傳學(xué)毒性損傷中焦油含量組及低焦油含量組研究對(duì)象較對(duì)照組產(chǎn)生的氧化及遺傳學(xué)毒性損傷雖不及高焦油含量組的明顯，但由于其結(jié)果數(shù)值是高于對(duì)照組的，所以其產(chǎn)生的損害不應(yīng)低估，應(yīng)引起人們的警惕。

簡(jiǎn)介：目的研究超聲及遺傳學(xué)在評(píng)估非梗阻性無(wú)精子癥NOA患者睪丸生精功能中的價(jià)值，尋找可靠的預(yù)測(cè)精子發(fā)生的指標(biāo)，提高睪丸精子獲取術(shù)TESE取精的成功率，并探討遺傳因素與生精障礙的關(guān)系，為無(wú)精子癥患者提供病因?qū)W診斷依據(jù)。材料與方法NOA患者34例，OA梗阻性無(wú)精子癥患者16例，正常生育男性30例，年齡21～43歲，分別進(jìn)行精液分析、血清性激素測(cè)定、遺傳學(xué)染色體核型分析和Y染色體AZF微缺失檢測(cè)、經(jīng)直腸超聲、經(jīng)陰囊灰階、彩色多普勒、能量多普勒超聲檢查，評(píng)估睪丸的生精功能，比較三組間的指標(biāo)有無(wú)顯著性差異并在能量多普勒超聲引導(dǎo)下行睪丸活檢評(píng)價(jià)精曲小管的精子發(fā)生功能。精子發(fā)生功能根據(jù)病理表現(xiàn)不同，分為5級(jí)L生精正常精曲小管內(nèi)生精上皮細(xì)胞排列有序，管腔內(nèi)有大量精子；2生精減少精曲小管中生精細(xì)胞大量減少，成熟精子細(xì)胞明顯減少；3生精阻滯精曲小管中僅見支持細(xì)胞和未成熟生精細(xì)胞，沒(méi)有成熟精子；4唯支持細(xì)胞綜合征SCOS精曲小管中只有支持細(xì)胞存在，而無(wú)生精細(xì)胞；5精曲小管玻璃樣變精曲小管玻璃樣變及纖維化，沒(méi)有生精細(xì)胞和支持細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS100統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行方差分析及相關(guān)性分析。P005。血清性激素含量NOA與OA、NOA與正常組之間FSH水平均有非常顯著性差異P005。LH、T和PRL的測(cè)定結(jié)果各組間均無(wú)顯著性差異P005。34例NOA患者，睪丸活檢獲得和未獲得精子者的血清FSH含量差異無(wú)顯著意義P005。FSH≤18LUL的20例中12例獲得精子600％，18LUL的14例中9例獲得精子643％。以18LUL為界值，F(xiàn)SH對(duì)獲取精子的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值582％，陰性預(yù)測(cè)值374％，敏感度571％，特異度385％。經(jīng)直腸超聲OA與正常組、OA與NOA組間精囊的長(zhǎng)徑、前后徑比較均有顯著性差異P005。OA組16例患者TRUS發(fā)現(xiàn)，先天性雙側(cè)輸精管缺如或發(fā)育不全3例1875％，其中1例單側(cè)精囊發(fā)育不全，2例雙側(cè)精囊發(fā)育不全，同時(shí)1例伴有前列腺發(fā)育不全；因鈣化或纖維化致雙側(cè)輸精管末段或射精管梗阻3例1875％，一側(cè)輸精管缺如或發(fā)育不全2例125％，輸精管末段或射精管囊腫2例125％，射精管結(jié)石1例625％，其余5例3125％未發(fā)現(xiàn)輸精管遠(yuǎn)端、精囊、射精管或尿道周圍前列腺的異常。NOA和正常組受檢者經(jīng)直腸超聲均未發(fā)現(xiàn)異常。陰囊灰階超聲各組受檢者的左右側(cè)睪丸大小無(wú)顯著性差異P005；正常組與OA組睪丸大小無(wú)顯著性差異P005；正常組與NOA組、OA與NOA組睪丸大小均有顯著性差異P005；睪丸體積≥10MI的22例中14例TESE獲得精子占636％，005；NOA患者睪丸動(dòng)脈TA、包膜動(dòng)脈CA、睪丸內(nèi)動(dòng)脈1TA的收縮期峰值血流速度PSV、舒張末期血流速度EDV顯著低于OA與正常對(duì)照組P005。34例NOA患者中30例彩色多普勒超聲測(cè)及雙側(cè)睪丸的TA、ITA多普勒頻譜，測(cè)及動(dòng)脈頻譜的60個(gè)睪丸中，睪丸活檢獲得精子與未獲得精子者TA、ITA的各項(xiàng)血流參數(shù)無(wú)顯著性差異P005。能量多普勒超聲OA和生育正常的男性睪丸內(nèi)血管都在3條以上。34例NOA患者的68個(gè)睪丸中，8個(gè)118％睪丸內(nèi)未發(fā)現(xiàn)血管，46個(gè)676％睪丸內(nèi)見到1～3條血管，14個(gè)206％睪丸內(nèi)見到3條以上血管。OA與NOA患者睪丸血流的能量多普勒超聲評(píng)估有非常顯著性差異P1692，P0001，能量多普勒超聲獲取精子的靈敏度725％，特異度677％。總體上，34例NOA患者21例獲取精子，取精成功率為618％。睪丸活檢并發(fā)癥1例患者左側(cè)睪丸針道周圍出現(xiàn)被膜下出血，呈斑片狀強(qiáng)回聲；1例患者1周后，右側(cè)睪丸內(nèi)出現(xiàn)條狀低回聲無(wú)血管區(qū)；3～6個(gè)月后復(fù)查，均未出現(xiàn)睪丸萎縮等并發(fā)癥。精曲小管精子發(fā)生功能評(píng)價(jià)5例OA組患者組織病理切片均顯示精子發(fā)生功能正常。34例NOA患者中精子發(fā)生功能減低10例294％，精子發(fā)生阻滯11例324％，唯支持細(xì)胞綜合征8例235％，精曲小管管道萎縮、玻璃樣變5例147％。SNKQ檢驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)精曲小管精子發(fā)生功能各分級(jí)間精曲小管管徑、固有層厚度以及生精上皮高度差異均存在顯著性意義P＜005。遺傳學(xué)檢測(cè)16例OA和30例正常男性未檢出染色體異常和AZF微缺失。34例NOA患者中，遺傳學(xué)異常15例，占441％1534。染色體異常者8例3例47XXY，睪丸病理表現(xiàn)為精曲小管玻璃樣變；1例46XYY18和1例46XYDELYP11為生精減少；1例46XYY18伴AZF微缺失和1例45XYDER1314P10Q10表現(xiàn)為生精阻滯；1例46XYDELYQ11伴AZF微缺失病理表現(xiàn)為SCOS。26例核型正常的男性中AZF基因片段微缺失7例1例AZFA缺失，睪丸病理表現(xiàn)為SCOS2例AZFB缺失，表現(xiàn)為生精阻滯；4例AZFC缺失，病理表現(xiàn)多樣化，1例與SCOS相似，1例為生精阻滯，2例為生精減少。結(jié)論能量多普勒超聲成像引導(dǎo)TESE在血管豐富區(qū)域的取精率顯著高于血管不豐富區(qū)域，故其對(duì)于提高TESE取精成功率有重要價(jià)值。在TESE前，用能量多普勒超聲成像了解睪丸血管分布情況、評(píng)估血管豐富的區(qū)域并進(jìn)行精確定位；術(shù)中能量多普勒超聲可清晰觀察穿刺經(jīng)過(guò)的組織結(jié)構(gòu)和血管，并避開重要血管，可避免多次隨機(jī)活檢導(dǎo)致的睪丸組織損傷，是安全、準(zhǔn)確獲取精子的方法，減少術(shù)后并發(fā)癥，提高TESE取精成功率。染色體異常及Y染色體AZF微缺失是引起睪丸生精功能障礙的重要原因，在進(jìn)行NOA的臨床診斷時(shí)，遺傳因素不可忽視。檢測(cè)NOA男性的染色體異常和Y染色體AZF微缺失對(duì)生精障礙病因的診斷十分必要，并給予詳細(xì)的遺傳學(xué)咨詢，選擇合理的治療方法，防止遺傳缺陷病后代的出現(xiàn)。

簡(jiǎn)介：目的研究表明下丘腦室旁核中谷氨酸能輸入的增加，在高血壓發(fā)病中起主要作用。因PVN中谷氨酸的輸入不僅來(lái)源于核團(tuán)內(nèi)部，同樣也來(lái)源于下丘腦內(nèi)其他核團(tuán)以及包括海馬、前額葉皮質(zhì)以及杏仁核在內(nèi)的端腦。在神經(jīng)科學(xué)中廣泛應(yīng)用的藥理學(xué)及電刺激手段因缺乏細(xì)胞特異性及時(shí)間空間選擇性，對(duì)于明確何種來(lái)源的谷氨酸能輸入在血壓調(diào)節(jié)中起主要作用，局限性日益凸顯。通過(guò)將遺傳工程改造的光敏感蛋白和光刺激有機(jī)組合起來(lái)，光遺傳學(xué)能對(duì)復(fù)雜生物體中的特定事件，實(shí)現(xiàn)高度細(xì)胞選擇性及時(shí)空分辨率的控制。因此我們利用這項(xiàng)技術(shù)不但可將PVN中的谷氨酸能神經(jīng)元分選出來(lái)，還可通過(guò)細(xì)胞類型特異性的干預(yù)，來(lái)明確其在高血壓調(diào)節(jié)中的作用，同時(shí)結(jié)合相應(yīng)的讀出系統(tǒng)（READOUTSYSTEM）來(lái)探討內(nèi)在的自主神經(jīng)及神經(jīng)內(nèi)分泌機(jī)制。材料和方法離體實(shí)驗(yàn)部分通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的克隆技術(shù)來(lái)包裝CAMK?、騿?dòng)子控制的攜帶有CHR2ENPHR30YFP融合基因的慢病毒載體，將所攜帶光敏基因特異性轉(zhuǎn)染并表達(dá)在PVN谷氨酸能神經(jīng)元中。利用立體定向注射技術(shù)將病毒載體導(dǎo)入SD、WKY及SHR大鼠的PVN中（坐標(biāo)前囟點(diǎn)后15MM，左右旁開035MM，深78MM）。注射完成2星期后，用振動(dòng)切機(jī)在冰浴過(guò)的切片液中制備250ΜM層厚的急性活體腦片，在持續(xù)95％O25CO2通氣狀態(tài)下，經(jīng)34℃ACSF孵育及室溫ACSF（2326℃）平衡后，移至正置顯微鏡下的腦片記錄槽中，并用ACSF持續(xù)灌注。通過(guò)正置顯微鏡的YFP熒光濾片觀察由CHR2ENPHR30YFP融合蛋白所形成的熒光，來(lái)判斷是否有病毒載體所攜帶基因表達(dá)，同時(shí)觀察表達(dá)位置是否在PVN；并在40倍鏡下，觀察融合蛋白的膜性表達(dá)情況，用CCD拍攝圖片。在全細(xì)胞記錄模式下，通過(guò)DG4高速光源切換系統(tǒng)發(fā)出的藍(lán)光或黃光來(lái)分別刺激表達(dá)有CHR2或ENPHR30的神經(jīng)元，來(lái)觀察不同的光電反應(yīng)。在用標(biāo)準(zhǔn)免疫組化技術(shù)制備得的腦片上，分別應(yīng)用興奮性神經(jīng)元標(biāo)志抗體CAMKΑⅡ及抑制性神經(jīng)元標(biāo)志抗體GAD67，通過(guò)觀察以上抗體所攜帶熒光與CHR2ENPHR30YFP融合蛋白所形成的熒光共染情況，藉此來(lái)判斷光敏基因細(xì)胞表達(dá)的特異性。在體實(shí)驗(yàn)部分采用經(jīng)套管注射病毒的方法并將套管及基座系統(tǒng)用牙科水泥固定在顱骨表面，待病毒注射完畢，用套管內(nèi)芯插入套管并固定，以維持套管通暢，用作光神經(jīng)界面中光纖的接入及固定。為配合光神經(jīng)界面在清醒自由活動(dòng)的狀態(tài)下對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行刺激的特點(diǎn)，利用DSI遙測(cè)記錄系統(tǒng)來(lái)記錄血壓和心電圖變化，并首創(chuàng)了竇匯采血法來(lái)獲得檢測(cè)反映神經(jīng)內(nèi)分泌指標(biāo)的血樣。結(jié)果在采用經(jīng)內(nèi)管病毒載體注射法1014天后的急性活體腦片上，清楚地觀察到由CHR2ENPHR30YFP融合蛋白表達(dá)所形成的熒光，準(zhǔn)確地表達(dá)在PVN，并在40倍鏡下可觀察到光敏基因特征性的膜性表達(dá)。通過(guò)腦片全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，對(duì)表達(dá)有CHR2ENPHR30的谷氨酸能神經(jīng)元給予藍(lán)光黃光光刺激，觀察到足夠產(chǎn)生（CHR2）或抑制（ENPHR30）動(dòng)作電位產(chǎn)生的光電流。免疫組化的結(jié)果顯示由CHR2ENPHR30YFP融合蛋白表達(dá)所產(chǎn)生的熒光可與興奮性神經(jīng)元標(biāo)志抗體CAMK?、虻臒晒馔耆丿B，而不與抑制性神經(jīng)元標(biāo)志抗體GAD67的熒光重疊，提示在CAMK?、騿?dòng)子控制下，慢病毒載可將光敏基因特異性的表達(dá)于谷氨酸能神經(jīng)元。在體實(shí)驗(yàn)研究中，我們對(duì)表達(dá)有ENPHR30的自發(fā)高血壓大鼠給予5935NM波長(zhǎng)的黃光刺激，觀察到平均動(dòng)脈壓下降20MMHG左右，并持續(xù)約20分鐘。結(jié)論我們成功的搭建了一整套用于研究下丘腦室旁核谷氨酸能神經(jīng)元對(duì)血壓調(diào)節(jié)作用的光遺傳學(xué)平臺(tái)，其中包括可將光敏基因?qū)胩禺愋陨窠?jīng)元的病毒載體包裝系統(tǒng)；將刺激光源導(dǎo)入表達(dá)有光敏基因的目標(biāo)核團(tuán)的光神經(jīng)界面體系；與光神經(jīng)界面在體實(shí)驗(yàn)相匹配的包含遙測(cè)式血壓記錄及竇匯采血法的讀出系統(tǒng)（READOUTSYSTEM）。在對(duì)表達(dá)有ENPHR30的自發(fā)高血壓大鼠給予5935NM波長(zhǎng)的黃光刺激，我們觀察到血壓下降，初步證實(shí)了下丘腦室旁核谷氨酸能神經(jīng)元對(duì)血壓調(diào)節(jié)的影響，進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)將最終明確PVN谷氨酸神經(jīng)元對(duì)血壓調(diào)節(jié)的作用及內(nèi)在機(jī)制。