簡介：I學校代碼10564學號2014307310分類號Q812815密級碩士學位論文小鼠脾貼壁型細胞分離傳代培養(yǎng)和生物學特性研究孔子杰第一指導教師第一指導教師陳瑞愛教授第二指導教師第二指導教師學院名稱獸醫(yī)學院專業(yè)學位類別專業(yè)學位類別獸醫(yī)碩士領(lǐng)域域無答辯委員會主席答辯委員會主席王貴平研究員中國廣州2016年6月華南農(nóng)業(yè)大學華南農(nóng)業(yè)大學學位論文原創(chuàng)性聲明學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文是本人在導師的指導下獨立進行研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。作者簽名日期________________學位論文版權(quán)使用授權(quán)書學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學位論文作者完全了解學校有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，即研究生在校攻讀學位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬華南農(nóng)業(yè)大學。學校有權(quán)保存并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子版，允許學位論文被查閱或在校園網(wǎng)上發(fā)布并供校內(nèi)師生和與學校有共享協(xié)議的單位瀏覽（除在保密期內(nèi)的涉密論文外）；學?？梢怨紝W位論文的全部或部分內(nèi)容，可以允許采用影印、縮印或其它復制手段保存、匯編學位論文。本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。作者簽名日期________________導師簽名日期_______________學位論文提交同意書學位論文提交同意書本學位論文符合國家和華南農(nóng)業(yè)大學關(guān)于研究生學位論文的相關(guān)規(guī)定，達到學位授予要求，同意提交。導師簽名日期學科帶頭人簽名日期

簡介：目’錄摘要，IABSTRACT111第1章文獻綜述，111納米技術(shù)概述，112納米粒子的基本性質(zhì)213納米顆粒的制備，414納米顆粒的表面改性和包覆修飾615磁性納米粒子在生物醫(yī)學領(lǐng)域的應用研究916納米顆粒的生物安全性及其影響因素研究，1417本論文研究的目的、意義及主要內(nèi)容，15第2章磁性納米粒子的制備、修飾和表征1721引言，1722材料與方法、1723結(jié)果和討論1824本章小結(jié)22第3章氧化硅包裹的磁性納米粒子在質(zhì)粒DNA分離中的應用，2331引言，，，，2332材料與方法，，，，，2433結(jié)果和討論‘二，，，，，2634本章小結(jié)，，，，，、37第4章氧化硅包裹的磁性納米粒子純化質(zhì)粒DNA的下游應用，3841引言一‘”“，3842材料與方法，3843結(jié)果和討論‘‘”，”二3944本章小結(jié)‘，，”45第5章磁性納米粒子對細胞的毒性651弓，言，二，，4652材料和方法，，“”””，465，3結(jié)果和討論，二，，，，4854本章小結(jié)，，、51第6章全文總結(jié)，，，52參考文獻，，53致謝，，，，63在校期間發(fā)表論文及參加課題情況”“、西南大學碩士學位論文里膽口皿里國口里國坦用量等對質(zhì)粒DNA純度和收率的影響。結(jié)果表明當鹽酸呱濃度為4MOUL，溶液C的PH值為45，整個操作在室溫完成時，能夠從15而過夜培養(yǎng)的大腸桿菌LB培養(yǎng)液中純化得到13陀的高純度質(zhì)粒DNA，整個過程不需接觸酚、氯仿等有機試劑，在20而N內(nèi)完成，操作簡便，無須分離柱，避免了離心和真空操作，重復性好。隨后，將上述提純的質(zhì)粒DNA用于分子生物學下游操作，進行了限制酶切、轉(zhuǎn)化萬COLIDHSQ感受態(tài)細胞再次抽提質(zhì)粒、測序等檢測，以評價基于氧化硅包裹的磁性納米粒子的純化方法。結(jié)果表明采用氧化硅包裹的磁性納米粒子抽提得到的質(zhì)粒DNA，完全達到了分子生物學常規(guī)實驗的要求，本文建立的質(zhì)粒DNA提取方法穩(wěn)定可靠。最后，利用SRB法檢測了自制的磁性納米粒子對A549人肺癌腫瘤細胞的生長抑制作用，同時將用氧化硅包裹的磁性納米粒子抽提的質(zhì)粒DNAPGEX4T一EGFP轉(zhuǎn)化大腸桿菌，擴增后細菌培養(yǎng)液表達強烈熒光。結(jié)果表明自制的磁性納米粒子對A549人肺癌腫瘤細胞無抑制作用，對質(zhì)粒DNA的生理活性無不良影響，具有良好的生物相容性。關(guān)鍵詞氧化硅磁性納米粒子質(zhì)粒DNA純化細胞毒性

簡介：學校代碼學校代碼10571學號學號2013050182密級密級公開公開假基因假基因PTENP1PTENP1對鼻咽癌對鼻咽癌細胞生物學功能的影響及作用機制細胞生物學功能的影響及作用機制THEINFLUENCEOFPSEUDOGENESPTENP1ONNASOPHARYNGEALCARCINOMACELLBIOLOGICALFUNCTIONANDITSMECHANISM學科門學科門類生物學學科、專業(yè)學科、專業(yè)生物化學與分子生物學研究方研究方向MICRORNA和腫瘤年級年級二○一三級研究生姓研究生姓名代青松導師姓導師姓名梁統(tǒng)起止日起止日期20139～20165二○一六一六年五月年五月目錄中文摘要中文摘要1英文摘要英文摘要21前言前言411研究背景412研究目的613研究內(nèi)容62材料材料、方法與方法與721實驗材料722實驗方法93結(jié)果結(jié)果234討論討論345結(jié)論結(jié)論36參考文獻參考文獻37綜述綜述42綜述參考文獻綜述參考文獻54致謝致謝59附錄附錄I縮寫詞中英文對照縮寫詞中英文對照60附錄附錄IIPCR引物序列引物序列61附錄附錄IIII在讀碩士期間的科研情況在讀碩士期間的科研情況62I

簡介：密級分類號單位代碼學號中國中醫(yī)科學院2013級博士研究生學位論文前列消瘕湯對前列腺癌DU145細胞生物學行為影響THESTUDYONTHEBIOLOGICALBEHAVIOROFPROSTATECANCERDU145CELLSDEALINGWITHQIANLIEXIAOZHENGDECOTION申請人專業(yè)研究方向?qū)熞鼘W來中醫(yī)外科學中醫(yī)藥治療泌尿外科疾病中醫(yī)藥治療前列腺疾病張亞強主任醫(yī)師中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院2016年3月北京學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師指導下，進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本學位論文的研究成果不包含任何他人創(chuàng)作的、己公開發(fā)表或者沒有公開發(fā)表的作品的內(nèi)容。對本論文所涉及的研究工作做出貢獻的其他個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本學位論文原創(chuàng)性聲明的法律責任由本人承擔。論文作者簽名主墜導師簽名側(cè)CB￡占年廠月F衛(wèi)日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解中國中醫(yī)科學院研究生院有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權(quán)保留送交論文的復印件，允許論文被查閱和借閱；學?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文。論文作者簽名墜厶，易年歹月L乙日

簡介：分類號密級單位代碼學號洳≯J～嚎博士學位論文中文論文題目1033510617032≥筆3C論文題目￡壘塾QG皇壁墜IQQGYQ￡堡壘璺璺磐Q叢I塑塾XOFBLOODCLAM№脅，℃口艘刀儺口ANDLMMUN0109LCALCNARACTENSNCSOIHOSTBLOODCELLSPATHOGENBIOL02YOFMASSMORTIALI鯉OF1●1●，N●F■1●●●●D100DCIAM』纓ZFF口，℃口聊以DS口ANNLMMUN0109LCALCHARACTERISTICSOFHOSTBLOODCEUSAUTHOR’SSIGNATU聯(lián)洳批SUPEN7LS0R7SSLGNATUR一●●●ETEMALF沁VIEWERS姓名3驅(qū)簽望焦工回EXAMININGCO刪ILITTEECHAI印ERSONEXAMINMGCO刪NIDATEOFORALDEFENCE董謝

簡介：福建醫(yī)科大學碩士學位論文DEPDC7基因在肝癌細胞中的表達及其生物學作用姓名王曉江申請學位級別碩士專業(yè)生物化學與分子生物學指導教師林德馨廖之君2011035細胞膜上，胞質(zhì)內(nèi)也可見。4生長曲線圖顯示，肝癌細胞生長較快，在72H內(nèi)達到對數(shù)生長期，轉(zhuǎn)染PIRES2EGFPDEPDC7質(zhì)粒后的肝癌細胞增殖較慢。5上調(diào)DEPDC7基因的表達，細胞增殖率受抑制，但未見有細胞凋亡現(xiàn)象。6上調(diào)DEPDC7基因的表達，對腫瘤的侵襲起抑制作用，并且能夠使腫瘤侵襲相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶類基因的表達量發(fā)生變化。結(jié)論結(jié)論1DEPDC7基因在正常肝細胞中高表達，肝癌細胞中表達下調(diào)，其表達的蛋白主要定位于細胞膜上，胞質(zhì)內(nèi)也可見。2上調(diào)DEPDC7基因表達后不引起細胞的凋亡，能抑制細胞增殖率和肝癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移，MMP9基因表達量降低，TIMP1、TIMP3基因表達量增高。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞基因芯片，生物信息學，肝細胞，腫瘤細胞，DEP結(jié)構(gòu)域

簡介：生物相容性是生物材料研究中的關(guān)鍵問題，而細胞在材料表面的粘附和生長情況是生物相容性評價的重要內(nèi)容。通常認為生物材料植入體內(nèi)或進行體外實驗時，首先在材料表面發(fā)生蛋白質(zhì)的吸附，然后發(fā)生細胞在材料表面的粘附和生長。而基因表達譜芯片和PCR芯片技術(shù)能幫助人們了解細胞內(nèi)基因的表達情況，深入研究與細胞粘附和生長相關(guān)的生物學通路，從分子水平解釋材料與細胞之間的相互作用。本論文的目的是1利用基因表達譜芯片研究殼聚糖膜和膠原蛋白殼聚糖膜表面PC12細胞的基因表達情況，并與本課題組前期的吸附蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)組學結(jié)果進行聯(lián)合分析，研究材料表面吸附蛋白質(zhì)對細胞基因組學的影響2利用信號通路PCR芯片研究無涂層氮化鈦涂層鎳鈦合金對內(nèi)皮細胞相關(guān)通路中基因表達情況，對本課題組前期發(fā)現(xiàn)的細胞粘附和生長過程中重要生物學信號通路進行驗證，研究材料表面吸附蛋白質(zhì)對細胞粘附的影響，綜合上述兩部分結(jié)果，對細胞粘附和生長的重要生物學信號通路進行研究，闡述材料表面吸附蛋白質(zhì)介導細胞粘附和生長的分子機理。本論文的具體工作如下1利用勻膠法制備殼聚糖膜和膠原蛋白殼聚糖膜，利用吖啶橙染色法和CCK8實驗分別測定PC12細胞在這兩種材料和正常對照組表面的細胞形態(tài)和存活率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在4H和24H兩個時間點，膠原蛋白殼聚糖膜更有利于PC12細胞的粘附和形態(tài)鋪展兩種材料表面培養(yǎng)4H時細胞存活率差異較小，在24H時膠原蛋白殼聚糖膜表面細胞存活率明顯大于殼聚糖膜組，說明與殼聚糖膜相比，膠原蛋白殼聚糖膜促進PC12細胞的粘附和生長。2利用基因表達譜芯片研究殼聚糖膜和膠原蛋白殼聚糖膜表面PC12細胞生長4H和24H后基因表達情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)殼聚糖膜組差異表達基因數(shù)量較多，通過RTPCR實驗檢驗PAK1、ACTN1、BCAR1、AKT1四個基因的表達情況與基因表達譜芯片實驗結(jié)果一致。此外，利用信號通路PCR芯片分別檢測無涂層氮化鈦涂層鎳鈦合金表面人臍靜脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)4H和24H后，“TGFΒBMP信號通路”和“細胞骨架調(diào)控信號通路”中相關(guān)基因的表達，結(jié)果表明，在這兩條信號通路中氮化鈦涂層鎳鈦合金表面內(nèi)皮細胞發(fā)生差異表達的基因更多。3利用DAVID功能注釋工具對殼聚糖膜和膠原蛋白殼聚糖膜表面PC12細胞生長4H和24H后的差異表達基因進行GO功能分類分析，結(jié)果表明兩種材料主要參與生物學過程為細胞過程、代謝相關(guān)過程、細胞分化和發(fā)育等分子功能主要包括核苷酸、DNA、蛋白質(zhì)等相關(guān)的分子功能等細胞組分主要包括細胞內(nèi)相關(guān)的細胞組分功能、細胞膜和細胞外相關(guān)的功能等。差異表達基因的生物學信號通路分析表明，材料與細胞作用后，主要影響細胞的粘著斑信號通路、肌動蛋白細胞骨架調(diào)控信號通路、胰島素信號通路、EGFR1信號通路。與本課題組前期吸附蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)組學分析結(jié)果進行聯(lián)合分析，發(fā)現(xiàn)殼聚糖膜和膠原蛋白殼聚糖膜表面吸附的血清蛋白質(zhì)作為配體與細胞表面受體結(jié)合后，通過細胞骨架跨膜連接將細胞外信號傳遞進入細胞內(nèi)，激活粘著斑、MAPK、PI3K等信號通路，參與粘著斑和肌動蛋白細胞骨架的組裝等過程，通過以上生物學信號通路相互作用，膠原蛋白殼聚糖膜更有利于PC12細胞的粘附和生長。4對無涂層氮化鈦涂層鎳鈦合金表面人臍靜脈內(nèi)皮細胞生長4H和24H后的差異表達基因進行生物信息學分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)“TGFΒBMP信號通路”和“細胞骨架調(diào)控信號通路”兩條信號通路發(fā)生激活。與本課題組前期蛋白質(zhì)組學和基因組學結(jié)果聯(lián)合分析，發(fā)現(xiàn)在細胞粘附階段，通過激活TGFΒ信號通路增加整聯(lián)蛋白ΑΒ亞基基因的表達，或通過含RGD序列的蛋白質(zhì)與活化的整聯(lián)蛋白結(jié)合，激活粘著斑通路和肌動蛋白細胞骨架調(diào)控信號通路，進而促進細胞的粘附在細胞生長和增殖階段，氮化鈦涂層鎳鈦合金可有效減少無涂層鎳鈦合金的鎳離子溶出，激活肌動蛋白細胞骨架調(diào)控信號通路、粘著斑信號通路、能量代謝相關(guān)信號通路、炎癥反應信號通路，抑制細胞凋亡信號通路，改善細胞的功能。綜合上述材料與細胞的相互作用研究結(jié)果，發(fā)現(xiàn)粘著斑信號通路、細胞骨架調(diào)控信號通路等是影響細胞在材料表面的粘附和生長的重要信號通路。

簡介：目的通過對醫(yī)用多孔鉭支架材料的物理特性、軟骨細胞增殖、細胞周期、細胞凋亡、軟骨功能活性以及細胞因子分泌功能的影響進行研究，探討多孔鉭材料作為軟骨組織工程支架材料修復軟骨缺損，恢復軟骨組織的生理結(jié)構(gòu)與功能的可行性，為進一步體內(nèi)實驗以及臨床應用提供實驗依據(jù)。方法1掃描電鏡觀察多孔鉭材料的形態(tài)特征。取三周SD大鼠四肢關(guān)節(jié)軟骨細胞進行分離、培養(yǎng)及鑒定；根據(jù)國標ISO109935ISO1099312，以F12培養(yǎng)基為浸提介質(zhì)分別制備多孔鉭材料浸提液和多孔鈦材料浸提液，以不同濃度（100％、50、25）多孔鉭浸提液培養(yǎng)的軟骨細胞作為實驗組，多孔鈦浸提液培養(yǎng)和完全培養(yǎng)基培養(yǎng)的軟骨細胞分別作為對照組，通過倒置相差顯微鏡及MTT法觀察材料浸提液對軟骨細胞生長、增殖的影響，檢測多孔鉭材料的細胞毒性。2多孔鉭材料與軟骨細胞進行體外復合培養(yǎng)，經(jīng)倒置相差顯微鏡、掃描電鏡、透射電鏡等觀察軟骨細胞在材料上的形態(tài)、黏附、生長及增殖。3流式細胞儀檢測多孔鉭培養(yǎng)的軟骨細胞的細胞周期及凋亡。4二甲基亞甲基藍比色法定量檢測多孔鉭材料對軟骨細胞合成糖胺多糖的影響。5實時熒光定量PCR檢測多孔鉭材料對軟骨性細胞因子MMP13、AGGRECAN和II型膠原MRNA表達的影響。結(jié)果1多孔鉭形態(tài)特征多孔鉭外觀灰色、光亮，材料表面及斷面均可見蜂窩狀孔隙，孔隙分布均勻且呈針尖大小。掃描電鏡觀察下多孔鉭材料的微孔直徑約400～600ΜM（500），內(nèi)部孔隙約50～200ΜM（1000）且相互連通，多孔鉭材料孔隙連通性好且分布較均勻，結(jié)構(gòu)類似于松質(zhì)骨構(gòu)架。2體外細胞毒性檢測隨著培養(yǎng)時間的延長，各濃度多孔鉭浸提液組、多孔鈦浸提液組及完全培養(yǎng)基組的細胞生長無明顯差異，軟骨細胞形態(tài)均正常，貼壁增殖良好，相同時間點各濃度多孔鉭浸提液組和兩組對照組的細胞增殖活力差異均無統(tǒng)計學意義（P＞005）。3多孔鉭材料與軟骨細胞復合培養(yǎng)倒置相差顯微鏡下可見多孔鉭材料的邊緣及培養(yǎng)板底部黏附大量軟骨細胞；掃描電鏡可見軟骨細胞在多孔鉭表面及孔隙內(nèi)能夠良好的黏附、伸展及增殖，細胞形態(tài)多樣，細胞間可相互連接，且能夠正常分泌細胞外基質(zhì)；透射電鏡顯示軟骨細胞內(nèi)的超微結(jié)構(gòu)大小及形態(tài)均正常，無明顯改變。4軟骨細胞周期及細胞凋亡檢測多孔鉭培養(yǎng)組及兩組對照組細胞均為正常二倍體細胞，三組細胞周期分布相似；多孔鉭組及對照組的細胞凋亡率及壞死細胞率差異均無統(tǒng)計學意義（P＞005）。5軟骨細胞糖胺多糖定量檢測細胞在多孔鉭材料上能夠保持軟骨細胞特異表型，且分泌GAG。6軟骨細胞分泌功能檢測實時熒光定量PCR檢測多孔鉭材料對MMP13和II型膠原MRNA的表達與完全培養(yǎng)基對照組差異無統(tǒng)計學意義（P＞005）；AGGRECANMRNA的表達上調(diào)，其差異有統(tǒng)計學意義（P＜005）。結(jié)論1軟骨細胞在多孔鉭浸提液中培養(yǎng)生長、增殖狀態(tài)良好，說明多孔鉭材料對軟骨細胞無毒性。2多孔鉭材料與軟骨細胞復合培養(yǎng)，細胞在其表面與孔隙內(nèi)黏附、生長及增殖良好，能夠保持細胞特異表型且正常分泌糖胺多糖，說明多孔鉭具有良好的生物相容性。3軟骨細胞在與多孔鉭材料復合培養(yǎng)后，仍然均為二倍體細胞，且S期細胞數(shù)量增多，同時材料對細胞凋亡無促進作用，說明多孔鉭材料對軟骨細胞周期及凋亡無明顯影響，具有良好的細胞相容性。4多孔鉭材料對軟骨細胞無明顯的炎癥反應，可促進細胞正常分泌II型膠原，同時AGGRECANMRNA的表達上調(diào)，說明多孔鉭具有良好的生物相容性。

簡介：目的通過比較皮肌炎DERMATOMYOSITIS，DM患者與正常人骨髓間充質(zhì)干細胞BONEMARROWDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLS，BMSCS的生物學性狀，探討DM患者BMSCS是否存在缺陷或變異，能否應用于自體移植，抑或DM本身就是一種干細胞疾病，與DM的發(fā)病相關(guān)，從而為DM患者BMSCS自體移植的臨床應用奠定基礎(chǔ)。方法1分別采集5例DM患者與正常入骨髓各5ML8ML，用密度梯度離心及貼壁法對細胞進行分離、培養(yǎng)、傳代，流式細胞儀鑒定P3代BMSCS的表面標志。2兩組人群BMSCS增殖能力的比較MTT法測定P3、P6代BMSCS生長曲線，計算細胞群體倍增時間；流式細胞術(shù)測定細胞周期，計算增殖指數(shù)；實時熒光定量PCRREALTIMEPOLYMERASECHAINREACTION，RTPCR測定端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶HUMANTELOMERASEREVERSETRANASE，HTERT的表達。3兩組人群BMSCS向血管內(nèi)皮細胞分化能力的比較將P3代細胞分別在內(nèi)皮細胞誘導培養(yǎng)液HDMEM培養(yǎng)液10％胎牛血清100UML青霉素100PGML鏈霉素10NGMLVEGF5NGMLBFGF中培養(yǎng)，并將LDMEM完全培養(yǎng)液中培養(yǎng)的正常人BMSCS做為陰性對照，倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀況及形態(tài)，14D時免疫組織化學檢測Ⅷ因子的表達情況，流式細胞儀檢測CD34、血管內(nèi)皮細胞生長因子受體KINASEDOMAINCONTEININGRECEPT，KDR表達的情況，從而鑒定BMSCS原性內(nèi)皮細胞。結(jié)果1兩組人群均可成功分離、培養(yǎng)得到BMSCS，在P3代時細胞形態(tài)學上未見明顯差異，細胞貼壁后形態(tài)均一，長梭形或多角形，呈平行、旋渦狀、輻射狀排列。經(jīng)流式細胞儀檢測，CD34、CD45陰性，CD44陽性，CD71弱陽性，鑒定為間充質(zhì)干細胞。2兩組人群BMSCS增殖能力的比較正常對照組P3代時細胞群體倍增時間為473±031D，DM組為476±032D，兩組差異無統(tǒng)計學意義，P＞005P6代時正常對照組細胞群體倍增時間為574±035D，DM組為614±034D，DM組BMSCS群體倍增時間長于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義P＜0001。正常對照組P3代BMSCS增殖指數(shù)為1787±205％，DM組為1712±200％，兩組差異無統(tǒng)計學意義P＞005；P6代正常對照組BMSCS增殖指數(shù)為1073±178％，DM組為596±216％，DM組增殖指數(shù)小于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義P＜001。正常對照組P6代BMSCSHTERT表達量為1063±149，DM組為645±204，DM患者HTERT表達水平較正常對照組低，差異具有統(tǒng)計學意義P＜001。3兩組細胞均在誘導培養(yǎng)14D后免疫組化檢測Ⅷ因子的表達為陽性，流式細胞儀檢測KDR、CD34表達為陽性，DM組與對照組細胞表達CD34相比，差異無統(tǒng)計學意義P＞005。DM組與對照組細胞相比表達KDR較少，差異有統(tǒng)計學意義P＜005。這可能與樣本量較少有關(guān)，也可能是由于DM本身BMSCS異常所致。結(jié)論1兩組人群均可成功分離、培養(yǎng)得到BMSCS，且DM患者與正常對照組細胞形態(tài)無明顯差異；2DM患者BMSCS在不同程度上存在缺陷；3兩組BMSCS體外均可誘導成類血管內(nèi)皮細胞，但誘導成的類血管內(nèi)皮細胞間存在一定差異；4DM患者BMSCS不適合自體移植，解決途徑可以考慮異體BMSCS移植。

簡介：畜禽遺傳資源一直以來就是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的基石，是人們生活的保障，它影響著社會與經(jīng)濟的發(fā)展，家養(yǎng)動物遺傳資源理應受到重大的保護。干細胞所具有的自我更新和多向分化能力，為畜禽遺傳資源的保護開辟了新思路。由于間充質(zhì)干細胞所具有的優(yōu)點，在遺傳資源保護與利用、組織工程學等方面得到廣泛認可。本實驗以肉雞脂肪和綿羊羊膜來源的間充質(zhì)干細胞為實驗對象，進行了細胞分離培養(yǎng)、生物學特性、誘導分化及移植治療小鼠肝損傷的研究，得到以下結(jié)果1利用膠原酶Ⅰ分離得到肉雞ADSCS，并在體外培養(yǎng)37代，主要呈現(xiàn)長梭形經(jīng)RTPCR和免疫組化檢測，細胞表達CD29、CD44、CD71和CD73，而不表達CD31，分離培養(yǎng)的確實是脂肪來源的MSCS。通過流式細胞儀分析，CD29、CD44、CD71和CD73在肉雞ADSCS中高表達。ADSCS經(jīng)歷潛伏期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期，生長曲線呈典型的“S”形，符合細胞在體外增殖的一般規(guī)律。群體倍增時間和克隆形成能力表明隨著代次提高，細胞增殖能力減弱。通過細胞周期分析，發(fā)現(xiàn)G0G1期的ADSCS所占的比率，隨著傳代次數(shù)的提升而提升，而S期的細胞比率逐漸減小。通過對ADSCS進行了誘導分化，分別在不同誘導條件下分化為成骨細胞、脂肪細胞和肝樣細胞，經(jīng)過特異性染色、RTPCR和免疫組織化學的證明，誘導形成的確實是目的細胞。驗證了ADSCS的多向分化能力。2利用膠原酶Ⅱ和胰蛋白酶分離得到綿羊AMSCS，并在體外培養(yǎng)25代，主要呈現(xiàn)梭狀經(jīng)RTPCR和免疫組化檢測，細胞表達CD29、OCT4、CD71、CD44、REX1、CD90和CD73，分離培養(yǎng)的確實是羊膜來源的MSCS。通過流式細胞術(shù)分析，OCT4、CD44、CD73和CD90在綿羊AMSCS中高表達。AMSCS經(jīng)歷潛伏期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期，生長曲線呈典型的“S”形，符合細胞在體外增殖的一般規(guī)律。群體倍增時間和克隆形成能力表明隨著代次提高，細胞增殖能力減弱。在體外對綿羊AMSCS進行誘導分化研究，在適宜的體外條件下，通過特異性染色、RTPCR和免疫組織化學證明，綿羊AMSCS能分化成為成骨細胞、脂肪細胞和肝樣細胞，驗證了AMSCS的多向分化潛能。3利用順鉑損傷小鼠肝臟，發(fā)現(xiàn)肝質(zhì)地變硬，形態(tài)改變，有散在出血點產(chǎn)生查看切片發(fā)現(xiàn)其正常構(gòu)造被損害，纖維組織出現(xiàn)增生血清學發(fā)現(xiàn)肝指標均表現(xiàn)明顯的升高。將培養(yǎng)的ADSCS用熒光標記，經(jīng)尾靜脈注射到小鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)ADSCS能定植到肝小葉中央靜脈周圍和肝小葉的結(jié)締組織中，組織切片觀察和血清學分析表明，ADSCS對肝損傷有一定的治療效果。綜上所述，本實驗成功分離培養(yǎng)了肉雞ADSCS和綿羊AMSCS，進行了生物學特性和誘導分化研究細胞移植治療肝損傷研究表明ADSCS能一定程度修復受損的肝。所示數(shù)據(jù)可得干細胞的生物學特點，對畜禽種質(zhì)資源的保護和利用具有重要意義，并為MSCS在組織工程學和再生醫(yī)學中應用提供實驗依據(jù)。

簡介：本課題探討臍帶血中多潛能成體祖細胞MAPCS的分離方法，優(yōu)化MAPCS的培養(yǎng)條件。在此基礎(chǔ)上研究MAPCS的生物學特性以及臍帶血MAPCS的神經(jīng)分化潛能，為今后將其應用于臨床提供相關(guān)的基礎(chǔ)理論和方法。一、低血清條件下影響臍帶血MAPCS分離的相關(guān)因素利用足月妊娠健康產(chǎn)婦胎兒新鮮臍帶血，分離臍帶血單個核細胞MNC，在低血清條件下進行體外培養(yǎng)。通過比較不同培養(yǎng)基、不同接種密度以及不同的首次換液時間對臍帶血MAPCS生長的影響，研究低血清條件下從臍帶血中分離MAPC的相關(guān)影響因素，探索優(yōu)化培養(yǎng)條件，建立臍帶血MAPCS的分離培養(yǎng)體系。結(jié)果表明，在低血清條件下，DMEMF12培養(yǎng)基更適合于臍帶血MAPC生長；1106CM2是原代培養(yǎng)的適宜接種密度，原代第72小時首次換液為最佳換液時問。臍帶血的質(zhì)量可能是影響分離效果的因素之一。利用所建立的人臍帶血MAPCS的體外優(yōu)化培養(yǎng)條件培養(yǎng)的細胞可于超過70％的臍帶血中分離出MAPCS并在體外持續(xù)擴增，并具有良好的分化潛能。二、MAPCS的生物學特性以及臍帶血MAPCS的神經(jīng)分化潛能利用第一部分所建立的分離和培養(yǎng)體系，從新鮮臍帶血中分離臍帶血MAPCS，觀察細胞生長特點、生長曲線、細胞周期、細胞表型分析、體外誘導分化實驗以及檢測其細胞因子的表達等。結(jié)果表明，73％的臍帶血標本可以分離出MAPCS，細胞形態(tài)為長梭狀，類似于成纖維細胞，90％以上細胞處于G0G1期，可以傳至810代以上而無形態(tài)學變化。細胞表面標志檢測發(fā)現(xiàn)MAPCS高表達常用于識別人間充質(zhì)干細胞的細胞標記CD29、CD44、CD90以及CD73、CD105等，低表達CD144、VWF和CD49D，不表達造血細胞標記CD34，CD45，CD14，CD3、HLADR、內(nèi)皮細胞標記CD31和整合素CD11A，具有與臍帶血來源MSC和USSCS類似的細胞免疫表型特征，而與PSC3445細胞存在明顯差別。MAPCS在一定的誘導分化劑的作用下可向神經(jīng)細胞、成骨和脂肪細胞分化，并能表達IL6、SCF、FL和GCSF等細胞因子。結(jié)論本研究探討了低血清條件下從臍帶血中分離MAPC的相關(guān)影響因素，通過優(yōu)化培養(yǎng)條件，建立了臍帶血MAPCS的分離培養(yǎng)體系。并利用這一體系從臍血中分離培養(yǎng)出MAPCS，研究了其生物學特性與多向分化潛能特別是神經(jīng)分化潛能，為臍帶血MAPCS在組織工程方面的應用作出了新的探索。

簡介：隨著納米材料適用范圍的擴大，納米材料引發(fā)了眾多的環(huán)境問題，可能危及人類健康，因而有必要對其體外生物學效應進行研究。本論文對采用溶膠凝膠法制備的TIO2納米粒子，水熱合成法制備的TIO2納米棒和納米管用XRD和TEM進行了表征。體外培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細胞，MTT比色法評價不同形態(tài)、不同粒徑的納米TIO2TIO2納米顆粒、納米棒和納米管的細胞毒性等級，考察不同的染毒時間24H，48H及納米TIO2染毒濃度0，2，20，60，100ΜGML對巨噬細胞形態(tài)、毒性等級、生化指標的影響。測定細胞上清液中丙二醛MDA含量，乳酸脫氫酶LDH的活力，還原型谷胱甘肽GSH的含量。探討了不同的納米TIO2對巨噬細胞產(chǎn)生的炎癥反應，細胞膜的損傷程度及氧化應激水平。研究表明形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)，TIO2納米粒子和TIO2納米棒對巨噬細胞形態(tài)有一定的影響，且均能被巨噬細胞吞噬。而TIO2納米管對巨噬細胞形態(tài)影響不如前二者明顯，且不能被巨噬細胞吞噬。MTT實驗結(jié)果表明，染毒24H后，相對于對照組，TIO2納米粒子1和TIO2納米棒2對巨噬細胞表現(xiàn)有明顯的毒性，TIO2納米顆粒2表現(xiàn)無毒性，其他均表現(xiàn)低毒，染毒48H后，兩種TIO2納米粒子和TIO2納米棒均有明顯的毒性，兩種TIO2納米管均表現(xiàn)低毒性。細胞上清液的MDA、LDH、GSH含量檢測結(jié)果表明，不同的納米TIO2對細胞上清液指標影響均表現(xiàn)各異，有一定的濃度依賴性。表明細胞炎癥反應、膜損傷程度及氧化應激水平的高低是決定納米TIO2對巨噬細胞產(chǎn)生毒性的主要影響因素。

簡介：點擊查看更多七氟烷對宮頸癌細胞生物學行為的影響及機制研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：研究背景冠狀動脈硬化性心臟病CONARYATHEROSCLEROTICHEARTDISEASE，CHD作為心血管病中發(fā)病率與死亡率均較高的心血管病之一，嚴重危害人們身體健康，而且這些年來其發(fā)病率在我國有顯著增加的趨勢，成為一個嚴重的社會問題。冠心病的發(fā)生發(fā)展過程受諸多因素影響，其中由于動脈粥樣硬化ATHEROSCLEROSISAS斑塊形成造成的動脈血管壁增厚、硬化、鈣化、斑塊破裂、血栓形成，最終導致管腔狹窄甚至閉塞，是以冠心病為代表的動脈粥樣硬化性疾病的發(fā)病基礎(chǔ)。以經(jīng)皮冠狀動脈介入術(shù)PERCUTANEOUSCONARYINTERVENTIONPCI為代表的心血管介入技術(shù)給冠心病的臨床治療帶來了革命性的變化，挽救了無數(shù)人的生命，成為心血管臨床領(lǐng)域最有效的方法之一，但PCI術(shù)后再狹窄由于其發(fā)病率高，處理困難，因而嚴重影響了PCI的遠期療效，盡管隨著介入技術(shù)的發(fā)展及新型藥物洗脫支架的應用，PCI再狹窄率已有顯著降低，但仍有310％的發(fā)生率。因此，如何防止再狹窄成為冠心病治療領(lǐng)域的研究熱點之一。SCHWARTZ等研究表明，再狹窄的病理基礎(chǔ)是新生內(nèi)膜增生，而新生內(nèi)膜形成過程中，由于血管損傷，血管結(jié)構(gòu)破壞，使血管平滑肌細胞VULARSMOOTHMUSCLECELLVSMCS由中膜層向內(nèi)膜層遷移，并在包括血管緊張素ⅡANGIOTENSINⅡ，ANGⅡ在內(nèi)的多種因子作用下，發(fā)生表型變化，由收縮型轉(zhuǎn)為分泌型，并分泌大量細胞因子、炎癥因子，反過來又加速了VSMCS在局部的增殖以及炎癥細胞浸潤，導致新生內(nèi)膜形成，從而最終導致支架內(nèi)再狹窄。因此，遷移增殖的VSMCS的平滑肌細胞是增厚的新生內(nèi)膜的主要組織學成分。而抑制VSMCS的遷移增殖也就成為防治再狹窄的一個重要靶點。ANGⅡ是一多向作用因子，它與不同的受體亞型結(jié)合產(chǎn)生不同的生物學作用，血管緊張素Ⅱ1型受體ANGⅡTYPE1RECEPT，AT1R介導產(chǎn)生促進細胞增殖、抑制細胞凋亡、增強血管收縮等作用血管緊張素Ⅱ2型受體ANGⅡTYPE2RECEPT，AT2R卻與之相拮抗。由于AT2R在成年動物體內(nèi)表達較少或不表達，因此，在新生內(nèi)膜形成過程中，ANGⅡ主要通過AT1R作用導致和加速新生內(nèi)膜的形成。如果某種方法能夠增強AT2R的表達，則可通過其與AT1R相拮抗的作用來抵消AT1R的生物學效應，從而達到抑制血管新生內(nèi)膜形成的目的。這是本課題立題的理論基礎(chǔ)。研究目的1以增強型綠色熒光蛋白ENHANCEDGREENFLUESCENTPROTEIN，EGFP作為基因轉(zhuǎn)染示蹤物，構(gòu)建EGFPAT2R融合蛋白的真核表達載體，轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的大鼠VSMCS。2檢測AT2R基因在大鼠VSMCS中的MRNA及蛋白表達水平證實可通過真核表達載體成功轉(zhuǎn)染VSMCS并獲得較好表達率。3檢測AT2R高表達對VSMCS的增殖與凋亡的影響證實AT2R在VSMCS的表達可明顯抑制其增殖并促進其凋亡，從而為AT2R基因治療血管再狹窄RESTENOSISRS的進一步研究奠定基礎(chǔ)。研究方法1用組織塊貼壁法原代培養(yǎng)大鼠胸主動脈VSMC；倒置顯微鏡行形態(tài)學觀察并使用免疫熒光法檢測ΑSMACTIN鑒定VSMCS。2以PUHD103AT2R質(zhì)粒為模板，PCR擴增AT2R基因的全長CDNA序列再將其克隆入載體PEGFPN2，構(gòu)建其真核表達載體PEGFPN2AT2R。3脂質(zhì)體LIPOFECTAMINE2000對VSMCS進行AT2R轉(zhuǎn)染；倒置熒光顯微鏡觀測轉(zhuǎn)染后VSMCS生長變化，用RTPCR及WESTERNBLOT檢測AT2R在其中的表達情況。4通過MTT試驗，檢測AT2R基因?qū)Υ笫骎SMCS增殖能力影響WESTERNBLOT檢測AT2R對VSMC的增殖細胞抗原PCNA的影響。5流式細胞術(shù)檢測AT2R基因?qū)Υ笫骎SMCS促凋亡作用。研究結(jié)果1本實驗利用組織塊貼壁法成功地培養(yǎng)了大鼠VSMCS，并由形態(tài)學及免疫熒光細胞化學證實，為進一步實驗提供了平臺；2PEGFPN2AT2R成功構(gòu)建，經(jīng)測序與NCBI基因庫報道序列完全一致。3AT2R轉(zhuǎn)染VSMCS后，熒光顯微鏡下檢測其陽性表達率大約在40％，經(jīng)RTPCR及WESTERNBLOT證實重組真核表達載體PEGFPN2AT2R轉(zhuǎn)染組的AT2R基因MRNA及蛋白表達水平高于未轉(zhuǎn)染組及PEGFPN2轉(zhuǎn)染組。4轉(zhuǎn)染AT2R基因組MTT吸光度值（0141±0015），明顯低于未轉(zhuǎn)染組（0315±0031）和PEGFPN2轉(zhuǎn)染組（0295±0023），而未轉(zhuǎn)染組和PEGFPN2轉(zhuǎn)染組之間無差異；WESTERNBLOT發(fā)現(xiàn)PEGFPN2AT2R轉(zhuǎn)染組PCNA蛋白的表達顯著低于PEGFPN2轉(zhuǎn)染組及未轉(zhuǎn)染組，表明AT2R高表達后能夠下調(diào)PCNA蛋白表達，與MTT法檢測細胞增殖結(jié)果一致。5流式細胞術(shù)表明與未轉(zhuǎn)染組和PEGFPN2轉(zhuǎn)染組比較，轉(zhuǎn)染AT2R基因可以促進VSMCS早期凋亡。研究結(jié)論1真核表達載體PEGFPN2AT2R成功構(gòu)建并在VSMCS中穩(wěn)定表達2AT2R基因與VSMCS增殖能力密切相關(guān)，AT2R過表達可顯著下調(diào)PCNA蛋白表達，亦可明顯抑制VSMCS增殖活性。3流式細胞儀檢測的細胞凋亡結(jié)果表明，AT2R轉(zhuǎn)染表達后，體外培養(yǎng)的VSMCS凋亡明顯增加，這一作用對抑制VSMCS增殖是有益的。

簡介：目的研究正常成體小鼠肝細胞的增殖能力和分化潛能分離正常成體小鼠肝臟內(nèi)可能存在的干細胞或祖細胞并建立體外培養(yǎng)的細胞模型研究其基本的生物學特性。方法應用改良的SEGLEN二步法灌注和離心分離肝臟細胞將肝細胞初步分為肝臟實質(zhì)細胞PARENCHYMALHEPATOCYTESPH部分和富含AHPCADULTHEPATICPROGENITCELLSAHPC部分對兩部分的細胞用添加胎牛血清FBS的改良DMEM培養(yǎng)基進行培養(yǎng)持續(xù)觀察超過60天分析兩部分中肝細胞的形態(tài)學差異以及通過細胞增殖和克隆的形成情況分析兩部分中肝細胞增殖能力的差異。應用免疫熒光技術(shù)對具有高增殖能力細胞及其形成的克隆進行ALBUMIN、AFP、CK19、CKIT、CD45、CD34、OCT4、DESMIN、CD16、THY1和NESTIN等染色分析細胞標記物的表達和克隆內(nèi)細胞的成熟分化情況。利用形態(tài)學觀察、記錄細胞增殖狀況以及免疫熒光染色技術(shù)初步分析肝臟非實質(zhì)細胞NONPARENCHYMALCELLNPC的生長對于AHPC活化、增殖和分化的影響。另外嘗試了AHPC克隆的傳代培養(yǎng)。結(jié)果本研究中兩部分肝細胞均獲得較高的產(chǎn)量和活性＞90％完全滿足實驗的需要。PH部分和富含AHPC部分的肝細胞大小分別為3703±665ΜM和2263±204ΜM存在明顯的統(tǒng)計學差異P＜005但在大小分布比例上存在小部分的重疊。兩部分的貼壁細胞中均含有NPC污染其中富含AHPC部分較多占貼壁細胞總數(shù)的703％NPC增殖后肝細胞活化并開始增殖所有的肝細胞克隆均表達肝星狀細胞標記物DESMIN。富含AHPC部分的肝細胞增殖能力明顯較PH部分高兩部分的克隆形成率分別為2145％±125％和028％±009％P＜0001。富含AHPC部分中約135％的貼壁肝細胞在接種后第2～3天活化并迅速增殖第4～5天形成小的細胞克隆極少數(shù)細胞05％～1％在接種后第3天即可形成克隆培養(yǎng)30天后克隆內(nèi)出現(xiàn)類似成熟的肝細胞細胞克隆可持續(xù)擴增超過60天最大克隆面積達到064MM2細胞平均增殖超過10個周期。貼壁后24小時所有的肝細胞均強陽性表達肝細胞標記物ALBUMIN不表達AFP和CK19培養(yǎng)第5天細胞克隆開始表達ALBUMIN和AFP第30天克隆內(nèi)部分細胞表達膽管細胞標記物CK19同時發(fā)現(xiàn)ALBUMIN陰性細胞。通過免疫熒光雙染發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)第30天AHPC克隆內(nèi)同時存在ALBUMIN陽性和AFP陽性、ALBUMIN陽性和AFP陰性、ALBUMIN陽性和CK19陰性、CK19陽性和AFP陰性、CK19陽性和AFP陽性的細胞。另外AHPC可以傳代培養(yǎng)超過60天傳代培養(yǎng)中貼壁的AHPC克隆內(nèi)細胞較小核漿比率大呈上皮樣細胞的形態(tài)部分細胞仍然具有獨立形成克隆的能力但觀察發(fā)現(xiàn)AHPC克隆解離為細胞團進行傳代培養(yǎng)中細胞的增殖比解離為單細胞傳代好。結(jié)論1在正常成體小鼠肝臟內(nèi)存在一種肝臟組織特異性的成體肝臟祖細胞AHPC并已成功建立了體外培養(yǎng)的細胞模型。2小鼠AHPC體外培養(yǎng)活化后可持續(xù)克隆性增殖超過60天并可連續(xù)傳代培養(yǎng)具有向肝細胞和膽管細胞分化的雙向分化潛能。3肝臟非實質(zhì)細胞NPC的生長可以促進AHPC的增殖、成熟和分化。4與國外文獻報導的肝臟祖細胞相比小鼠AHPC體外培養(yǎng)中細胞表型不同具有較高的增殖能力和明顯的雙向分化潛能為肝細胞移植、肝臟發(fā)育和肝病等研究提供了一種新的肝臟干細胞模型和研究工具。