溫度誘導(dǎo)的脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(TIL1)參與擬南芥雌配子發(fā)育研究.pdf

1、脂質(zhì)運(yùn)載蛋白家族是一大類細(xì)胞外小蛋白，分布在質(zhì)膜的周圍并廣泛存在于細(xì)菌、原生生物、節(jié)肢動(dòng)物、脊索動(dòng)物和植物中。擬南芥中的脂質(zhì)蛋白只有一種稱為溫度誘導(dǎo)的脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(TIL1)，定位在細(xì)胞質(zhì)膜，在擬南芥的根、莖、葉、花和角果中均有表達(dá)，對(duì)擬南芥種子萌發(fā)、營養(yǎng)生長、開花時(shí)間、葉片的衰老以及種子的產(chǎn)量均無明顯影響。已有研究結(jié)果表明，TIL1基因主要參與擬南芥對(duì)逆境脅迫的調(diào)控，包括對(duì)溫度、光照、高鹽和氧化物等脅迫的調(diào)控。
　　本研究觀察了

2、T-DNA插入TIL1編碼基因的突變體Salk_136775c的表型，發(fā)現(xiàn)角果結(jié)實(shí)率下降，突變體有明顯育性降低表型。綜合運(yùn)用多種現(xiàn)代生物技術(shù)，對(duì)TIL1參與雌配子體發(fā)育的機(jī)理進(jìn)一步分析探討，主要結(jié)果如下:
　　1.角果結(jié)實(shí)率觀察發(fā)現(xiàn)，til1-1突變體結(jié)實(shí)率下降約20％育性降低明顯，未發(fā)育為種子的胚珠呈白色的小點(diǎn)，而突變體til1-2和til1-3也均有育性降低表型，由此推測(cè)，TIL1基因參與種子發(fā)育過程，til1-1突變體在合子

3、發(fā)育早期或配子體發(fā)育過程中有缺陷。
　　2.半定量RT-PCR和實(shí)時(shí)熒光定量Q-PCR分析表明，T-DNA插入使得TIL1基因敲除，導(dǎo)致其功能缺失，引起til1-1突變體育性降低表型。
　　3.分別以去除雄蕊的til1-1突變體的雌蕊為母本、野生型擬南芥的花粉為父本，純合的ms-1雌蕊為母本、til1-1突變體的花粉為父本，分別進(jìn)行雜交試驗(yàn)。結(jié)果表明，til1-1突變體的胚珠敗育發(fā)生在配子體發(fā)育時(shí)期，而不是合子發(fā)育早期。

4、r>　　4.Alexander染色和花粉離體培養(yǎng)結(jié)果表明，til1-1突變體雄配子體發(fā)育正常，突變體育性缺陷不是來源于雄配子體。
　　5.胚珠透明實(shí)驗(yàn)表明til1-1突變體胚珠功能大孢子能正常的形成，并能正常進(jìn)行三次連續(xù)的有絲分裂過程，但大孢子在進(jìn)一步的發(fā)育過程中發(fā)生敗育，造成成熟雌配子體發(fā)育缺陷，影響突變體育性。
　　6.用野生型擬南芥TIL1基因與綠色熒光蛋白基因GFP構(gòu)建融合表達(dá)載體轉(zhuǎn)化til1-1突變體，可以明顯恢復(fù)

5、育性降低表型，并發(fā)現(xiàn)TIL1基因在成熟雌配子胚囊中富集表達(dá)，在幼苗莖的維管組織和根中也有表達(dá)。
　　7.在突變體til1-1中At2g33830和At2g27420分別是上調(diào)幅度和下調(diào)幅度最大的兩個(gè)基因，但與之對(duì)應(yīng)的Salk098437c和Salk_085797c兩個(gè)突變體并無育性降低的表型，證明At2g33830和At2g27420基因與TIL1基因突變引起的育性降低表型無直接關(guān)系。
　　上述結(jié)果表明，TIL1基因突變，擬