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文檔簡介
1、本文以重要的腸外營養(yǎng)用藥——丙谷二肽的酶法制備為核心內容,設計完成了包括引入保護基、催化肽鍵合成、脫保護基三步構成的完整合成工藝路線,并對主要酶促合成工藝條件進行了分析優(yōu)化;在此基礎上,引入CLEA技術,對合成中涉及的兩種重要酶制劑——木瓜蛋白酶和青霉素G?;高M行新型固定化酶技術開發(fā),優(yōu)化制備條件,考察催化性質,表征形貌結構;同時,開展CLEA微囊化方法的探索研究,為丙谷二肽的高收率、低成本制備提供有益參考,主要研究結果如下:
2、 酶促合成丙谷二肽:以木瓜蛋白酶和青霉素G酰化酶為主要反應用酶,成功制得丙谷二肽;全套反應由引入保護基、木瓜蛋白酶酶促肽鍵合成和青霉素G?;复呋摫Wo三步構成,各步反應收率最終為86.41%,30.5%和94.8%,總收率為24.98%。;合成過程中,采用HPLC-MS、核磁等手段對產物進行檢測鑒定;同時,開發(fā)了以制備色譜為主的目標物分離提純方法。
木瓜蛋白酶催化phac-Ala-Gln的合成:反應由動力學控制,通
3、過優(yōu)化工藝條件,得出在pH8.8,25℃,助溶劑乙醇添加量為1.5mL,游離酶濃度0.02g/mL,Gln濃度0.5mol/L,Phac-Ala-OMe濃度0.05mol/L,添加KCl濃度為0.1mol/L,反應160min情況下,合成苯乙?;Wo的丙谷二肽收率最高,可達30.5%;將木瓜蛋白酶CLEA應用于反應,15h時收率為9.32%:針對CLEA技術應用中存在的顆粒較小,不利于工業(yè)化應用的問題,提出囊化解決方案,制得6種木瓜蛋白
4、酶CLEA微囊,對結構性質進行表征,其中實心海藻酸鈣微囊酶活保留最高,達53.42%。
青霉素G?;复呋摫Wo基生成Ala-Gln:將青霉素G?;赣坞x酶應用于Ala-Gln的合成,反應0.33h,收達94.8%;制備得到青霉素G?;窩LEA,優(yōu)化條件為:飽和硫酸銨溶液為沉淀劑,與酶液體積比為2.3:1時為最適用量,戊二醛為交聯(lián)劑,濃度0.35%,交聯(lián)時間為2h,溫度4℃,最終酶活保留可達52.61%;所得CLEA的最
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