載卡巴他賽PCL6500-PEG5000 納米膠束抗乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、目前，在女性的癌癥死亡病例當(dāng)中，乳腺癌占有很大的比例，其較高的死亡率主要是因?yàn)槿橄侔┘?xì)胞擁有較高的轉(zhuǎn)移性。據(jù)報(bào)道，90％以上的乳腺癌患者晚期都會(huì)發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移，最常見(jiàn)的是肺部轉(zhuǎn)移。因此在治療乳腺癌時(shí)有效地抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移就顯得意義重大。本文采用的方案是構(gòu)建一種高分子納米載藥系統(tǒng)對(duì)抗癌藥物進(jìn)行包載，實(shí)現(xiàn)藥物對(duì)腫瘤原發(fā)部位和轉(zhuǎn)移灶的靶向治療。
　　在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始階段我們建立了高效液相色譜法對(duì)卡巴他賽進(jìn)行體外分析。通過(guò)全波長(zhǎng)掃描我們選定了最適

2、合的檢測(cè)波長(zhǎng)230n m;查閱文獻(xiàn)并經(jīng)過(guò)實(shí)際實(shí)驗(yàn)摸索確定最終的液相色譜條件；該檢測(cè)方法專屬性良好，輔料的引入不會(huì)對(duì)峰形和峰位產(chǎn)生干擾；在不同的藥物濃度條件下的回收率均在95%?105%之間，表明了輔料同樣不會(huì)影響藥物含量的測(cè)定；在1μg/mL—400μg/m L藥物濃度范圍內(nèi)，藥物濃度與液相色譜峰面積存在良好的線性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)R2=0.99991;日間進(jìn)樣和日內(nèi)進(jìn)樣結(jié)果的精密度都達(dá)到方法學(xué)要求，RSD值均小于2%，表明測(cè)定方法穩(wěn)定；藥

3、物含量測(cè)定結(jié)果與標(biāo)示的理論濃度比值在99.36%?102.784之間，測(cè)量準(zhǔn)確度較高。通過(guò)眾多的方法學(xué)驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)證明了所建立的高效液相色譜法體外分析卡巴他賽的可行性良好。
　　選用聚乙二醇(PEG)進(jìn)行修飾的聚己內(nèi)酯（PCL)(PCL6500—PEG5000)做為載體材料，采用薄膜水化超聲法對(duì)抗癌藥卡巴他賽（Cabazitaxel)進(jìn)行了包載，形成載藥納米膠束（PCM)。在體外對(duì)納米膠束的粒徑、電位、形態(tài)、包封率、載藥量、釋藥行為

4、、血液中的分散穩(wěn)定性進(jìn)行考察。結(jié)果顯示：制備的PCM表面圓整均一，在水溶液中的強(qiáng)度平均粒徑50.13±11.96nm，分布PDI為0.256，帶有負(fù)電荷（-2.03±0.12 m V)對(duì)藥物卡巴他賽的包封率高達(dá)97%，表明模型藥物能夠被載體系統(tǒng)很好地包載;將PCM分散在pH7.4緩沖鹽中，隨時(shí)間變化，粒徑在24 h內(nèi)變化不超過(guò)24 nm；對(duì)分散在pH7.4和pH5.0兩種PBS的納米聚合物膠束的包封率按時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示包封率并未

5、隨時(shí)間改變，均在97%左右，說(shuō)明藥物能夠在血液循環(huán)系統(tǒng)中穩(wěn)定存在而不會(huì)提前將藥物泄漏。
　　選用高轉(zhuǎn)移性的4T1乳腺癌細(xì)胞作為用藥對(duì)象，分別考察了載藥納米膠束和卡巴他賽注射液對(duì)細(xì)胞毒性、細(xì)胞攝取和腫瘤細(xì)胞侵襲迀移能力的影響。結(jié)果表明：腫瘤細(xì)胞能夠?qū){米聚合物膠束大量攝取，共定位結(jié)果顯示富集在細(xì)胞質(zhì)中。在極低的藥物濃度（10ng/m L)下，腫瘤細(xì)胞的侵襲和迀移活動(dòng)就能被很好地抑制，卡巴他賽注射液組的細(xì)胞只有9.25%迀移到Tran

6、swell膜的另一面和89.1%的侵襲抑制，而PCM抑制了91%以上的細(xì)胞迀移和90%的細(xì)胞侵襲。表明了PCM能夠?qū)θ橄侔┘?xì)胞的轉(zhuǎn)移產(chǎn)生顯著的抑制效果。同時(shí)，細(xì)胞毒性結(jié)果顯示了在10 ng/mL濃度下，細(xì)胞存活率在80%以上，細(xì)胞能夠正常生長(zhǎng)。
　　本文在nu/nu裸鼠身上種植高轉(zhuǎn)移性乳腺癌4T1細(xì)胞構(gòu)建了乳腺癌皮下瘤模型，用以評(píng)價(jià)納米聚合物膠束在體內(nèi)的分布和PCM對(duì)乳腺癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的抑制效果。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：隨時(shí)間推移，PCM

7、能在腫瘤處大量富集，8h最大，隨后被代謝。離體結(jié)果顯示納米膠束在腫瘤分布顯著高于其他器官，其次是在肺部有聚集。與生理鹽水組比較，注射液組（CTX)和PCM都能對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)產(chǎn)生顯著性的抑制，分別只有對(duì)照組腫瘤大小的35.5±6.2%和25.8±5.8%。載藥納米膠束組抑制效果略優(yōu)于普通注射液。肺轉(zhuǎn)移結(jié)果顯示普通卡巴他賽注射液有86%左右的轉(zhuǎn)移抑制率，如果對(duì)藥物進(jìn)行高分子聚合物包載后轉(zhuǎn)移抑制效果得到更進(jìn)一步的提升。
　　上述結(jié)果表明：