嗜熱自養(yǎng)甲烷桿菌二硫鍵異構(gòu)酶活性結(jié)構(gòu)及其功能研究.pdf

1、嗜熱自養(yǎng)甲烷桿菌，形態(tài)上微型桿狀或絲狀，無(wú)孢子，也不運(yùn)動(dòng)，最適生長(zhǎng)溫度為65℃，是一種專性厭氧嗜熱古菌。嗜熱自養(yǎng)甲烷桿菌二硫鍵異構(gòu)酶(MtPDI)具有促進(jìn)蛋白質(zhì)二硫鍵的形成和異構(gòu)化的功能，具有分子伴侶活性，在宿主熱損傷修復(fù)中起著重要的作用。本文對(duì)嗜熱自養(yǎng)甲烷桿菌進(jìn)行脅迫處理，發(fā)現(xiàn)逆境處理后MtPDI的表達(dá)量會(huì)增加，并且脅迫處理后的嗜熱自養(yǎng)甲烷桿菌菌株形態(tài)會(huì)發(fā)生變化。為進(jìn)一步研究MtPDI活性結(jié)構(gòu)域中的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)，本文通過(guò)生物信息學(xué)推

2、測(cè)了MtPDI的活性結(jié)構(gòu)域（C74PAC77），通過(guò)對(duì)MtPDI的活性結(jié)構(gòu)域進(jìn)行定點(diǎn)突變，從而研究突變后二硫鍵異構(gòu)酶的酶活性是否發(fā)生變化以及其在逆境中發(fā)揮的作用是否減弱。結(jié)果如下：
　　1.MtPDI活性結(jié)構(gòu)域中C74，C77位點(diǎn)進(jìn)行突變后，MtPDI(C74S)，MtPDI(C77S)，MtPDI(C74S/C77S)的還原酶活性都有所下降，降低的百分比分別為32.2％，40.7%和51.2%，雙突變對(duì)酶活性影響相比單點(diǎn)突變大。

3、但C74，C77位點(diǎn)進(jìn)行突變對(duì)MtPDI的分子伴侶活性沒(méi)有影響。
　　2.熱處理后，突變體MtPDI(C74S)，MtPDI(C77S)，MtPDI(C74S/C77S)對(duì)大腸桿菌的熱損傷保護(hù)明顯低于MtPDI，但是在鹽脅迫中，突變前與突變后的菌株長(zhǎng)勢(shì)變化不明顯。
　　綜上所述，MtPDI活性結(jié)構(gòu)域C74，C77位點(diǎn)氨基酸是其還原酶活性起主要作用的氨基酸。并且對(duì)MtPDI活性結(jié)構(gòu)域中C74，C77位點(diǎn)進(jìn)行突變會(huì)影響MtPDI