綿馬貫眾總間苯三酚類化合物的富集、分離及其抑菌作用研究.pdf

1、綿馬貫眾為鱗毛蕨科植物粗莖鱗毛蕨（Dryopteris crassirhizoma Nakai）的干燥根莖及葉柄殘基，又名東北貫眾，味苦，性微寒，歸胃、膽經(jīng)，有小毒，具有殺菌除蟲(chóng)、清熱解毒、殺菌驅(qū)蟲(chóng)等功效。臨床上主要用于治療流感病毒、原蟲(chóng)真菌感染等疾病。目前綿馬貫眾的研究主要集中在抗瘧、抗腫瘤等方向，而在抑制真菌、細(xì)菌上研究的較少，尤其是對(duì)臨床常見(jiàn)皮膚癬菌的抑制作用研究較少。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)，民間藥香鱗毛蕨中的間苯三酚類化合物有較好

2、的抑菌作用[60]，綿馬貫眾與香鱗毛蕨是同科同屬的植物，富含間苯三酚類化合物。因此本文擬對(duì)綿馬貫眾中的間苯三酚類化合物富集工藝進(jìn)行優(yōu)化，對(duì)總間苯三酚類化合物和各流份進(jìn)行抑菌作用的篩選，對(duì)篩選的有效的流份進(jìn)行化學(xué)成分的分離，并對(duì)得到的化學(xué)成分進(jìn)行真菌和細(xì)菌的抑制作用研究。
　　主要研究?jī)?nèi)容：
　　1、綿馬貫眾間苯三酚化合物的富集：采用正交的方法，以總間苯三酚含量為指標(biāo)，篩選總間苯三酚類化合物的提取、純化工藝。
　　2、采

3、用M38-A2微量稀釋法，對(duì)總提物及各流份進(jìn)行抑菌作用篩選。篩選其對(duì)紅色毛癬菌、犬小孢子菌、須癬毛癬菌、石膏樣小孢子菌4種真菌，金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸埃希菌4種細(xì)菌的抑菌活性，測(cè)定最小抑菌濃度（MIC）。
　　3、采用硅膠、凝膠柱色譜法，半制備液相，重結(jié)晶等方法對(duì)上述篩選的有效流份進(jìn)行化學(xué)成分的分離，根據(jù)單體化合物的理化性質(zhì)、波譜數(shù)據(jù)、顯色反應(yīng)等，解析出化合物結(jié)構(gòu)式。
　　4、采用M38-A2微量稀釋法

4、，對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行抑菌作用的篩選。篩選其對(duì)紅色毛癬菌、犬小孢子菌、須癬毛癬菌、石膏樣小孢子菌4種真菌，金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸埃希菌4種細(xì)菌的抑菌活性，測(cè)定最小抑菌濃度（MIC）。
　　主要研究結(jié)果：
　　1、最佳富集工藝為：采用料液比1:15，提取3次，每次24h，浸提。濃縮比例1:8，pH為2.5酸化沉淀。
　　2、總提物及各流份的抑菌活性順序?yàn)椋嚎偺嵛?B1>D2>D1>F>C>B2>A

5、，G、H基本無(wú)效。
　　3、從有效流份中分離得到10個(gè)間苯三酚類化合物，通過(guò)理化性質(zhì)、顯色以及波譜數(shù)據(jù)分析，鑒定出10個(gè)間苯三酚類化合物。分別為：1-(2,4,6-Thihydroxyphenyl) Butan-1-one（ Y1），1-(2,4,6-Thihydroxy phenyl-3-methyl) Butan-1-one（ Y2），1-(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy phenyl-5-methyl)

6、Butan-1-one（ Y3），1-(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy-phenyl)-1-Butanone（Y4）,Flavaspidic acid AA（黃綿馬酸AA）（Y7），F(xiàn)lavaspidic acid PB（黃綿馬酸PB）（Y5），Norflavaspidic acid AB（Y6）， Filixic acid ABA（綿馬酸ABA）（Y8），F(xiàn)lavaspidic acid AB（黃綿馬酸AB）（Y9

7、）, Filixic acid ABP（綿馬酸ABP）（Y10）。其中化合物1-(2,4,6-Thihydroxyphenyl) Butan-1-one，1-(2,4,6-Thihydroxy phenyl-3-methyl) Butan-1-one，1-(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy phenyl-5-methyl) Butan-1-one，1-(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy-phenyl)

8、-1-Butanone為首次從綿馬貫眾中得到。
　　4、通過(guò)M38-A2方法，對(duì)上述10個(gè)間苯三酚類化合物進(jìn)行抑菌試驗(yàn)。結(jié)果顯示，抑制紅色毛癬菌活性大小順序?yàn)椋篎ilixic acid ABA>Flavaspidic acid PB、Norflavaspidic acid AB，其余無(wú)效。抑制須癬毛癬菌活性大小順序?yàn)椋篎ilixic acid ABA>Norflavaspidic acid AB、Flavaspidic acid

9、AA，其余無(wú)效。抑制石膏樣小孢子菌活性大小順序?yàn)椋篎ilixic acid ABA＞Flavaspidic acid AA＞1-(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy-phenyl)-1-Butanone，其余無(wú)效。抑制犬小孢子菌活性大小順序?yàn)椋篎ilixic acid ABA>Norflavaspidic acid AB、1-(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy phenyl-5-methyl) Buta

10、n-1-one> Flavaspidic acid AA>Flavaspidic acid PB>Flavaspidic acid AB，其余無(wú)效。
　　抑制金黃色葡萄球菌活性大小順序?yàn)椋篎ilixic acid ABA＞Norflavaspidic acid AB、Filixic acid ABP＞Flavaspidic acid PB＞1-(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy phenyl-5-methyl)

11、Butan-1-one、1-(2,4,6-Thihydroxy phenyl-3-methyl) Butan-1-one>Flavaspidic acid AB，其余無(wú)效。抑制表皮葡萄球菌活性大小順序?yàn)椋篎ilixic acid ABA> Filixic acid ABP>1-(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy phenyl-5-methyl) Butan-1-one、Norflavaspidic acid AB>1-

12、(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy-phenyl)-1-Butanone、 Flavaspidic acid AA、1-(2,4,6-Thihydroxy phenyl-3-methyl) Butan-1-one，其余無(wú)效。分離得到的化合物對(duì)于大腸埃希菌和綠膿桿菌無(wú)效。
　　其中，F(xiàn)ilixic acid ABA抑制真菌的作用較好，抑制紅色毛癬菌的MIC為40μg/mL，抑制須癬毛癬菌的MIC為20μg/mL，抑

13、制石膏樣小孢子菌的MIC為40μg/mL，抑制犬小孢子菌的MIC為10μg/mL。Filixic acid ABP和Filixic acid ABA抑制細(xì)菌的作用較好。Filixic acid ABP抑制金黃色葡萄球菌的MIC為20μg/mL，抑制表皮葡萄球菌的MIC為20μg/mL。Filixic acid ABA抑制金黃色葡萄球菌的MIC為2.5μg/mL，抑制表皮葡萄球菌的MIC為2.5μg/mL。陽(yáng)性藥頭孢西丁抑制金黃色葡萄球菌