蜂膠中黃酮類化合物的富集分離研究.pdf

1、蜂膠是自然界中黃酮含量最高、種類最多的物質(zhì)，具有廣泛的生物藥理學(xué)價(jià)值。國(guó)內(nèi)因生產(chǎn)技術(shù)水平的問(wèn)題，所得蜂膠產(chǎn)品中總黃酮含量較低，影響出口價(jià)格，如何提高蜂膠總黃酮含量是現(xiàn)今急需解決的問(wèn)題。另外，蜂膠中單體黃酮若能逐個(gè)分離，將對(duì)有關(guān)于黃酮的新藥開發(fā)與研究有著重大的意義。本文主要圍繞蜂膠總黃酮的提取和單體黃酮的分離進(jìn)行研究。 蜂膠黃酮類含量測(cè)定方法研究：比較了AlCl<,3>比色法和NaNO<,2>-Al(NO<,3>)<,3>比色法測(cè)

2、定蜂膠總黃酮，研究表明，AlCl<,3>比色法測(cè)定蜂膠總黃酮含量更可靠。研究了測(cè)定過(guò)程中顯色劑濃度、放置溫度及時(shí)間等對(duì)測(cè)定的影響，確立了快速準(zhǔn)確測(cè)定蜂膠總黃酮的方法，蜂膠中總黃酮與AlCl<,3>絡(luò)合形成穩(wěn)定的黃色配合物，在波長(zhǎng)420nm處測(cè)定顯色吸光度，以蘆丁為標(biāo)樣，在0～40μg/mL范圍內(nèi)，服從比耳定律，回歸方程A=0.0237p-0.0004，r=0.9997。方法的平均加樣回收率達(dá)97.8％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.6％，

3、檢測(cè)限為0.002mg/mL。 樹脂法富集蜂膠總黃酮工藝研究：1)醇提水沉法制備蜂膠乙醇水溶液作為樹脂法富集蜂膠總黃酮的樣品液。通過(guò)單因素及正交實(shí)驗(yàn)探討了蜂膠水溶液制備條件對(duì)總黃酮得率的影響，結(jié)果顯示影響總黃酮得率的因素主次順序?yàn)榧铀?乙醇中溶解的蜂膠量>溫度>時(shí)間。2)通過(guò)合成不同物理、化學(xué)性能的大孔樹脂研究樹脂骨架結(jié)構(gòu)、比表面積、孔徑對(duì)吸附蜂膠總黃酮的影響。研究發(fā)現(xiàn)極性共聚單體(甲基丙烯酸甲酯或丙烯酰胺)的加入、較大的比表

4、面積和孔徑對(duì)吸附總黃酮都有利。合成富集總黃酮條件較優(yōu)的樹脂(2％丙烯酰胺共聚單體、比表面積700m<'2>/g，孔徑14nm的大孔苯乙烯樹脂)對(duì)蜂膠總黃酮工藝進(jìn)行研究，得出大孔樹脂法富集蜂膠總黃酮的條件：35℃下靜態(tài)吸附5h，動(dòng)態(tài)洗脫時(shí)75％(v/v)乙醇為最佳洗脫劑，7Bv用量即能洗脫90％以上吸附在柱上的總黃酮。最終產(chǎn)物的總黃酮含量為36～38％，相對(duì)于未經(jīng)樹脂法處理的蜂膠中25％左右的總黃酮含量有較大提高，總回收率70％以上。

5、 黃酮單體分離研究：1)通過(guò)pH梯度萃取法分離了蜂膠中酸性不同的7,4′-二羥基類黃酮和7-羥基類黃酮。研究了酸化pH對(duì)最終產(chǎn)物中黃酮單體含量及回收率的影響。最終分別得產(chǎn)物1(主要含蘆丁11.8％、楊梅素12.7％、槲皮素17.7％和芹菜素3.9％)、產(chǎn)物2(柯因16.1％、高良姜素12.4％)、產(chǎn)物3(松屬素15.3％)，相對(duì)于未經(jīng)分離的乙醇提取蜂膠中這幾種單體黃酮含量提高了2～13倍不等。2)通過(guò)硅膠薄層層析研究了硅膠處理?xiàng)l件及