超高效液相色譜-超臨界流體色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時測定嬰幼兒配方乳粉中多種維生素的研究.pdf

1、嬰幼兒成長過程中對維生素的需求僅靠母乳是很難得到滿足的，因此在嬰幼兒配方奶粉中添加各種維生素營養(yǎng)強化劑是十分必要的，要保證嬰幼兒配方奶粉的質(zhì)量，必須嚴(yán)格監(jiān)控維生素的含量是否滿足要求。依據(jù)維生素的性質(zhì)主要可分為水溶性維生素（如C、B族）和脂溶性維生素（如維生素A、D、E、K）等二十多種。目前奶粉中添加維生素含量的檢測方法主要有微生物法、光譜法、色譜法等。同時由于需檢測的維生素種類繁多，樣品前處理和檢測方法上又無法相互兼容，因此整個檢測過程

2、費時、費力，而且不能滿足同時快速檢測的要求。
　　本文基于維生素的物理化學(xué)性質(zhì)，分別建立了14種水溶性維生素和4種脂溶性維生素同時檢測的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法（Ultra-performance liquid chromatography tendem mass spectrometry，UPLC-MS/MS），以及5種脂溶性維生素同時檢測的超臨界流體色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（Supercritical fluid chromato

3、graphy tendem mass spectrometry，SFC-MS/MS），不僅可以大大縮短分析時間、減少工作量、提高了效率，還減少了有機(jī)試劑的使用；分別利用標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控奶粉對方法的適用性進(jìn)行了考察，結(jié)果表明，方法靈敏準(zhǔn)確，可為嬰幼兒配方奶粉中多種維生素的同時檢測提供技術(shù)支持。主要研究內(nèi)容與研究結(jié)果如下：
　　1、采用UPLC-MS/MS法建立了同時測定嬰幼兒配方奶粉中的14種水溶性維生素的分析方法。分別對配方奶粉的樣品前處

4、理條件、色譜分離和質(zhì)譜分析條件進(jìn)行了優(yōu)化，利用三重四級桿質(zhì)譜的多反應(yīng)監(jiān)測（Multi-reaction monitor，MRM）檢測模式下和內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果表明，利用三氯甲烷進(jìn)行簡單有效的蛋白沉淀后，單個樣品儀器分析時間僅為6min，14種維生素的呈現(xiàn)良好線性相關(guān)性（R2>0.9961），檢測限分別為維生素C3.0μg/L，?；撬?5μg/L，其他目標(biāo)物≤0.3μg/L，兩種質(zhì)控奶粉的含量測定結(jié)果均能在限制范圍內(nèi)，日內(nèi)精密度0.60％～

5、8.78%，日間精密度0.80%～23.29%，測定結(jié)果與國標(biāo)方法相比偏差<15%。將本方法應(yīng)用于市售奶粉樣品，檢測結(jié)果合格。
　　2、利用UPLC-MS/MS建立了一種快速、靈敏的能同時測定嬰幼兒配方奶粉中脂溶性維生素A、D2、D3、α-生育酚的分析方法。利用MRM模式檢測和內(nèi)標(biāo)法定量。對色譜、質(zhì)譜檢測條件和樣品皂化過程的條件進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明：維生素A、D2、D3、α-生育酚在20～200μg/L范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（R2>

6、0.9960），回收率分別為97.54%、107.5%、88.06%和101.0%；檢測限分別為0.6、3.0、0.4和0.06μg/L；日內(nèi)和日間精密度均小于10%。本方法簡便有效，檢測結(jié)果準(zhǔn)確靈敏，可用于嬰幼兒配方奶粉中上述脂溶性維生素含量的同時測定。
　　3、采用SFC-MS/MS法，結(jié)合皂化法進(jìn)行樣品前處理，建立了同時檢測脂溶性維生素D2、D3、E、K1、K2的分析方法。維生素D2、D3、E、K1、K2分別在0.1～1.0

7、、0.05～0.5、0.5～5.0、0.5～5.0、0.5～5.0mg/L內(nèi)線性關(guān)系良好(R2≥0.9975)，經(jīng)內(nèi)標(biāo)校正操作損失和質(zhì)譜基質(zhì)效應(yīng)后，回收率分別從89.61%、95.57%、104.0%、78.77%、70.05%提高到100.9%、98.67%、106.4%、105.8%和96.85%，日內(nèi)精密度≤8.71%，日間精密度≤12.54%，檢測限分別為25、30、15、1.5、6.0μg/L，可滿足配方奶粉中脂溶性維生素含量

8、的測定的要求。
　　4、利用SFC/MS/MS技術(shù)，建立了檢測嬰幼兒配方奶粉中的維生素K1、K2的含量的分析方法。用酶解法進(jìn)行樣品前處理，依次優(yōu)化了酶種類、酶解時間、溫度等條件，解決了皂化法中維生素K堿不耐受的問題，使用外標(biāo)法定量，維生素K1、K2的回收率為108.6%和97.65%，日內(nèi)和日間精密度分別小于13.02%和10.57%，可滿足配方奶粉中脂溶性維生素含量的測定的要求。該方法不需使用同位素內(nèi)標(biāo)校正，簡化了步驟，可滿足配

9、方奶粉中維生素K1、K2的測定要求。
　　5、針對以上方法建立過程出現(xiàn)的一些明顯的質(zhì)譜現(xiàn)象及其機(jī)理進(jìn)行了探討，質(zhì)譜的響應(yīng)的影響因素有溶劑pH、溶劑離子強度、其他物質(zhì)的離子化競爭、樣品基質(zhì)效應(yīng)、離子源種類等，其中煙酰胺的峰形會隨著溶劑的pH的降低有明顯分裂和前延；維生素B1的響應(yīng)會隨著pH的降低或離子強度的增加而增加；脂溶性維生素A、D、E、K在使用UPLC-MS/MS法和SFC-MS/MS法分析時，ESI源和APCI源呈現(xiàn)出不同優(yōu)