雞肌肉中哌嗪殘留液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜確證分析方法的研究.pdf

1、哌嗪是畜牧業(yè)中最為常用的驅(qū)蟲(chóng)藥，臨床上不合理的使用造成其殘留于動(dòng)物性食品中，對(duì)人類(lèi)健康及生態(tài)平衡造成威脅。目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于動(dòng)物性食品中哌嗪殘留檢測(cè)的方法報(bào)道很少，利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)雞肌肉中哌嗪的殘留分析方法尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究以京海黃雞為試驗(yàn)素材，建立了雞肌肉中哌嗪殘留高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)法(HPLC-MS/MS)和超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)法(UP LC-MS/MS)，為動(dòng)物性食品中哌嗪殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的制定提供科學(xué)依據(jù)

2、。主要研究結(jié)果如下:
　　1、建立了雞肌肉中哌嗪殘留提取和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）確證檢測(cè)方法。肌肉樣品經(jīng)乙腈與三氯乙酸混合溶液提取，正己烷去脂，Strata-X-C固相萃取小柱凈化，依次用2.0％甲酸、甲醇、超純水淋洗和10.0％氨水乙腈洗脫，氮?dú)獯蹈珊?，?fù)溶上機(jī)檢測(cè)，以Waters SunFireTM C18（5μm，150.0mm×4.6mm i.d）為色譜柱，0.1％甲酸水溶液(A)和甲醇(B)為流動(dòng)

3、相，梯度洗脫，流速為0.4mL/min，電噴霧正離子模式(ESI+)電離，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM)檢測(cè)，外標(biāo)法定量。哌嗪在雞肌肉中1.0～200.0μg/kg范圍內(nèi)，其定量子離子的色譜峰面積與其濃度呈線性相關(guān)，且線性關(guān)系良好，決定系數(shù)R2=0.9997。當(dāng)添加哌嗪在50.0、100.0和200.0μg/kg三個(gè)濃度水平時(shí)，平均回收率分別為86.43％±4.28％、88.63％±3.51％和82.22％±1.28％，對(duì)應(yīng)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(R

4、SD)分別為4.95％、3.97％和1.56％。日內(nèi)RSD在2.19％～5.96％,日間RSD在3.21％～7.29％。在HPLC-MS/MS檢測(cè)技術(shù)條件下，哌嗪在雞肌肉中的檢測(cè)限(LODs)為0.3μg/kg（S/N≥3），定量限(LOQs)為1.0μg/kg（S/N≥10）。哌嗪在定量限添加水平時(shí)，回收率為76.24％±4.73％，日內(nèi)和日間RSD分別為7.08％和9.16％。方法的確定限(CCα)與檢測(cè)容量(CCβ)分別為103.

5、0μg/kg和106.0μg/kg。
　　2、建立了雞肌肉中哌嗪殘留提取和超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)確證檢測(cè)方法。肌肉樣品經(jīng)乙腈與三氯乙酸混合溶液提取，正己烷去脂，固相萃取凈化。色譜柱為Waters ACQUITYUPLC(R) HSS T3（1.8μm，100.0mm×2.1 mm i.d.），0.1％甲酸水溶液(A)和甲醇(B)為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為0.2mL/min，電噴霧正離子模式(ESI+)電離

6、，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）檢測(cè)，外標(biāo)法定量。哌嗪在雞肌肉中1.0～200.0μg/kg范圍內(nèi)，其定量子離子的色譜峰面積與其濃度呈線性相關(guān)，且線性關(guān)系良好，決定系數(shù)R2=0.9995。當(dāng)添加哌嗪在50.0、100.0和200.0μg/kg三個(gè)濃度水平時(shí)，平均回收率分別為102.93％±4.70％、111.46％±5.88％和105.68％±5.15％，對(duì)應(yīng)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為4.57％，5.28％和4.87％。日內(nèi)RSD在2.4

7、3％～4.32％，日間RSD在3.61％～5.78％。在UPLC-MS/MS檢測(cè)技術(shù)條件下，哌嗪在雞肌肉中的檢測(cè)限(LODs)為0.4μg/kg（S/N≥3），定量限(LOQs)為1.0μg/kg（S/N≥10）。哌嗪在定量限添加水甲時(shí)，平均回收率為83.26％±8.92％，日內(nèi)和日間RSD分別為10.69％和12.83％。方法的確定限(CCα)與檢測(cè)容量(CCβ)分別為106.0μg/kg和113.0μg/kg。
　　對(duì)建立的兩