雞組織和蛋中二硝托胺及其代謝產(chǎn)物殘留氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜確證分析方法的研究.pdf

1、二硝托胺是一種有效的硝基酰胺類抗球蟲藥，在禽類生產(chǎn)中應(yīng)用十分廣泛。然而，長期連續(xù)不規(guī)范用藥會(huì)使藥物以原形藥物或代謝產(chǎn)物的形式在禽類組織中累積，造成禽組織中獸藥殘留。長期食用含有二硝托胺及其代謝產(chǎn)物的動(dòng)物食品及其制品，獸藥會(huì)在人體中累積，對(duì)人類健康造成威脅。目前，關(guān)于二硝托胺及其代謝產(chǎn)物（3-氨基-5-硝基鄰甲苯酰胺，3-ANOT）在家禽組織中的殘留確證分析方法主要為液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，而用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀器分析方法對(duì)禽組織中二硝托

2、胺及其代謝產(chǎn)物殘留檢測(cè)的研究還未見報(bào)道。本研究以京海黃雞為試驗(yàn)素材，利用加速溶劑萃取和固相萃取技術(shù)，建立了雞肌肉、肝臟、腎臟、皮膚+脂肪及雞蛋中二硝托胺及其代謝產(chǎn)物殘留氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜確證分析方法(GC-MS/MS)，為動(dòng)物源性食品中二硝托胺及其代謝產(chǎn)物殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的制定提供科學(xué)依據(jù)，為殘留監(jiān)控提供新的技術(shù)手段。本試驗(yàn)主要研究結(jié)果如下:
　　1.首次分別建立和優(yōu)化了采用加速溶劑萃取儀(ASE350)從雞組織（肌肉、肝臟、腎臟、皮

3、膚+脂肪）和雞蛋中同時(shí)提取二硝托胺及其代謝產(chǎn)物殘留的方法。乙腈作為提取溶劑，樣品與硅藻土研磨混勻裝填入萃取池，80℃、1500 psi條件下，在線去脂（正己烷作為除脂劑）與二硝托胺及其代謝產(chǎn)物萃?。ㄒ译孀鳛檩腿┻B續(xù)進(jìn)行。當(dāng)二硝托胺及其代謝產(chǎn)物添加水平分別為定量限(LOQ)、0.5MRL（最高殘留限量）、1MRL、2MRL時(shí)，雞肌肉、肝臟、腎臟、皮膚+脂肪樣品中二硝托胺及其代謝產(chǎn)物的平均回收率均在81.96％-94.31％之間，相對(duì)標(biāo)

4、準(zhǔn)偏差均在1.72％-5.37％之間;雞蛋清、蛋黃和全蛋樣品中二硝托胺及其代謝產(chǎn)物的平均回收率均在82.74％-87.49％之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均在1.73％-4.63％之間。該提取方法節(jié)省溶劑、樣品基質(zhì)影響小、萃取效率高、回收率高、方便、快速和全自動(dòng)。
　　2.首次分別建立和優(yōu)化了雞組織（肌肉、肝臟、腎臟、皮膚+脂肪）和雞蛋中同時(shí)檢測(cè)二硝托胺及其代謝產(chǎn)物殘留的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)確證檢測(cè)方法。采用 EI模式，全掃

5、描（SCAN）定性，Auto SRM結(jié)合外標(biāo)法定量，在空白肌肉、腎臟、皮膚+脂肪、蛋清中添加二硝托胺及其代謝產(chǎn)物L(fēng)OQ-200.0μg/kg濃度范圍內(nèi)，定量離子對(duì)的色譜峰面積與其濃度呈線性相關(guān)，且線性關(guān)系良好，決定系數(shù)(R2)均高于0.9993;在空白肝臟中添加二硝托胺及其代謝產(chǎn)物L(fēng)OQ-1600.0μg/kg濃度范圍內(nèi)，定量離子對(duì)的色譜峰面積與其濃度呈線性相關(guān)，且線性關(guān)系良好，決定系數(shù)(R2)高于0.9993;在空白蛋黃和全蛋中添加二

6、硝托胺及其代謝產(chǎn)物L(fēng)OQ-1800.0μg/kg濃度范圍內(nèi)，定量離子對(duì)的色譜峰面積與其濃度呈線性相關(guān)，且線性關(guān)系良好，決定系數(shù)(R2)均高于0.9995。精密度測(cè)定結(jié)果:當(dāng)二硝托胺及其代謝產(chǎn)物添加水平分別為定量限(LOQ)、0.5MRL（最高殘留限量）、1MRL、2MRL時(shí)，雞肌肉、肝臟、腎臟、皮膚+脂肪樣品中二硝托胺及其代謝產(chǎn)物日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均在1.87％-5.74％之間，日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均在3.34％-7.36％之間;雞蛋清、蛋黃

7、和全蛋樣品中二硝托胺及其代謝產(chǎn)物日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均在2.96％-5.21％之間，日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均在3.94％-6.34％之間。在優(yōu)化的試驗(yàn)條件下，二硝托胺及其代謝產(chǎn)物在雞肌肉、肝臟、腎臟、皮膚+脂肪中的檢測(cè)限(LOD)在0.8-2.5μg/kg（S/N≥3），LOQ在2.7-8.0μg/kg（S/N≥10）;二硝托胺及其代謝產(chǎn)物在雞蛋清、蛋黃和全蛋中的LOD在0.8-2.8μg/kg（S/N≥3），LOQ在3.0-10.0μg/kg（