鼻咽癌論文：人肝素酶rna干擾腫瘤侵襲腫瘤增殖

1、鼻咽癌論文：人肝素酶 RNA 干擾腫瘤侵襲腫瘤增殖【提示】本文僅提供摘要、關(guān)鍵詞、篇名、目錄等題錄內(nèi)容。為中國學(xué)術(shù)資源庫知識(shí)代理，不涉版權(quán)。作者如有疑義，請(qǐng)聯(lián)系版權(quán)單位或?qū)W校?！菊垦芯勘尘凹澳康膼盒阅[瘤對(duì)人類健康造成嚴(yán)重的威脅。侵襲性生長方式和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移性生長往往引起腫瘤原發(fā)灶以外的播散,也是影響預(yù)后的重要因素。研究表明,惡性腫瘤細(xì)胞侵襲性生長的特性由多種因素調(diào)控。因此,揭示這些惡性侵襲機(jī)制對(duì)于腫瘤的基礎(chǔ)研究和臨床治療方式選擇具有非常

2、重要的意義。鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma, NPC)是一種全球分布具有顯著區(qū)域性的惡性腫瘤,西方國家較為少見。在南部中國和東南亞洲有較高的發(fā)病率,年發(fā)病率約為 20 例/10 萬人。每年全球新發(fā)病例約 8 萬人,死亡人數(shù)約 5 萬人。鼻咽癌發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜,包括病毒感染,基因不穩(wěn)定和環(huán)境因素。目前公認(rèn)為 EB 病毒感染對(duì)地方性和非地方性鼻咽癌的發(fā)病具有重要作用。EB 病毒最初在鼻咽癌患者血清中被發(fā)現(xiàn),繼而人們

3、又在鼻咽癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn) EB 病毒 DNA 和核抗原,進(jìn)一步確證了 EB 病毒與鼻咽癌發(fā)病關(guān)系密切。研究證實(shí)針對(duì) EB 病毒的衣殼抗原(VCA)的抗體鑒定和患者血漿 EB 病毒 DNA 檢出對(duì)鼻咽癌的預(yù)后具有價(jià)值。但是近來多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)這種預(yù)后評(píng)判仍然不具穩(wěn)定性,而且臨床應(yīng)用價(jià)值仍有待考證。隨著分子生物技術(shù)的發(fā)展,研究發(fā)現(xiàn)多種信號(hào)分子在鼻咽癌細(xì)胞中表達(dá)異常,包括信號(hào)受體如表皮生長因子受體(EGFR)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、間質(zhì)-上皮

4、轉(zhuǎn)換因子(c-MET),以及胞內(nèi)有絲分裂信號(hào)通路 PI3K/AKT/mTOR 的抑制、缺氧誘導(dǎo)因子la(HIF-1a)的表達(dá)異常人肝素酶(Heparanase, Hpa)是一種內(nèi)源性糖pGenesil-1;將人工合成的 dsDNA 采用基因克隆的方式裝載至酶切后的質(zhì)粒中,并測序鑒定和擴(kuò)增備用。3.培養(yǎng)鼻咽癌細(xì)胞株 CNE-2,用Lipofectamine 將重組干擾質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染進(jìn) CNE-2 細(xì)胞；經(jīng)過抗生素 G418 篩選 4 周；從

5、殘存細(xì)胞中挑取單個(gè)細(xì)胞克隆,擴(kuò)大培養(yǎng)并備用。4.RT-PCR 檢測單克隆 CNE-2 中 Hpa 的 RNA 表達(dá)；以及 Western blot 檢測單克隆 CNE-2 細(xì)胞中 Hpa 蛋白的表達(dá)水平,通過對(duì)比未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的 CNE-2 細(xì)胞,確定干擾質(zhì)粒對(duì) CNE-2 細(xì)胞內(nèi)肝素酶表達(dá)的影響。5.采用 MTT 試驗(yàn)和 Transwell 體外侵襲試驗(yàn)檢測 RNA 干擾肝素酶后 CNE-2 細(xì)胞增殖生長能力、侵襲能力的抑制程度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果

6、 1.免疫組織化學(xué)檢測鼻咽癌原發(fā)灶及同一病例癌旁正常組織內(nèi)的 Hpa表達(dá)發(fā)現(xiàn),鼻咽癌原發(fā)灶內(nèi)有顯著的 Hpa 蛋白表達(dá),而同一病例癌旁正常組織內(nèi)無 Hpa 表達(dá)；同時(shí)免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2,發(fā)現(xiàn)其內(nèi)有較高水平的 Hpa 表達(dá)。2.采用www.genscript.com 網(wǎng)站的在線設(shè)計(jì)工具查找肝素酶干擾序列多條,經(jīng)在線篩選原則篩選后確定得分最高的一條；合成該條干擾序列的dsDNA,并將 dsDNA 克隆至干擾載體質(zhì)粒 p

7、Genesil-1,經(jīng)測序鑒定后,命名為 pGenesil/Hpa2.采用 Lipofectamine 法將 pGenesil/Hpa 轉(zhuǎn)染至 CNE-2 鼻咽癌中,采用 G418 壓力篩選后,得到單個(gè)細(xì)胞克隆,并擴(kuò)大培養(yǎng)后細(xì)胞亞株命名為 CNE-2/Hpa-。3. RT-PCR 結(jié)果表明,干擾組 CNE-2/Hpa-中 Hpa 的 mRNA 表達(dá)水平相對(duì) CNE-2 顯著降低；Western blot 檢測結(jié)果證實(shí) CNE-2/Hpa